安立國第二版動物細(xì)胞工程思考題參考答案

1、哺乳動物的克隆方法：胚胎干細(xì)胞核移植、胚胎細(xì)胞核移植、胎兒成纖維細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核哺乳動物的克隆方法：胚胎干細(xì)胞核移植、胚胎細(xì)胞核移植、胎兒成纖維細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核移植。移植。第一章第一章緒論課后習(xí)題答案緒論課后習(xí)題答案1.動物細(xì)胞工程主要有哪些內(nèi)容？這些技術(shù)有何用途？動物細(xì)胞工程主要有哪些內(nèi)容？這些技術(shù)有何用途？答：1.組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2.細(xì)胞融合與單克隆抗體技術(shù)3.細(xì)胞核移植技術(shù)4.胚胎工程技術(shù)5.干細(xì)胞技術(shù)6.轉(zhuǎn)基因技術(shù)7.

2、染色體工程細(xì)胞工程的應(yīng)用有：A.單克隆抗體的應(yīng)用：疾病診斷與治療、微量大分子物資的檢測、貴重生物活性物的分離與提純、特殊疾病治療、與藥物交聯(lián)治療疾??；B.轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用：建立疾病的動物模型、品種改良和抗病育種、“乳腺生物發(fā)應(yīng)器”、基因代替治療、異種器官移植、基因功能研究；C.細(xì)胞與組織替代治療；D.治療人類不孕癥；E.優(yōu)良品種繁育；F.生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因家畜；G.保護(hù)瀕危動物。2.追蹤動物細(xì)胞工程研究與應(yīng)用的最新進(jìn)展，并預(yù)測其發(fā)展趨勢。追蹤動

3、物細(xì)胞工程研究與應(yīng)用的最新進(jìn)展，并預(yù)測其發(fā)展趨勢。第二章第二章細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)1、體外培養(yǎng)細(xì)胞有哪些類型？其生長特點(diǎn)有什么區(qū)別？、體外培養(yǎng)細(xì)胞有哪些類型？其生長特點(diǎn)有什么區(qū)別？答：體外培養(yǎng)的細(xì)胞根據(jù)其生長方式，主要分為貼壁生長型細(xì)胞和懸浮生長型細(xì)胞。離體細(xì)胞必須貼附于底物上才能生長的細(xì)胞稱為貼壁生長型細(xì)胞。有機(jī)體的絕大部分細(xì)胞必須貼附在某一固相表面才能生存和生長。動物細(xì)胞培養(yǎng)中，大多數(shù)細(xì)胞必須貼附在固相表面才能生長，當(dāng)細(xì)胞布滿表面后即停

4、止生長。從生長表面脫落進(jìn)入液體得細(xì)胞通常不再生長而逐漸退化，這種細(xì)胞稱為單層附壁細(xì)胞。貼壁生長的細(xì)胞在活體體內(nèi)時，形態(tài)各異，而體外培養(yǎng)狀態(tài)下則在形態(tài)上比較單一而失去其在體內(nèi)時原有的特征。按照培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)，主要可分為以下幾類：成纖維細(xì)胞型、上皮型細(xì)胞、游走型細(xì)胞、多形型細(xì)胞；少數(shù)細(xì)胞類型在體外培養(yǎng)時不需要附著于底物而于懸浮狀態(tài)下即可生長，包括一些取自血、脾或骨髓的培養(yǎng)細(xì)胞，如血液白細(xì)胞、淋巴組織細(xì)胞、某些腫瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、轉(zhuǎn)化細(xì)胞等

5、，這些細(xì)胞在懸浮中生長良好，可以是單個細(xì)胞或?yàn)榧?xì)小的細(xì)胞團(tuán)，觀察使細(xì)胞呈圓形。由于懸浮生長于培養(yǎng)液中，因此其生存空間大，具有能夠提供繁殖大量細(xì)胞、傳代方便、易于收獲細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)，易于大規(guī)模生產(chǎn)，便于過程的控制。2、細(xì)胞系的生長過程包括哪些主要階段？每一生長階段各有什么特征？、細(xì)胞系的生長過程包括哪些主要階段？每一生長階段各有什么特征？答：進(jìn)行正常細(xì)胞培養(yǎng)時，不論細(xì)胞的種類和供體的年齡如何，細(xì)胞系的生長過程都經(jīng)歷原代培養(yǎng)期、傳代培養(yǎng)期和衰退

6、期（或永生化）三個階段。①原代培養(yǎng)期也稱初代培養(yǎng)期，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段，一般持續(xù)1～4周，此期細(xì)胞呈活躍的移動，可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。原代培養(yǎng)細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)5、常用的組織細(xì)胞分離方法有哪幾種？、常用的組織細(xì)胞分離方法有哪幾種？答：分散組織的方法有機(jī)械法分離和消化分離法兩種；根據(jù)組織種類和培養(yǎng)要求，宜采用相應(yīng)的方法。(1).機(jī)械分離法：A.離心分離法B.切割分離法C.機(jī)械分散法；(2).消化分離法：A.

7、胰蛋白酶消化法B.膠原酶消化法C.EDTA（螯合劑）消化法6、貼壁細(xì)胞傳代時采用何種方法？其技術(shù)關(guān)鍵是什么？、貼壁細(xì)胞傳代時采用何種方法？其技術(shù)關(guān)鍵是什么？答：貼壁細(xì)胞傳代時采用消化分離法，其技術(shù)關(guān)鍵是把握好傳代時機(jī)，消化時間要適度，消化液濃度要適宜，傳代的細(xì)胞接種數(shù)量可適當(dāng)多一些，使細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境而利于細(xì)胞生存和增殖，部分貼壁生長細(xì)胞不經(jīng)消化處理直接進(jìn)行吹打也可使細(xì)胞從壁上脫落下來，而進(jìn)行傳代。7、常用的細(xì)胞克隆化方法有哪些？簡

8、述其主要技術(shù)環(huán)節(jié)、常用的細(xì)胞克隆化方法有哪些？簡述其主要技術(shù)環(huán)節(jié)答：主要方法有：稀釋鋪板法、飼養(yǎng)層克隆法、瓊脂克隆法、毛細(xì)管克隆法、熒光激活分選法等。稀釋鋪板法：稀釋鋪板法：也稱為有限稀釋法。其原理是通過適當(dāng)?shù)南♂屵_(dá)到分離單個細(xì)胞的目的。將培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，用培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋到5～10個細(xì)胞ml后，在多孔培養(yǎng)板(一般為96孔板)各孔內(nèi)分別加入細(xì)胞懸液0.1～0.2ml，使孔內(nèi)落入細(xì)胞的幾率為每孔一個細(xì)胞。鏡檢每孔所含細(xì)胞數(shù)，標(biāo)記含單個細(xì)

9、胞的孔，培養(yǎng)一段時間后，凡在已標(biāo)記的孔中有生長增殖的細(xì)胞群即為克隆細(xì)胞。常規(guī)使用中，一般不進(jìn)行鏡檢，多采用多次克隆化培養(yǎng)得到單細(xì)胞的克隆系。飼養(yǎng)層克隆法：飼養(yǎng)層克隆法：對一些生長緩慢的細(xì)胞(如雜交瘤細(xì)胞)，單個細(xì)胞或密度極低時細(xì)胞難以存活和增殖，在培養(yǎng)皿中加入能貼壁生長的其他細(xì)胞（稱為飼養(yǎng)細(xì)胞），這些細(xì)胞不僅能起到飼養(yǎng)作用，還能清除培養(yǎng)體系中的死、傷細(xì)胞及其碎片。飼養(yǎng)細(xì)胞的存在可以促進(jìn)單個細(xì)胞生長為細(xì)胞克隆，達(dá)到克隆化目的。常用的飼養(yǎng)細(xì)

10、胞有成纖維細(xì)胞、胸腺細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞不僅能起飼養(yǎng)作用，還能清除培養(yǎng)體系中死、傷細(xì)胞及其碎片。瓊脂克隆法：瓊脂克隆法：將細(xì)胞培養(yǎng)在軟瓊脂形成的半固體培養(yǎng)基上，單個細(xì)胞可在半固體的培養(yǎng)基上增殖形成集落。常用的軟瓊脂法是在培養(yǎng)皿中先鋪一層0.5%的瓊脂，待凝固后再鋪一層0.25%的軟瓊脂，加入的細(xì)胞數(shù)要在幾率上使長出的集落是一個細(xì)胞的后代。長出集落后，再轉(zhuǎn)移到其他培養(yǎng)器中進(jìn)行擴(kuò)增分析。毛細(xì)管克隆法：毛細(xì)管克隆法：毛細(xì)管克隆細(xì)胞法是最早