三氧化二砷抑制人膽囊癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及機(jī)制探討

1、三氧化二砷抑制人膽囊癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及機(jī)制探討,復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院劉厚寶,面臨的 困境,膽囊癌的發(fā)病率逐年上升大多數(shù)患者確診時(shí)已屬中晚期切除率低放化療均不敏感5年生存率<5%,三氧化二砷,“Proud of China” “Ancient remedy performs new tricks” Science,1996,Aug 2（卷首語(yǔ)）在血液系統(tǒng)腫瘤的基礎(chǔ)和臨床取得突破性進(jìn)展在實(shí)體瘤的研究領(lǐng)域頗受關(guān)注2

2、005年底被批準(zhǔn)為治療原發(fā)性肝癌的適應(yīng)證對(duì)膽囊癌有效？？？,三氧化二砷和膽囊癌,兩者之間的研究很少國(guó)外 OVID,MEDLINE,ELSEVIER 共2篇，收錄于BBRC國(guó)內(nèi) 中文科技目錄 共15篇,臨床應(yīng)用,將As2O3用于4例中晚期膽囊癌患者，2個(gè)療程，1例獲得完全緩解（8個(gè)月） 錢軍,秦叔逵,何澤明,等.三氧化二砷注射液治療中晚期原發(fā)性肝膽癌的臨床研究[J].中華腫瘤雜志,2001,23(6):487-4

3、89,目 的,本研究旨在觀察As2O3對(duì)人膽囊癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用并探討其作用機(jī)制，期冀為將其應(yīng)用于膽囊癌臨床治療提供理論依據(jù)。,中山醫(yī)院普外科,膽囊癌細(xì)胞 GBC-SD復(fù)蘇，轉(zhuǎn)移，培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況,雌性裸小鼠BALB/c-nu/nu以0.5ml/只，皮下注射 ，觀察瘤的生長(zhǎng)情況,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期收獲細(xì)胞，以NS配置成1×106濃度,材料與方法,中山醫(yī)院普外科,材料與方法,中山醫(yī)院普外科,,

4、,,,體積,瘤重,Cyclin d1,Bcl-2表達(dá),每3天觀察實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的腫瘤體積,觀察至21天處死裸鼠，測(cè)量瘤重，并計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率,免疫組化法測(cè)定兩組腫瘤組織中Cyclin D1蛋白表達(dá)的情況,免疫組化法測(cè)定兩組腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達(dá)的情況,材料與方法,中山醫(yī)院普外科,材料與方法,公式： 　V(瘤體積)　=　a×b2 /2 (a為長(zhǎng)徑，b為短徑),,結(jié)果在SPSS11.5軟件下進(jìn)行,兩

5、組均數(shù)之間進(jìn)行t檢驗(yàn)，P <0.05表示差異有顯著性。,兩組腫瘤體積的比較,結(jié) 果,中山醫(yī)院普外科,結(jié) 果,中山醫(yī)院普外科,免疫組化對(duì)Cyclin D1表達(dá)的檢測(cè),As2O3組Cyclin D1的蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯下降,免疫組化對(duì)Bcl-2表達(dá)的檢測(cè),As2O3組Bcl-2的蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯下降,Western Blot檢測(cè)Bcl-2、Cyclin D1蛋白的表達(dá)情況,,討 論,本研究使用亞砷酸注射液10mg/kg

6、實(shí)驗(yàn)，最終發(fā)現(xiàn)亞砷酸組的瘤體積和瘤重均較陰性對(duì)照組明顯減小。其腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為46.98%。 說明10mg/kg劑量的亞砷酸能明顯抑制人膽囊癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，亞砷酸對(duì)其起到抗癌作用。,中山醫(yī)院普外科,中山醫(yī)院普外科,,,,,,,,,4. 抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，抗腫瘤血管形成，抑制VEGF的表達(dá),5. 影響腫瘤抑癌基因，癌轉(zhuǎn)移基因的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期等,1. 上調(diào)細(xì)胞凋亡促進(jìn)基因如Bax，F(xiàn)as等的表達(dá)，下調(diào)抑

7、制基因如Bcl-2等的表達(dá),2. 選擇性的抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并使其破碎壞死,3. 抑制端粒酶活性,亞砷酸（As2O3）抗癌作用的可能機(jī)制,,As2O3,討 論,Cyclin D1,細(xì)胞周期進(jìn)程的啟動(dòng)子 Cyclin D1 上升,更多細(xì)胞從靜止期進(jìn)入增殖期,腫瘤細(xì)胞增殖加快 Cyclin D1 下降,更多細(xì)胞從增殖期進(jìn)入靜止期,腫瘤細(xì)胞增殖減緩 文獻(xiàn)報(bào)道：降低乳腺癌細(xì)胞 、肝癌細(xì)胞的Cyclin D1能使癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及侵

8、襲力下降,Bcl-2與膽囊癌,40 例原發(fā)性膽囊癌中28 例Bcl-2反應(yīng)陽(yáng)性 Bcl-2表達(dá)與在膽囊癌的分期密切相關(guān) 膽囊癌組織中細(xì)胞凋亡與Bcl-2表達(dá)密切相關(guān) Bcl-2表達(dá)與膽囊癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān) 原發(fā)性膽囊癌組織中細(xì)胞凋亡與相關(guān)基因bcl-2和bax的表達(dá)[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2005,34(2)231～232,結(jié) 論,As2O3 (10mg/kg)可抑制人膽囊癌GBC細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，主要通過下調(diào)