殼聚糖絮凝沉降法對葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的影響

1、基金項目：國家科技重大專項“重大新藥創(chuàng)制”“山東省重大新藥創(chuàng)制中心建設(shè)”(2009ZX09301013)第一作者：孫星，在讀碩士研究生從事中藥炮制原理及中藥新藥的研究Tel：15953106416Email：sunxing_1234@通訊作者：林桂濤，教授，碩士生導(dǎo)師，（0531）89628590Email：linguitaoli@殼聚糖絮凝沉降法對葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的影響孫星1，盛華剛，張超，林桂濤（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，

2、山東濟南250355）[摘要摘要]目的：目的：研究殼聚糖絮凝沉降法對葛根芩連湯中黃酮及生物堿類成分的影響。方法：方法：采用正交試驗法，以葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、浸膏率作為考察指標(biāo)，研究藥液濃縮程度、殼聚糖用量、pH值對殼聚糖絮凝沉降法精制葛根芩連湯中黃酮和生物堿類成分的影響，并與乙醇沉淀方法進行了比較。結(jié)果：結(jié)果：殼聚糖絮凝沉淀法的最佳條件是藥液濃度為0.78g生藥mL1、殼聚糖加入量為10%、藥液pH值調(diào)為6，并且通過比較不同沉淀

3、方法處理后藥液中指標(biāo)性成分的變化，可知殼聚糖的沉淀效果最佳。結(jié)論：結(jié)論：殼聚糖可以有效保留藥液中有效成分，降低浸膏率，但是改變了藥液中成分的組成比例，因此選用此方法時還需慎重。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]殼聚糖；絮凝沉降法；葛根芩連湯；黃酮；異黃酮；生物堿；TheinfluenceoftheChitosanFlocculatingSettingMethodoftheflavonoidsalkaloidsofPuerariaescutellariae

4、coptidisdecoctionsoup[ABSTRACT]OBJECTIVE:TostudytheinfluenceoftheChitosanFlocculatingSettingMethodtotheflavonoidsalkaloidsofPuerariaescutellariaecoptidisdecoctionsoup.METHODS:BymeansofPuerarinbaicalinberberinehydrochlide

5、extractsrateadopttingthethogonaldesignmethodtostudytheeffectofthreefactsincludingthephysicliquconcentrateddegreepHValuetheamountofchitosanonrefiningtheextractofPuerariaescutellariaecoptidisdecoctionsoupbythechitosanflocc

6、ulatingsettingmethod.Tocomparetheeffectsofdifferentprecipitationmethodtothecompositionofflavonoidalkaloids.RESULTS:Theoptimumpurificationprocesswasthemassconcentrationcontained0.78gmL11%chitosansolution10%additionamountp

7、H6.BycomparingdifferentprecipitationmethodafterprocessingthechangeinthecompositionoftheindexesinsolutionitcanbeseenthattheFlocculatingSettingMethodisthebesteffect.CONCLUSIONS:Chitosancaneffectivelykeepsolutionofactiveing

8、redientsreducetherateofextract.Butthismethodchangesthesolutionofthecompositioncompositionproptionsochoosethemethodstillneedtobecautious.[KEYWDS]ChitosanFlocculatingSettingMethodPuerariaescutellariaecoptidisdecoctionsoup；

9、flavonoids；isoflavones；alkaloids；葛根芩連湯由葛根、黃芩、黃連、炙甘草4味中藥組成，具有解表清里，升清止痢之功效。近幾年來，殼聚糖絮凝沉淀法用于中藥提取液的澄清顯示了較好的效果[14]。為了進一步研究殼聚糖絮凝沉淀法對含黃酮類及生物堿類成分中藥成分的影響，本實驗選用含黃酮類成分的中藥葛根、黃芩和含生物堿類成分中藥黃連的葛根芩連湯進行了研究，以有效成分的含量、浸膏率作為考察指標(biāo)，研究了殼聚糖絮凝沉降法的最佳

10、條件，并與傳統(tǒng)的乙醇沉淀法進行了比較。1儀器與材料儀器與材料1.1儀器：Agilent1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），色譜柱：KromasilC18(5m、4.6mm200mm)，日立UV3010紫外分光光度計，十萬分之一電子分析天平（梅特勒公司提供），離心機（LD510，北京醫(yī)用離心機廠），pH計（PHS3C，上海三信儀表廠），超聲處理器（KQ250E，江蘇昆山超聲儀器公司）。1.2材料：中藥材購自濟南建聯(lián)中藥店，質(zhì)量均符合

11、2010年版《中國藥典》一部相應(yīng)品種項下的相關(guān)規(guī)定。殼聚糖（山東奧康生物科技有限公司提供）；葛根素對照品（批號：110752200511），黃芩苷對照品（批號：110715200514），鹽酸小檗堿對照品（批號：2.2.6回收率試驗采用加樣回收率試驗，結(jié)果葛根素，黃芩苷回收率分別為：97.5%，98.1%，表明測定方法能夠準(zhǔn)確的測定出樣品中兩種成分的含量。2.2.7殼聚糖絮凝沉淀液中葛根素、黃芩苷的測定吸取供試品溶液和對照品溶液20L注

12、入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表22.3殼聚糖絮凝沉淀液中小檗堿的測定2.3.1色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；二元梯度流動相，A為磷酸緩沖鹽（0.02molKH2PO4998.6mlH3PO41.4mL）溶液，加三乙胺調(diào)pH6.0；B為乙腈；0~10min(A：90%，B：10%)，10~25min(A：90~75%，B：10~25%)，25~35min(A：75~65%，B：2535%)，35~45min(A：65~60%，B

13、：35~50%)，45~50min(A：50~10%，B：90~100%)，流速：1.0mLmin1，柱溫：25℃，檢測波長：268nm。2.3.2供試品溶液的制備：供試品溶液同葛根和黃芩供試品溶液。2.3.3線性關(guān)系考察：吸取鹽酸小檗堿對照品甲醇溶液（89.6gmL1）0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2mL，置于5mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取各濃度的對照品溶液20L，注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件測定。以峰

14、面積Y對濃度進行線性回歸，得回歸方程：Y=25.184X3.164r=0.9998（n=6）。結(jié)果表明在鹽酸小檗堿3.584~35.84gmL1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.3.4穩(wěn)定性試驗：吸取供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24h如法測定，結(jié)果小檗堿24h均穩(wěn)定，峰面積RSD分別為2.36%。2.3.5重復(fù)性試驗：對同一樣品，連續(xù)取樣5次，制備供試品溶液，如法測定，結(jié)果小檗堿測定結(jié)果的變異系數(shù)RSD分別為1.96%。2.3.6回收

15、率試驗：采用加樣回收率試驗，結(jié)果小檗堿回收率平均為98.6%，表明測定方法能夠準(zhǔn)確的測定出樣品中兩種成分的含量。2.3.7殼聚糖絮凝沉淀液中小檗堿的測定吸取供試品溶液和對照品溶液20L注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見表2。表2殼聚糖絮凝沉淀試驗結(jié)果殼聚糖絮凝沉淀試驗結(jié)果試驗號ABC葛根素mgg1黃芩苷mgg1小檗堿mgg1111118.0916.084.65212217.3215.645.81313317.0417.686.63421218