18-生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)--吳憲-folin法測(cè)定血糖含量

1、吳憲吳憲FolinFolin法測(cè)定血糖含量測(cè)定血糖含量【目的】【目的】1掌握吳憲Folin法測(cè)定血糖含量的實(shí)驗(yàn)方法。2熟悉吳憲Folin法測(cè)定血糖含量的實(shí)驗(yàn)原理?！驹怼俊驹怼挎u酸鈉（Na2WO4）和硫酸作用，生成鎢酸，可沉淀血液樣品中的蛋白質(zhì)濾除蛋白質(zhì)沉淀即可制得無(wú)蛋白血濾液，此血濾液中的葡萄糖具有還原性與鹼性銅試劑共熱可使蘭色的二價(jià)銅離子（Cu2）還原成紅色的氧化亞銅（Cu2O）沉淀。氧化亞銅再使無(wú)色的磷鉬酸還原成蘭色的鉬蘭。顏色

2、深淺與葡萄糖含量成正比。因此，將血濾液和經(jīng)同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡葡萄溶液分別進(jìn)行比色，即可求出血糖含量。其反應(yīng)如下：1鹼性銅試劑內(nèi)的反應(yīng)2定糖顯色反應(yīng)【器材】【器材】1Folin吳氏定糖管2中號(hào)試管3電爐及加熱器4刻度吸管5微量移液器6漏斗試劑（ml）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管無(wú)蛋白血濾液2.0葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液2.0蒸餾水2.0鹼性銅試劑2.02.02.0充分混勻，置沸水浴準(zhǔn)確煮沸8分鐘，取出切勿搖動(dòng)，以自來(lái)水沖冷3分鐘，各加磷鉬酸試劑2.0ml?；靹?，

3、放置3分鐘，待蘭色反應(yīng)完全后，將上述各管加蒸餾水稀釋至12.5ml刻度處，用拇指或手掌堵嚴(yán)管口，倒轉(zhuǎn)1～2次，充分混勻，放置10分鐘后，于波長(zhǎng)620nm處，以空白管調(diào)零點(diǎn)，進(jìn)行比色，分別讀取并記錄各管吸光度值?！居?jì)算】【計(jì)算】血糖濃度（mgdl）＝血糖濃度(mmolL)＝【注意事項(xiàng)】【注意事項(xiàng)】1血液不能放置過(guò)久，以免血糖分解致使含量降低。2在制備無(wú)蛋白血濾液時(shí)，加各種試劑的順序不能顛倒，每加一種試劑后應(yīng)充分振搖以免形成血塊蛋白沉淀不完

4、全。3葡萄糖與鹼性試劑的鹼性、各成分的濃度、加熱的溫度及時(shí)間等均有關(guān)。因此操作時(shí)應(yīng)力求條件恒定。4加入磷鉬酸試劑后顯色不穩(wěn)定，應(yīng)迅速進(jìn)行比色。5本法測(cè)定的是血中還原性糖的含量，所以血糖正常值為80～120mgdl或4.4～6.7mmolL，比葡萄糖氧化酶法測(cè)定值高。目前臨床多用專一性高的葡萄糖氧化酶法?！舅伎碱}】【思考題】1定糖管球部上端為何有又細(xì)又長(zhǎng)的頸？2制備無(wú)蛋白血濾液時(shí)，加入試劑的順序能否顛倒，為什么？3人空腹血糖濃度是多少？機(jī)