18-生物化學實驗--吳憲-folin法測定血糖含量

1、吳憲吳憲FolinFolin法測定血糖含量測定血糖含量【目的】【目的】1掌握吳憲Folin法測定血糖含量的實驗方法。2熟悉吳憲Folin法測定血糖含量的實驗原理。【原理】【原理】鎢酸鈉（Na2WO4）和硫酸作用，生成鎢酸，可沉淀血液樣品中的蛋白質(zhì)濾除蛋白質(zhì)沉淀即可制得無蛋白血濾液，此血濾液中的葡萄糖具有還原性與鹼性銅試劑共熱可使蘭色的二價銅離子（Cu2）還原成紅色的氧化亞銅（Cu2O）沉淀。氧化亞銅再使無色的磷鉬酸還原成蘭色的鉬蘭。顏色

2、深淺與葡萄糖含量成正比。因此，將血濾液和經(jīng)同樣處理的標準葡葡萄溶液分別進行比色，即可求出血糖含量。其反應如下：1鹼性銅試劑內(nèi)的反應2定糖顯色反應【器材】【器材】1Folin吳氏定糖管2中號試管3電爐及加熱器4刻度吸管5微量移液器6漏斗試劑（ml）測定管標準管空白管無蛋白血濾液2.0葡萄糖標準液2.0蒸餾水2.0鹼性銅試劑2.02.02.0充分混勻，置沸水浴準確煮沸8分鐘，取出切勿搖動，以自來水沖冷3分鐘，各加磷鉬酸試劑2.0ml?；靹?，

3、放置3分鐘，待蘭色反應完全后，將上述各管加蒸餾水稀釋至12.5ml刻度處，用拇指或手掌堵嚴管口，倒轉(zhuǎn)1～2次，充分混勻，放置10分鐘后，于波長620nm處，以空白管調(diào)零點，進行比色，分別讀取并記錄各管吸光度值?！居嬎恪俊居嬎恪垦菨舛龋╩gdl）＝血糖濃度(mmolL)＝【注意事項】【注意事項】1血液不能放置過久，以免血糖分解致使含量降低。2在制備無蛋白血濾液時，加各種試劑的順序不能顛倒，每加一種試劑后應充分振搖以免形成血塊蛋白沉淀不完

4、全。3葡萄糖與鹼性試劑的鹼性、各成分的濃度、加熱的溫度及時間等均有關。因此操作時應力求條件恒定。4加入磷鉬酸試劑后顯色不穩(wěn)定，應迅速進行比色。5本法測定的是血中還原性糖的含量，所以血糖正常值為80～120mgdl或4.4～6.7mmolL，比葡萄糖氧化酶法測定值高。目前臨床多用專一性高的葡萄糖氧化酶法。【思考題】【思考題】1定糖管球部上端為何有又細又長的頸？2制備無蛋白血濾液時，加入試劑的順序能否顛倒，為什么？3人空腹血糖濃度是多少？機