實(shí)驗(yàn)六-淀粉酶的專一性和溫度ph激動劑抑制劑對酶活性的影響

1、實(shí)驗(yàn)六淀粉酶的專一性和溫度、pH、激活劑及抑制劑對酶活性的影響實(shí)驗(yàn)類型：驗(yàn)證型目的和要求1.通過本實(shí)驗(yàn)觀察、驗(yàn)證酶的專一性和溫度、pH、激動劑及抑制劑對酶活性的影響。2.熟悉淀粉及其酶解產(chǎn)物的特殊顯色方法；電熱恒溫水浴的使用。3.了解唾液淀粉酶的收集與預(yù)處理。原理酶具有高度專一性，一種酶只能催化一種或一類底物發(fā)生反應(yīng)，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。當(dāng)?shù)矸郾坏矸勖笍氐姿鉃檫€原性麥芽糖和葡萄糖時(shí)，能使班氏試劑的Cu2還原成Cu1，生

2、成磚紅色Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受溫度、pH、激動劑及抑制劑、酶濃度以及作用時(shí)間等多種因素影響，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同的糊精。不同程度的水解糊精可與碘反應(yīng)生成紫色、棕色或紅色絡(luò)合物。通過上述特征性反應(yīng)，并以蔗糖等作對照，便可觀察、驗(yàn)證淀粉酶是否具有專一性以及它的催化活性是否受到影響。操作方法一、唾液淀粉酶的收集與處理1.制備唾液實(shí)驗(yàn)者先將痰咳盡，用自來水漱口，以清除口腔內(nèi)食物殘?jiān)?，再在口腔?nèi)含蒸餾水約15ml，并作咀嚼咕漱

3、運(yùn)動，3分鐘后吐入墊有兩層經(jīng)潤濕處理的脫脂紗布的漏斗內(nèi)，過濾于小燒杯中備用，為與下面稀釋唾液相區(qū)別，此稱制備唾液。2.煮沸唾液取上述唾液約2ml，盛入1中號試管中置沸水浴煮沸5分鐘備用。3.稀釋唾液調(diào)整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8、37℃和既無激動劑又無抑制劑條件下，作用5min，水解淀粉至紅色糊精為宜。具體做法是取12凹白瓷反應(yīng)板一塊，按下列步驟操作：①第1排每凹各加1滴制備唾液，12、13、14凹分別加生理鹽水1、2、3滴，用滴

4、管采用抽吸法，由稀到濃（14→12）小心混勻各凹，勿使濺入相鄰凹中。每混勻一凹便取其1滴放入同列的2排凹中，剩余稀釋唾液應(yīng)全部放回原凹中。②在盛有不同稀釋度唾液的第2排各凹中，均加入4滴緩沖液（pH6.8），2滴1%的淀粉液和2滴蒸餾水，用①混勻法充分混勻，置37℃下5min。③在第2排各凹中加I液一滴，混勻，觀察比較各凹顏色，以淺棕紅色對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，用生理鹽水稀釋3ml制備唾液備用。2.將上述各管混勻后，置37℃水浴中保溫10分鐘，

5、然后每管加入碘液1滴，混勻后觀察各管顏色的區(qū)別，并說明pH對酶促反應(yīng)的影響。五、激動劑和抑制劑影響酶活性的實(shí)驗(yàn)觀察1.取試管4支編號，按下操作：表4激動劑和抑制劑影響酶活性的實(shí)驗(yàn)觀察pH6.8緩沖液1％淀粉溶液蒸餾水0.9％NaCl1％CuSO41％Na2SO4稀釋唾液120滴10滴10滴－－－5滴220滴10滴－10滴－－5滴320滴10滴－－10滴－5滴420滴10滴－－－10滴5滴2.將上述各管放入37℃水浴中保溫10分鐘怎么減肚

6、子，然后每管加入碘液1滴，混勻后觀各管顏色的區(qū)別，并說明激動劑和抑制劑對酶促反應(yīng)的影響。注意事項(xiàng)1.反應(yīng)試管應(yīng)清洗干凈，不同酶液、試劑及其滴管不能交叉混用；2.使用混合唾液，或通過預(yù)試選出合適的唾液稀釋度，效果更為顯著。試劑和器材一、器材1.滴管、燒杯、試管（架）及試管夾。2.恒溫水浴箱與水浴鍋。3.脫脂棉、漏斗及紗布。4.白瓷反應(yīng)盤二、試劑1.1％淀粉稱取淀粉1g，岳陽家政加少量水調(diào)成糊狀，加入煮沸的0.3％NaCl溶液至100m1。