FXR激動劑對脂肪酸合酶和肝脂酶表達(dá)及活性的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是常見的心腦血管疾病，發(fā)病機(jī)制與血漿中甘油三酯(triglyceride，TG)的增高密切相關(guān)?，F(xiàn)已明確高甘油三酯血癥(hypertriglyceridemia)是引起冠心病(coronaryheartdisease，CHD)的獨立危險因素。因此，研究甘油三酯代謝對防治AS有重要意義。在調(diào)控甘油三酯代謝中法尼酯X受體(famesoidXreceptor,FXR)發(fā)揮重要作用，研究FXR

2、對甘油三酯合成代謝的調(diào)節(jié)為研究動脈粥樣硬化的發(fā)生機(jī)制及其防治開辟新的途徑。 FXR是孤兒核受體超家族中的一員，又稱膽汁酸受體。其基因定位于人類染色體12q23.1，具有FXRαl，F(xiàn)XRα2，F(xiàn)XRα3，F(xiàn)XRα4四種亞型。具有與其他典型的核受體成員相同的模式結(jié)構(gòu)，即N端依次為配體依賴的轉(zhuǎn)錄激活域(AF1)，高度保守的DBD，C末端為配體結(jié)合域(LBD)和配體依賴的轉(zhuǎn)錄激活域(AF2)。當(dāng)配體與配體結(jié)合區(qū)結(jié)合后，F(xiàn)XR空間結(jié)構(gòu)發(fā)

3、生變化，與視黃酸X受體(retinoidXreceptor，RXR)以異二聚體形式結(jié)合于靶基因啟動子區(qū)的FXR.反應(yīng)元件(FXRresponseelement，F(xiàn)XRE)，或稱為膽汁酸反應(yīng)元件(bileacidresponseelement，BARE)來調(diào)控基因的表達(dá)。典型的FXREs由反向重復(fù)的AGGTCA模序組成，反向重復(fù)序列之間有一個核苷酸相隔，即IR-1(invertedrepeatsseparatedby1bp)。 F

4、XR在肝臟、腸道、腎臟和腎上腺中高表達(dá)，而在脂肪組織和心臟、卵巢、胸腺、眼、脾臟和睪丸中表達(dá)水平較低。FXR可被內(nèi)源性配體膽汁酸激活，其中鵝脫氧膽汁酸(chenodexy-cholicacid，CDCA)為最適配體。除膽汁酸外，還有人工合成的配體，如GW4064等。配體激活后的FXR通過調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)在甘油三酯代謝、膽汁酸代謝、膽固醇代謝和脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用。 FXR調(diào)節(jié)甘油三酯代謝的靶基因主要為甘油三酯代謝中的關(guān)鍵酶，以

5、及一些重要脂蛋白和相應(yīng)受體。脂肪酸合酶(fattyacidsynthetase，F(xiàn)AS)和肝脂酶(hepaticlipase，HL)都是甘油三酯代謝中的關(guān)鍵酶，表達(dá)和活性變化與體內(nèi)甘油三酯的含量密切相關(guān)。因此，本研究以FAS和HL為研究對象，觀察FXR激動劑對其表達(dá)的影響，對于研究FXR調(diào)控甘油三酯代謝，防治AS提供了新思路。 脂肪酸合酶(fattyacidsynthetase，F(xiàn)AS)存在于肝、腎、腦、肺、乳腺及脂肪等組織，是

6、脂肪酸生物合成過程中將小分子碳單位聚合生成長鏈脂肪酸的關(guān)鍵酶。正常生理狀態(tài)下，F(xiàn)AS受很多環(huán)境、激素、飲食等因素的影響，胰島素、碳水化合物、甲狀腺激素、脂肪酸、醇等都可影響FAS的轉(zhuǎn)錄水平。FAS是脂肪酸合成反應(yīng)過程中最重要的酶，可促進(jìn)肝臟合成新的脂肪。另一個在甘油三酯代謝中發(fā)揮重要作用的酶是肝脂酶(hepaticlipase，HL)。它是一種糖蛋白，由肝細(xì)胞合成，具有磷脂酶A1和甘油三酯水解酶的活性。HL可催化殘粒脂蛋白和HDL中甘油

7、三酯和磷脂水解。大量研究證實HL在HDL代謝中發(fā)揮重要作用。此外，HL還可以作為配體促進(jìn)肝細(xì)胞攝取高密度脂蛋白(HDL)中的膽固醇或LDL殘粒、促進(jìn)肝細(xì)胞攝取含apoB類脂蛋白?？傊?，F(xiàn)AS和HL都與甘油三酯的代謝密切相關(guān)。 本研究從體內(nèi)和體外兩個方面觀察FXR激動劑對HepG2細(xì)胞和C57BL/6小鼠的FAS和HL表達(dá)的影響。主要結(jié)果總結(jié)如下： 1.用不同濃度的FXR激動劑CDCA(0μmol/L、25μmol/L、5

8、0μmol/L、75μmol/L)分別作用HepG2細(xì)胞48h和相同濃度的CDCA(75μmol/L)作用HepG2細(xì)胞0h、6h、12h、24h、48h后，采用半定量RT-PCR和WesternBlot法測得FAS的mRNA和蛋白質(zhì)水平呈時間和劑量依賴性下調(diào)。 2.用不同濃度的FXR激動劑CDCA(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L)分別作用HepG2細(xì)胞48h和相同濃度的CDCA(75μmo

9、l/L)作用HepG2細(xì)胞0h、6h、12h、24h、48h后，采用半定量RT-PCR和WesternBlot法測得HLmRNA水平和蛋白質(zhì)水平呈時間和劑量依賴性下調(diào)。 3.用不同濃度的FXR激動劑CDCA(0mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kg、90mg/kg、150mg/kg)灌胃C57BL/6小鼠7天后，取小鼠肝組織，采用半定量RT-PCR測得FAS和HLmRNA水平也有明顯下調(diào)，同時伴有HL活性的下