pcr技術(shù)

1、PCR1.生物學(xué)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)定義聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)簡稱PCR（英文全稱：PolymeraseChainReaction），聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)具體內(nèi)容點(diǎn)擊：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡稱PCR。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其英文PolymeaseChainReaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期循環(huán)進(jìn)行使目的DNA得以迅速擴(kuò)增具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、省時(shí)等特點(diǎn)。它不僅可用于基因分

2、離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究還可用于疾病病的診斷或任何有DNARNA的地方聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，簡稱PCR）又稱無細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。由美國科學(xué)家PE（PerkinElmer珀金埃爾默）公司遺傳部的Dr.Mullis發(fā)明，由于PCRPCR技術(shù)在理論和應(yīng)用上的跨時(shí)代意義，因此Mullis獲得了1993年諾貝爾化學(xué)獎。技術(shù)原理DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代

3、的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作

4、用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性退火延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。反應(yīng)體系與反應(yīng)條件標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系：10擴(kuò)增緩沖液10ul4種dNTP混合物各200umolL引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqD