1.免疫磁性海藻酸鈉復(fù)合微球的研制及在腫瘤早期診斷中的應(yīng)用;2.bira酶基因表達(dá)載體的構(gòu)建、原核表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的活性鑒定

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文1.免疫磁性海藻酸鈉復(fù)合微球的研制及在腫瘤早期診斷中的應(yīng)用;2. BirA酶基因表達(dá)載體的構(gòu)建、原核表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的活性鑒定姓名：李青申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：吳雄文;李富榮20070501華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文 3 研究磁性復(fù)合微球表面化學(xué)基團(tuán)的植入方法，在微球表面接入 6- 氨基正己酸“ 手臂” 分子，將功能基團(tuán)的手臂延伸 6 個(gè)碳原子長度，然后以兩

2、步法蛋白縮和的方法將羊抗鼠 IgG 二抗與微球聯(lián)接，制備免疫磁性微球，并對抗體交聯(lián)微球的反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)證明用此方法制備的免疫磁性微球抗體吸附量達(dá) 111.2µg/mg，交聯(lián)抗體后流式細(xì)胞術(shù)檢測 98.3％的磁性微球具有免疫活性。 3．建立腫瘤細(xì)胞磁性富集與檢測系統(tǒng)，對肺癌患者外周血微轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞進(jìn)行臨床驗(yàn)證 制備羊抗鼠 IgG 二抗包被的免疫磁性微球， 將免疫磁性分離技術(shù)與免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合建立肺癌細(xì)胞磁性富集與檢測

3、系統(tǒng)。鑒定該檢測系統(tǒng)的特異性、靈敏性和穩(wěn)定性，并進(jìn)行肺癌患者外周血腫瘤細(xì)胞的臨床驗(yàn)證。與單純的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測技術(shù)及 RT- PCR 檢測技術(shù)相比較，本論文建立的磁性富集與檢測系統(tǒng)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，進(jìn)行肺癌臨床驗(yàn)證結(jié)果顯示本檢測系統(tǒng)檢測率與 RT- PCR檢測技術(shù)所檢測的結(jié)果相當(dāng)，無顯著性差異（p>0.05） ，同時(shí)無假陽性結(jié)果出現(xiàn)，比單純的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測技術(shù)檢出率高，存在顯著差異（p<0.05） 。

4、 4．建立磁性化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物 AFP 的測定。 制備羊抗兔 IgG 二抗包被的免疫磁性微球， 將免疫磁性分離技術(shù)與化學(xué)發(fā)光技術(shù)相結(jié)合，建立磁性化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，優(yōu)化檢測系統(tǒng)的條件，鑒定其特異性、靈敏性和穩(wěn)定性，并應(yīng)用于患者外周血 AFP 的測定。實(shí)驗(yàn)證明本論文建立的磁性化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)，進(jìn)行患者外周血 AFP的測定結(jié)果有很好的臨床相符性。 本研究制備的新型納米磁性復(fù)合

5、微球，以 碳包鐵( F e @ C ) 納米顆粒作為磁性內(nèi)核，解決了氧化鐵內(nèi)核磁性能不夠的難題，性能優(yōu)良；在 交聯(lián)抗體時(shí)于微球與抗體之間連接一個(gè)手臂分子，避免了由于位阻效應(yīng)導(dǎo)致的微球表面抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合不完全的弊端，更有利于微球功能的發(fā)揮。在此基礎(chǔ)上，納米磁性復(fù)合微球作為公共載體和分離工具應(yīng)用于磁性富集與檢測系統(tǒng)和磁性化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)證明方便易行，具有廣泛的應(yīng)用前景。 【關(guān)鍵詞】反相微乳法，免疫磁性微球，富集，微轉(zhuǎn)移，化學(xué)發(fā)