nr2b轉(zhuǎn)基因犬構(gòu)建的部分基礎(chǔ)研究：ⅰ.犬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng);ⅱ.nr2b慢病毒的生產(chǎn)和鑒定

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文NR2B轉(zhuǎn)基因犬構(gòu)建的部分基礎(chǔ)研究：Ⅰ.犬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng);Ⅱ.NR2B慢病毒的生產(chǎn)和鑒定姓名：王麗潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：邢華;李厚達(dá)20070601不與成熟率呈正線性相關(guān)；在體外培養(yǎng)的時(shí)間以7 2 h 為優(yōu)，卵丘細(xì)胞對(duì)成熟率有重要作用，C O C s 組成熟率明顯高于去顆粒細(xì)胞組( 1 5 ，5 6 ％V S 3 ．1 3 ％) 。N R 2 B 蛋白與哺乳動(dòng)物的突觸性、學(xué)習(xí)記憶、痛覺(jué)、

2、神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，因此有必要建立N R 2 B 轉(zhuǎn)基因高等動(dòng)物模型來(lái)迸一步研究該亞單位的作用。本實(shí)驗(yàn)室正承擔(dān)著N R 2 B 轉(zhuǎn)基園犬的構(gòu)建項(xiàng)目，放本實(shí)驗(yàn)將為該項(xiàng)目的進(jìn)行提供N R 2 B 慢病毒，用其高效感染胚胎獲得轉(zhuǎn)基因犬。在本研究中，我們采用脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染的方法，在2 9 3 T 細(xì)胞中生產(chǎn)N R 2 B 慢病毒，并采取超速離心的方法，對(duì)收獲的慢病毒顆粒進(jìn)行濃縮、純化和滴度測(cè)定，獲得病毒最高滴度達(dá)1 ．2 x 1 0 8 T U ／

3、m l ；將生產(chǎn)的慢病毒感染P C I 2 細(xì)胞，經(jīng)抗性篩選得到穩(wěn)定傳代細(xì)胞，提取其R N A ，經(jīng)R T ．P C R能檢測(cè)到目的片段，采用W e s t e r nb l o t t i n g 進(jìn)一步驗(yàn)證，成功表達(dá)N R 2 B 蛋白，說(shuō)明該慢病毒可攜帶N R 2 B 基因轉(zhuǎn)入P C I 2 ，并穩(wěn)定表達(dá)N R 2 B 蛋白。這為該慢病毒在犬胚胎上的轉(zhuǎn)染和最終表達(dá)提供了一定依據(jù)?？傊?，本研究在體外成功培養(yǎng)的成熟卵母細(xì)胞和經(jīng)生產(chǎn)鑒定