南極深海底泥中性嗜鹽菌chromhalobactersp.njs2四氫嘧啶生物合成基因ectabc的克隆表達及四氫嘧啶生物學功能初步研究

1、廈門大學碩士學位論文南極深海底泥中性嗜鹽菌Chromhalobacter sp.NJS-2四氫嘧啶生物合成基因ectABC的克隆表達及四氫嘧啶生物學功能初步研究姓名：傅英楠申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物藥物學指導教師：楊豐;陳榮忠20080601A b s t r a c tD u e t o i t s s p e c i f i cg e o g r a p h i c a le n v i r o n m e n ta n ds

2、e a f l o o rt o p o g r a p h yf e a t u r e s ，P r y d zB a yi n A n t a r c t i c a m a i n t a i n s ah i ．g h - s a l t ，l o w - t e m p e r a t u r e a n dh i g h —d e n s i t yc h a r a c t e r i s t i c s ．T h e

3、s p e c i f i ce c o l o g i c a l e n v i r o n m e n t o f f e r s r i c hm i c r o b i a lr e s o u r c e sa n d m o s to f t h e m a r es t i l lu n k n o w n ．T I l e yo f t e nh a v es p e c i f i cp h y s i o l o

4、g yt o a d a p t t ot h es p e c i f i cc i r c u m s t a n c e s ．T h u s ，T h e ya r eg o o d m a t e r i a l sf o r t h es t u d yo f a d a p t a t i o nm e c h a n i s m i nm o d e r a t eh a l o p h i l e ．T h e m o

5、 d e r a t e h a l o p h i l e s t r a i n N J S ·- 2 w a s s e l e c t e df r o mP r y d zB a yd e e p - ·s e as e d i m e n t a n d i d e n t i f i e db y 16 S r D N A a sC h r o m o h a ] o b a c t e r s p 。

6、N J S 一2 。T h et y p e so fc o m p a t i b l e s o l u t e s a c c u m u l a t e db yt h i s s t r a i n w e r ea n a l y z e d a n di d e n t i f i e d ．D a t as h o w st h a ti t a c c u m u l a t e se c t o i n ea n d

7、 g l u t a m a t ea s t h em a i nc o m p a t i b l es o l u t e s ．T oc l o n et h eg e n e se n c o d i n ge n z y m e sf o rt h e b i o s y n t h e s i s o fe c t o i n e ，an u m b e ro fp r i m e r s w e r ed e s i g

8、 n e da c c o r d i n gt o t h e c o n s e r v a t i v e a m i n oa c i ds e q u e n c e s ．T h u s ，p a r t i a ls e q u e n c e so fe c t A B C w e r ec l o n e db yP C R u s i n gt h eg e n o m i cD N A o ft h i ss t

9、r a i n ．A f t e rm a n y t i m e so f P C R a n d i n v e r s eP C R a m p l i f i c a t i o n , w ee v e n t u a l l yg o t a2 3 7 9 b pD N A f r a g m e n t ．S o f t w a r e a n a l y s i ss h o w st h a t t h i s f r

10、 a g m e n tc o n t a i n st h r e eg e n e s e n c o d i n ge n z y m e s f o r e c t o i n eb i o s y n t h e s i s ，e c t A ，e c t B ，e c t C a n d t h e i ru p s t r e a ma n d d o w n s t r e a ms e q u e n c e s ．T

11、 h e t h r e ee n c o d i n gg e n e s ，e c t A ，e c t Ba n d e c t C , w e r ec l o n e da n de x p r e s s e di nE ．c o l iB L 2 1 ( D E 3 ) ．T h ee n z y m a t i c a c t i v i t i e s o ft h ep u r i f i e dr e c o m

12、b i n a n tp r o t e i n s ，E c t A ，E c t Ba n d E c t C ，w e r e d e t e c t e db y a d d i n g t h e i rs p e c i f i cs u b s t r a t e s ．B y t h i sm e a n s ，w e c a n v e n f y t h er e a c t i o ne q u a t i o n

13、a n d e l u c i d a t e t h eb i o s y n t h e t i cp a t h w a y f o r e c t o i n ei n v i t r o ．D a t as h o w st h a t t h e t h r e er e c o m b i n a n tp r o t e i n s h a v e s i m i l a r e n z y m a t i cp r o

14、 p e r t y ．E c t o i n e i so n e o f t h e m o s te f f e c t i v e c o m p a t i b l es o l u t e si np r o t e c t i o no f b i o l o g i c a lm a c r o m o l e c u l e s ，s u c ha sD N A o rp r o t e i n s ．T h e r

15、e f o r e ，w es t u d yt h ee f f e c to f e c t o i n es e c r e t e db yN J S ·- 2s t r a i n o nt h ep r o t e c t i o no fC u ·- Z n s u p e r o x i d e d i s m u t a s ea g a i n s th e a t i n g ，t h ep r