氧應(yīng)激狀態(tài)與心房kv1.5通道表達(dá)及功能改變?cè)谛姆款潉?dòng)發(fā)生機(jī)制中的作用

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文氧應(yīng)激狀態(tài)與心房kv1.5通道表達(dá)及功能改變?cè)谛姆款潉?dòng)發(fā)生機(jī)制中的作用姓名：王春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：谷天祥20061001材料和方法一、研究對(duì)象本實(shí)驗(yàn)標(biāo)本取自風(fēng)濕性心臟病接受心臟瓣膜置換手術(shù)患者的右心耳組織，根據(jù)患者基本心律將標(biāo)本分為心房顫動(dòng)組和竇性心律組。二、研究方法1 、R T - P C R 研究k v l ．5 通道和氧化還原酶在心房肌細(xì)胞的表達(dá)情況采用T r i z o l 法提取心

2、肌組織標(biāo)本的總R N A ，二步法R T - P C R 試劑盒首先逆轉(zhuǎn)錄合成c D N A ，再進(jìn)行k v l ．5 通道、含黃素單加氧酶一1 ( f l a v i n c o n t a i n i n gm o n o o x y g e n a s e ．1 ，F(xiàn) M O 一1 ) 、單胺氧化酶．B ( m o n o a m i n e o x i d a s e B ，M A O - B ) 、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶一1 (

3、g l u t a t h i o n ep e r o x i d a s e ．1 ，G P X 一1 ) 和血紅素加氧酶- 2 ( h e m eo x y g e n a s e 一2 ，H O ．2 ) 的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物在1 ．5 ％瓊脂糖上電泳，以G A P D H 作為內(nèi)參照，圖像掃描儀測(cè)定電泳條帶的光密度值，計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。2 、W e s t e r n B l o t 檢測(cè)k v l ．5 通道蛋白的表達(dá)提

4、取右心耳組織總蛋白，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度。電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、加用k v l ．5 和G A P D H 一抗、二抗、E C L 發(fā)光顯色、掃描計(jì)算k v l ．5 的相對(duì)表達(dá)量。3 、膜片鉗技術(shù)研究氧自由基對(duì)k v l ．5 通道的影響( 1 ) 人心房肌細(xì)胞的分離體外循環(huán)插管前取右心房組織O ．5 c m 3 ，將組織塊用預(yù)先充氧的無(wú)鈣液反復(fù)沖洗后，洗去血液和C a 2 + 后，組織塊放入含1 5 0 U ／m 1 V 型膠原