熱水浸泡檸檬接穗脫除柑桔黃龍病菌的效果

1、中 國 南 方 果 樹 ２ ０ １ ７年 第４ ６卷 第２期熱 水 浸 泡 檸 檬 接 穗 脫 除 柑 桔 黃 龍 病 菌 的 效 果郭 俊 １， 賴新樸 １， 李進學 １， 段惠芬 １， 王自然 １， 毛加梅 １， 趙 俊 １， ２， 潘 黎 １， ２， 高俊燕 １（ １ 云南省農業(yè)科學院熱帶亞熱帶經(jīng)濟作物研究所， 云南保山， ６ ７ ８ ０ ０ ０ ； ２ 瑞麗綠洲檸檬種業(yè)有限公司， 云南瑞麗， ６ ７ ８ ６ ０ ０ ）收稿日期：

2、 ２ ０ １ ６ － １ １ － ２ ４ ； 修回日期： ２ ０ １ ６ － １ ２ － １ ６基金項目： 科技 型 中 小 企 業(yè) 創(chuàng) 新 項 目 （ １ ４ Ｃ ２ ６ ２ １ ５ ３ ０ ３ ２ ８ ０） ； 現(xiàn) 代 農 業(yè) （ 柑 桔） 產(chǎn) 業(yè) 技 術 體 系 檸 檬 綜 合 試 驗 站 建 設 專 項（ Ｃ Ａ Ｒ Ｓ ２ ７ ） ； 公益性行業(yè)（ 農業(yè)） 科研專項（ ２ ０ １ ４ ０ ３ ０ ３ ６ ） ； 德宏州院士站；

3、 云南省創(chuàng)新人才培養(yǎng)對象（ ２ ０ １ ３ Ｈ Ｂ ３ １ ５ ５ ）等經(jīng)費資助。第一作者： 郭?。?１ ９ ８ ０ —） ， 女， 碩士， 助理研究員， 從事熱帶亞熱帶果樹病蟲害研究。Ｅ － ｍ ａ ｉ ｌ ： ｇ ｊ ８ ０ ０ ４ ０ １ ＠ １ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍ通信作者： 高俊燕（ １ ９ ６ ９ —） ， 女， 研究員。Ｅ － ｍ ａ ｉ ｌ ： ｒ ｌ ｌ ｍ ０ ６ ＠ １ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍＤ Ｏ Ｉ ： １

4、０ ． １ ３ ９ ３ ８ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ７ － １ ４ ３ １ ． ２ ０ １ ６ ０ ５ ９ ５摘 要 為探尋脫除檸檬枝條中柑桔黃龍病菌的熱水處理方案， 采集感染柑桔黃龍病的尤力克檸檬接穗， 進行不同溫度和不同時間的熱水浸泡處理， 調查不同處理的接穗褐化情況、 嫁接發(fā)芽情況及脫毒效果。結果表明， ４ ５ ℃熱水浸泡３ ０ｍ ｉ ｎ再４ ７ ℃熱水浸泡２ ０ ～ ３ ０ｍ ｉ ｎ 、 ３次４ ７ ℃熱水浸

5、泡１ ２ｍ ｉ ｎ 、 ４ ９ ℃熱水浸泡１ ５ｍ ｉ ｎ 、 ５ ０ ℃熱水浸泡８ｍ ｉ ｎ均能有效脫毒且接穗無褐化， 其中， ４ ５ ℃熱水浸泡３ ０ｍ ｉ ｎ再４ ７ ℃熱水浸泡２ ０ｍ ｉ ｎ和５ ０ ℃熱水浸泡８ｍ ｉ ｎ的嫁接發(fā)芽率均達到９ ３ ． ０ ％以上。關鍵詞 柑桔黃龍??； 黃龍病菌； 熱處理； 檸檬； 接穗根據(jù)病原和宿主細胞對高溫忍耐程度的差異， 進行適當溫度及時間的熱處理（ 將植物組織或器官等置于熱蒸汽、 熱水和

6、熱空氣等加熱條件下升溫） ， 可消除或鈍化寄主所帶細菌、 真菌及病毒， 達到脫毒目的 ［ １ ］。熱處理技術已運用于柑桔 ［ ２ ］、 沙梨 ［ ３ ］、 油桃 ［ ４ ］、 蘋果 ［ ５ ］、花卉 ［ ６ ］、 草莓 ［ ７ ］、 馬鈴薯 ［ ８ ］等植物的脫毒。柑桔黃龍病是一種導致柑桔減產(chǎn)和毀滅的細菌性病害 ［ ９ ］， 利用抗肽類物質或抗生素注干、 噴施及灌根等處理的效果不理想 ［ １ ０ － １ ３ ］， ２ ０世紀５ ０年代我

7、國學者采用熱處理后獲得明顯的成效 ［ １ ４ － ２ １ ］。關 于 檸 檬 接 穗 熱 處 理 脫 毒 的 報道較少。為探尋檸檬接穗熱處理脫除柑桔黃龍病菌的最佳溫度和時間， 開展了本試驗。１ 材料與方法在云南省農業(yè)科學院熱帶亞熱帶經(jīng)濟作物研究所瑞麗試驗站檸檬基地（ 瑞麗市勐秀鄉(xiāng)勐典村） ， 從感染柑桔黃龍病的６年生枳砧云檸 １ 號檸檬上采集老熟枝條。 １ ０根枝條為一捆， ３捆為一處理。在４ ５ ℃熱水中浸泡５ｍ ｉ ｎ （ 預處理）

8、 后， 自來水沖淋冷卻， 然后按不同方案（ 見表 １ ） 進行處理。處理后， 先室溫毛巾保濕 １ ２ｈ ， 再 挑選無褐 化、 芽 眼飽滿的枝條嫁接于網(wǎng)室內， 采用切接的方式， 砧木為１年生枳苗。共２ ５個處理， 每處理３次重復， 每重復嫁接２ ０株。嫁接前調查褐化率，統(tǒng)計枝條變色褐 化 的數(shù)量 占 枝 條 總 量 的 比例。嫁接后１ ６ ０ｄ統(tǒng)計嫁接發(fā)芽率（ 發(fā)芽株數(shù)占嫁接株數(shù)的比例） 及株高， 同時采集嫁接檸檬苗的成熟葉片進行柑桔

9、黃龍病菌 Ｐ Ｃ Ｒ檢測， 然后統(tǒng)計帶病率。核酸提取技術及檢測方法 參 見 董 鵬 等 ［ ２ ２ ］， 所 使 用 引 物 為 ０ Ｉ １ ／Ｏ Ｉ ２ ｃ （ 由上海生工生物工程公司合成） 。２ 結果與分析褐化率： Ｒ ０ ６ 和 Ｒ １ ４～Ｒ ２ ５ 出現(xiàn)了不同程度的褐化， 較高的是 Ｒ ２ ５和 Ｒ １ ７ 。處理按相同浸泡 時 間 分 組 （ Ｒ ０ ４ 、 Ｒ １ １ 、 Ｒ １ ５ 、 Ｒ ２ １ 和Ｒ ２ ５為一組；

10、Ｒ １ ２ 、 Ｒ １ ８ 和 Ｒ ２ ２ 為一組； Ｒ １ ３ 、Ｒ １ ９和 Ｒ ２ ３ 為 一 組； Ｒ １ ４ 、 Ｒ ２ ０ 和 Ｒ ２ ４ 為 一組； Ｒ ０ ７和 Ｒ １ ６為一組； Ｒ ０ ９和 Ｒ １ ７為一組。下同） 后比較發(fā)現(xiàn)， 同一組內隨著溫度升高，褐化越嚴 重； 溫 度 為 ５ ５ ℃ 的 各 處 理 （ Ｒ ２ ２ 、Ｒ ２ ３ 、 Ｒ ２ ４和 Ｒ ２ ５ ） ， 褐化 率在 ６ ０ ％ 以 上。說明， ５

11、 ５ ℃超過了檸檬老熟枝條能忍受的極限６ ４中 國 南 方 果 樹 ２ ０ １ ７年 第４ ６卷 第２期３ 討論在熱處理過程中， 溫度過高或時間過長會導致接穗褐化， 嫁接后不能正常發(fā)芽； 溫度過低或時間過短， 則不能有效脫除柑桔黃龍病菌。駱學海 ［ １ ９ ］的研究結果表明， 柑桔黃龍病接穗（ 甜橙） 經(jīng)４ ７ ℃熱水浸泡６ｍ ｉ ｎ即可有效脫毒。在本試驗中， 感染柑桔黃龍病的檸檬接穗經(jīng)３次４ ７ ℃熱水浸泡６ｍ ｉ ｎ （ 處理Ｒ ０

12、 ７ ） 未能有效脫毒。分析認為， 檸檬枝條較粗， 因此熱處理脫毒所需時間會更長。本研究表明， ４ ５ ℃熱水浸泡３ ０ ｍ ｉ ｎ再４ ７ ℃熱水浸泡 ２ ０～３ ０ ｍ ｉ ｎ 、 ３ 次 ４ ７ ℃ 熱 水 浸 泡 １ ２ｍ ｉ ｎ 、 ４ ９ ℃熱水浸泡１ ５ｍ ｉ ｎ 、 ５ ０ ℃熱水浸泡８ｍ ｉ ｎ均 能 有 效 脫 毒 且 接 穗 無 褐 化， 其 中， ４ ５℃熱水浸泡３ ０ｍ ｉ ｎ再４ ７℃熱水浸泡２ ０ｍ ｉ ｎ

13、和５ ０ ℃熱水浸泡８ｍ ｉ ｎ的嫁接發(fā)芽率均達到９ ３ ． ０ ％ 以 上。從 脫 毒 效 果、 接 穗 褐 化 情況、 嫁接發(fā)芽率及操作簡易性等綜合考慮， 生產(chǎn)中感染柑桔黃龍病的檸檬接穗脫除的最佳處理為５ ０ ℃熱水浸泡８ｍ ｉ ｎ 。參 考 文 獻［ １ ］王利平． 兩種線狀病毒分子變異的研究及熱處理對梨基因表達的影響［ Ｄ］ ． 武漢： 華中農業(yè)大學， ２ ０ ０ ９ ［ ２ ］ 蔣元暉， 趙學源， 蘇維芳， 等． 通過莖尖嫁接

14、脫除柑桔黃龍 病 病 原 體 ［ Ｊ ］ ． 植 物 保 護 學 報， １ ９ ８ ７ ， １ ４（ ３） ：１ ５ ８ － １ ６ ２ ［ ３ ］ 胡 晶． 變溫熱處理結合莖尖培養(yǎng)脫除沙梨離體植株潛隱病毒研究［ Ｄ］ ． 武漢： 華中農業(yè)大學， ２ ０ １ １ ［ ４ ］ Ｍ Ａ Ｎ Ｇ Ａ Ｎ Ａ Ｒ Ｉ ＳＧＡ， Ｅ Ｃ Ｏ Ｎ Ｏ Ｍ Ｏ Ｕ ＡＳ ， Ｂ Ｏ Ｕ Ｂ Ｏ Ｕ Ｒ Ａ －Ｋ Ａ ＳＩＮ， ｅ ｔａ ｌ ．Ｅ ｌ

15、 ｉ ｍ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆＰ Ｐ Ｖａ ｎ ｄＰ Ｎ Ｒ Ｓ Ｖｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙａ ｎ ｄｍ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｅ ｍ － ｔ ｉ ｐｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅｉ ｎｎ ｅ ｃ ｔ ａ ｒ ｉ ｎ ｅ ［ Ｊ ］ ． Ｐ ｌ ａ ｎ ｔＣ ｅ ｌ ｌＲ ｅ ｐ ， ２ ０ ０ ３ ， ２ ２ ： １ ９ ５ － ２ ０ ０ ［ ５ ］ 姜淑榮， 王際軒， 劉

16、志， 等． 不同蘋果品種和砧木的熱處理脫病毒效應［ Ｊ ］ ． 山西果樹， １ ９ ９ ９ （ ２ ） ： ７ － ８ ［ ６ ］ 洪艷華， 殷廣峰， 張立軍． 百合脫毒及病毒檢測技術研究進展［ Ｊ ］ ． 沈陽農業(yè)大學學報， ２ ０ ０ ３ ， ３ ４ （ ３ ）： ２ ２ ５ － ２ ２ ７ ［ ７ ］ 苗洪芹， 陳巽禎， 吳和平． 草莓熱處理脫毒技術研究初報［ Ｊ ］ ． 植物保護， １ ９ ９ ２ ， １ ８ （ ３ ） ： ２

17、 ０ － ２ １ ［ ８ ］ 劉 華， 馮 高． 熱處理防治馬鈴薯卷葉病毒的研究［ Ｊ ］ ． 中國馬鈴薯， ２ ０ ０ ２ ， １ ６ （ ６ ） ： ３ ４ ０ － ３ ４ １ ［ ９ ］ 賈志成， 鄭加強， 黃雅杰， 等． 柑桔黃龍病熱處理防治技術研究進展［ Ｊ ］ ． 農業(yè)工程學報， ２ ０ １ ５ ， ２ ３ （ ３ １ ） ： １ － ９ ［ １ ０ ］柯 沖， 王芝生． 應用抗生素防治柑桔黃龍病的研究［ Ｊ ］ ． 福建農

18、業(yè)學報， １ ９ ８ ８ ， ３ （ １ ） ： １ － １ ０ ［ １ １ ］陳乃榮， 戴月明， 吳泰旭， 等． 鹽酸四環(huán)素等藥物對柑桔黃龍病治 療 效 應 ［ Ｊ ］ ． 植 物 保 護 學 報， １ ９ ８ １ ， ８（ ３ ） ：１ ６ ３ － １ ６ ９ ［ １ ２ ］趙學源， 邱柱石， 蘇維芳， 等． 柑桔黃龍病對青霉素和四環(huán)素的反應［ Ｊ ］ ． 中國南方果樹， １ ９ ８ １ ， １ ０ （ ４ ） ： １ ７ ［ １

19、３ ］ Ｚ ＨＡ Ｎ Ｇ Ｍ Ｑ，Ｐ ＯＷＥ Ｌ ＬＡＣ，Ｚ ＨＯ ＵＬＪ ， ｅ ｔａ ｌ ．Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌｃ ｏ ｍ ｐ ｏ ｕ ｎ ｄ ｓｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅａ ｇ ａ ｉ ｎ ｓ ｔｔ ｈ ｅｃ ｉ ｔ ｒ ｕ ｓＨ ｕ ａ ｎ ｇ ｌ ｏ ｎ ｇ ｂ ｉ ｎ ｇｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｕ ｍ ‘ Ｃ ａ ｎ ｄ ｉ ｄ ａ ｔ ｕ ｓＬ ｉ ｂ ｅ ｒ ｉ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒａ ｓ ｉ

20、 ａ ｔ ｉ ｃ ｕ ｓ ’ ｉ ｎｐ ｌ ａ ｎ ｔ ａ ［ Ｊ ］ ．Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ２ ０ １ １ ， １ ０ １ （ ９ ） ： １ ０ ９ ７ － １ １ ０ ３ ［ １ ４ ］林孔湘， 駱學海， 羅志達． 柑桔種子的熱處理試驗［ Ｊ ］ ． 植物保護學報， １ ９ ８ ２ ， ９ （ ４ ） ： ２ ３ ７ － ２ ４ ３ ［ １ ５ ］駱學海， 羅 志 達， 唐 偉 文． 柑 桔

21、 黃 龍 病 熱 治 療 的 研 究［ Ｊ ］ ． 植物保護學報， １ ９ ８ １ ， ８ （ １ ） ： ４ ７ － ５ ２ ［ １ ６ ］關 磊， 梁美丹， 仇綺琪， 等． 利用熱處理技術降低柑桔黃龍病菌的濃度［ Ｃ］ ／ ／ 中國植物病理學會２ ０ １ ２年學術年會論文集， ２ ０ １ ２ ： ２ ２ ９ ［ １ ７ ］Ｄ Ｏ Ｕ Ｄ Ｍ，Ｚ ＨＡ Ｎ Ｇ Ｍ Ｑ，Ｐ ＯＷＥ Ｌ ＬＣＡ，ｅ ｔａ ｌ ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ

22、ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙａ ｎ ｄｃ ｈ ｅ ｍ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙｔ ｏｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌｃ ｉ ｔ ｒ ｕ ｓＨ Ｌ Ｂｉ ｎｔ ｈ ｅｆ ｉ ｅ ｌ ｄ［ Ｊ ］ ． Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌｏ ｆＣ ｉ ｔ ｒ ｕ ｓＰ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ，２ ０ １ ４ ， １ （ １ ）： ２ １ ３ － ２ ２ １ ［ １ ８ ］林孔湘， 駱學海． 柑桔黃梢 （ 黃龍）病熱治療的 初 步研究［ Ｊ

23、 ］ ． 植物保護學報， １ ９ ６ ５ ， ４ （ ２ ） ： １ ６ ９ － １ ７ ５ ［ １ ９ ］駱學海． 柑桔黃龍病熱水間歇消毒試驗［ Ｊ ］ ． 華南農業(yè)大學學報， １ ９ ８ ３ ， ４ （ １ ） ： ９ ７ － １ ０ ３ ［ ２ ０ ］譚祖國， 鐘炳輝， 陳 燕， 等． 紅江橙熱處理莖尖微芽嫁接脫毒方法的研究［ Ｊ ］ ． 湛江師范學院學報， １ ９ ９ ６ ，１ ７ （ ２ ） ： １ １ ３ － １ １ ５ ［

24、 ２ １ ］陳 駉， 宋瑞琳， 柯 沖． 在試管中莖尖嫁接脫除柑桔黃龍病病原 的 研 究 ［ Ｊ ］ ． 福 建 農 業(yè) 學 報， １ ９ ８ ７ ， ２（ １ ） ：６ ８ － ７ １ ［ ２ ２ ］董 鵬， 包改麗， 冉志偉， 等． 云南柑桔黃龍病病原檢測及其１ ６ Ｓｒ Ｄ Ｎ Ａ 序列分析［ Ｊ ］ ． 云南農業(yè)大學學報，２ ０ １ １ ， ２ ６ （ ５ ） ： ６ ０ ７ － ６ １ １（ 責任編輯： 李治飛

25、）歡迎郵購農業(yè)科技圖書《 香蕉菠蘿杧果優(yōu)質豐產(chǎn)技術問答》本書為九億農民致富叢書之一， 由中國農業(yè)出版社出版。內容包括： 香蕉、 菠 蘿 和 杧 果 的 經(jīng)濟栽培， 病蟲害及其防治， 果 品 貯 藏 保 鮮 等。以問答的形式， 有針對性地回答香蕉、 菠蘿 和 杧 果生產(chǎn)中常見的各類問題， 為促進我國果品生