柑桔檸檬苦素、諾米林、吖啶酮的檢測(cè)及相關(guān)含量與生物活性研究.pdf

1、以胡柚(C. changshanensis)、柚(C. grandis)、溫州蜜柑(C.unshiu)和椏柑(C. reticulata)的果實(shí)、根、枝以及葉片等不同器官和組織為試驗(yàn)材料，改進(jìn)并建立了檸檬苦素類化合物和吖啶酮生物堿的檢測(cè)與提取方法，研究了不同柑桔的不同發(fā)育階段、不同器官和組織中檸檬苦素和諾米林的含量變化，檢測(cè)了不同柑桔果實(shí)和根粗提物的抗氧化活性及柚果實(shí)囊衣檸檬苦素和諾米林粗結(jié)晶的抗氧化和抗菌活性。主要結(jié)果如下：

2、建立了一個(gè)簡(jiǎn)單、方便、高效的柑桔檸檬苦素和諾米林檢測(cè)提取方法。TLC與HPLC兩種方法相結(jié)合可有效地對(duì)柑桔檸檬苦素和諾米林進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。HPLC的檢測(cè)體系為：檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，色譜柱為C<,18>柱，甲醇：乙腈：磷酸緩沖液(pH=3.5)=10∶40∶39作為流動(dòng)相；檸檬苦素和諾米林的RSD(n=5)分別為6.48和2.90％，檢測(cè)限(S/N=3)均為0.03 μg/g。柑桔檸檬苦素和諾米林的提取采用二氯甲烷為提取液，50℃水

3、浴提取60 min，檸檬苦素和諾米林的回收率分別可達(dá)90.45和91.09％。 根據(jù)9(10H)吖啶酮結(jié)構(gòu)熒光特性建立的HPLC檢測(cè)條件為：激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為395和435 nm，色譜柱為C<,18>柱，以去離予水(A)和甲醇(B)為流動(dòng)相采用梯度洗脫的方法。該檢測(cè)體系操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，穩(wěn)定性好，得到的檢測(cè)限(S/N=3)為0.67 ng/g，在0.25-4.00μg/mL濃度范圍內(nèi)RSD(n=5)為1.29-2.85％

4、。柑桔9(10H)吖啶酮提取的優(yōu)化體系采用乙醇為提取液，在頻率和功率分別為26 kHz和500 W的條件下超聲提取60 min(30℃)，得到9(10H)吖啶酮的回收率在97.12-101.56％范圍內(nèi)。 在果實(shí)發(fā)育過(guò)程中，不同柑桔果實(shí)的油胞層、白皮層、囊衣和汁胞四種組織中檸檬苦素和諾米林的含量變化總體都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；檸檬苦素在椪柑油胞層和胡柚囊衣中的最高含量分別達(dá)到1.53和3.52 mg/g，諾米林在浙江大學(xué)博士學(xué)

5、位論文：柑桔檸檬苦素、諾米林、吖啶酮的檢測(cè)及相關(guān)含量與生物活性研究柚油胞層和胡柚囊衣中的最高含量分別達(dá)到2.82和2.92 mg/g；柚白皮層中的檸檬苦素和諾米林的含量在發(fā)育過(guò)程中保持較低的水平，始終分別低于0.09和0.08 mg/g；在成熟柚果實(shí)的囊衣中，檸檬苦素和諾米林含量呈現(xiàn)回升的現(xiàn)象，含量由采前3、w的0.0001和0.06 mg/g分別回升到了采收時(shí)的0.42和0.51mg/g。對(duì)于相桔不同器官的研究表明，檸檬苦素和諾米林在

6、柑桔的根中大量積累，二者總含量高于同期的果實(shí)、葉片和枝中的含量，在椏柑的須根中檸檬苦素和諾米林的總含量達(dá)到2.56 mg/g，同期果實(shí)、葉片和枝的含量分別為1.35、0.64和0.36 mg/g。 柚果實(shí)囊衣提取的檸檬苦素和諾米林粗品的抗氧化活性研究結(jié)果表明，粗品的抗氧化活性是等量Vc的10.34倍，四個(gè)品種柑桔根中檸檬苦素和諾米林粗提物的抗氧化活性是等量Vc的12.59-17.21倍。 柚果實(shí)囊衣提取的檸檬苦素和諾米林

7、粗結(jié)晶對(duì)細(xì)菌和霉菌生長(zhǎng)有不同程度的抑制效應(yīng)。該粗結(jié)晶對(duì)青霉和黑曲霉的抑菌圈直徑分別為2.09和2.25cm(設(shè)定的對(duì)照分別為1.26和1.25cm)，但對(duì)細(xì)菌抑制效應(yīng)不明顯，抑菌圈直徑分別為1.27和1.28 cm(設(shè)定的對(duì)照分別為1.27和1.26 cm)。 柑桔檸檬苦素和諾米林的含量和生物活性變化均呈現(xiàn)遺傳、發(fā)育階段、器官和組織的多樣性。簡(jiǎn)便、穩(wěn)定的柑桔9(10H)吖啶酮檢測(cè)與提取體系建立，為進(jìn)一步開(kāi)展柑桔吖啶酮生物堿的含量