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1、Roles of FKBP12.6 in brain ischemia injury of mice and effects of CDC42-deficiency on food intake in miceA Dissertation PresentedByMing WanMajor: Biochemistry and molecular biologySupervisor: Professor Hong-bo XinSubmitt
2、ed to the Graduate School of NanchangUniversity for the Degree ofMASTER OF SCIENCEJune, 2015School of Medicine, Nanchang University,Nanchang, 330088, P. R. China摘要II摘 要 摘 要目的: 目的:FKBP12.6 即 FK506 結(jié)合蛋白 12.6,是一種能與免疫抑制劑 FK5
3、06結(jié)合、 大小為 12.6 KD 的蛋白質(zhì)。 它可以和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣離子釋放通道 RyR2 結(jié)合,從而使 RyR2 穩(wěn)定地處于關(guān)閉狀態(tài),在穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡中發(fā)揮重要作用。腦缺血是中風(fēng)的一種,是一種常見的心腦血管疾病。腦缺血損傷時(shí)常伴有細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子異常增加,而鈣離子濃度的異常增加被認(rèn)為是腦缺血損傷的重要機(jī)制。 由于 FKBP12.6 在細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡中具有重要作用, 因此推測(cè) FKBP12.6在腦缺血中有重要作用。CDC42 即細(xì)
4、胞分裂周期蛋白 42,在細(xì)胞中主要參與細(xì)胞骨架蛋白的解聚,與細(xì)胞形態(tài)、遷移、分裂密切相關(guān)。有研究報(bào)道 Rip(RatInsulin-2 Promoter)-Cre 特異性敲除 CDC42 小鼠常伴有腦中一些核團(tuán)(主要是弓狀核)的非特異性敲除。弓狀核是攝食與能量代謝平衡的調(diào)節(jié)中樞,故 Rip-Cre特異性敲除 CDC42 小鼠的攝食可能發(fā)生變化。因此,本文旨在探究 FKBP12.6在腦缺血損傷中的作用及 CDC42 缺失對(duì)小鼠攝食的影響。
5、方法: 方法:中腦動(dòng)脈阻塞手術(shù)建模:缺血 60min 后將線栓拔出再灌,24h 后將腦切成 1mm 厚的腦片行 TTC 染色, 計(jì)算缺血區(qū)域面積評(píng)價(jià)神經(jīng)損傷。 FK506 給藥組缺血前 45min 腹腔注射 FK506,注射劑量為 10mg/kg,對(duì)照組注射 10ml/kg 的生理鹽水。培養(yǎng)胎鼠原代腦皮層細(xì)胞,9 天后氧糖剝奪(OGD)處理,處理時(shí)間分別為 1.5h、3h,對(duì)照組不做處理。繼續(xù)培養(yǎng) 24h 后,hoechest 染色顯示
6、凋亡細(xì)胞并計(jì)數(shù)以評(píng)價(jià)神經(jīng)損傷。 CDC42 條件性敲除小鼠和對(duì)照組禁食 24 小時(shí)后再給食,監(jiān)測(cè) 0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h 不同時(shí)間段內(nèi)的攝食量,一周后再監(jiān)測(cè)正常情況下每天的攝食量, 連續(xù)監(jiān)測(cè)一周。 腦部冠狀面冰凍切片 HE 染色觀察神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)和腦部結(jié)構(gòu)變化,分析 Rip-Cre 特異性敲除 CDC42 對(duì)攝食的影響。結(jié)果: 結(jié)果:1. 動(dòng)物水平結(jié)果顯示敲除小鼠 FKBP12.6 基因?qū)δX缺血損傷沒有明顯影響
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