2,3-吲哚醌抑制人神經(jīng)母瘤細胞侵襲和轉移的分子機制研究.pdf

1、研究目的：神經(jīng)母細胞瘤是小兒最常見的惡性腫瘤之一，惡性程度高，早期即發(fā)生轉移，且轉移是神經(jīng)母細胞瘤患兒最主要的死亡原因。2，3-吲哚醌(2，3-dioxoindoline，ISA，Isatin)是存在于哺乳動物體液及組織中的一種天然物質，其化學結構明確，是我國I類抗癌新藥靛玉紅的單體結構，已發(fā)現(xiàn)Isatin可以抑制人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞的增殖，誘導其凋亡，并初步發(fā)現(xiàn)其有抑制侵襲轉移的作用，因此本研究擬進一步明確Isatin對神

2、經(jīng)母細胞瘤侵襲轉移的抑制作用，并對其機制進行探討，為Isatin的臨床應用提供理論依據(jù)，為最終將該藥開發(fā)成一種新型的具有我國自主知識產(chǎn)權的天然抗癌藥物奠定基礎。
　　研究方法：體外培養(yǎng)人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞，采用不同濃度（10、25、50、100、150、200、250、300、400、500、800μmol/L）的Isatin作用于體外培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞，采用CCK-8檢測細胞活力，并計算其IC50值；采用劃痕實

3、驗檢測不同濃度Isatin（0、50、100、200μmol/L）作用后SH-SY5Y細胞的遷移能力；采用transwell小室檢測不同濃度Isatin（0、50、100、200μmol/L）作用后SH-SY5Y細胞侵襲和運動能力；使用基因表達譜芯片技術檢測Isatin對SH-SY5Y細胞基因表達的影響，并篩選出與侵襲轉移相關的通路及基因，并采用RT-PCR驗證其相關基因的相對表達；采用Western blotting檢測與侵襲轉移相關

4、蛋白磷酸化水平或表達水平的變化。
　　研究結果：Isatin對SH-SY5Y細胞作用的IC50值為279.7μmol/L，CCK-8結果顯示Isatin能抑制SH-SY5Y細胞增殖且呈濃度依賴性，隨著藥物濃度的增大，細胞出現(xiàn)明顯的皺縮、且細胞數(shù)目明顯減少；與對照組相比，Isatin處理組細胞的遷移能力明顯減弱（P＜0.05），并且具有濃度依賴性；與對照組相比，細胞侵襲運動能力顯著下降（P＜0.01），且呈濃度依賴性；基因表達譜芯片

5、結果發(fā)現(xiàn)，Isatin作用后，共有284個基因表達上調(diào)，145個基因表達下調(diào)，芯片提示mTOR信號通路可能是Isatin的效應靶點，其中DDIT4、RHEB、EIF4EBP1、RPS6KB1為mTOR信號通路的相關基因；RT-PCR結果與基因表達譜芯片預測的結果相一致，DDIT4和EIF4EBP1基因表達上調(diào)，RHEB和RPS6KB1基因表達下調(diào)；Western blotting檢測與mTOR信號通路相關蛋白的表達，結果顯示AMPK的磷

6、酸化水平顯著上調(diào)(P＜0.01)，且呈濃度依賴性；mTOR的磷酸化水平下調(diào)(P＜0.01)，呈濃度依賴性；HIF-1α和VEGF的蛋白相對表達量下調(diào)(P＜0.01)，呈濃度依賴性；PI3K和Akt的磷酸化水平隨藥物濃度的增加而無明顯變化。
　　研究結論：Isatin對SH-SY5Y細胞的增殖和侵襲遷移具有抑制作用；基因表達譜芯片結果提示Isatin抑制SH-SY5Y細胞侵襲轉移的作用可能是多靶點的，對mTOR通路相關蛋白的影響是I