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文檔簡介
1、背景:起源于神經(jīng)嵴神經(jīng)外胚層的神經(jīng)母細(xì)胞瘤是兒童中常見的顱外實體瘤。腫瘤的轉(zhuǎn)移是大多數(shù)癌癥患者死亡的主要原因,是治療癌癥的重要挑戰(zhàn)。近年來對神經(jīng)母細(xì)胞瘤治療的新方法逐漸集中在轉(zhuǎn)移的機(jī)制上。2,3-吲哚醌(Isatin)不僅作為一種海洋活性藥物發(fā)揮抗癌作用,而且是人體內(nèi)源性物質(zhì),具有多種藥理學(xué)活性,如神經(jīng)保護(hù),抗菌和抗病毒的活性。我們課題組以前的研究表明,Isatin可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖,也可抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的侵襲和遷移,且
2、Isatin抑制細(xì)胞侵襲和遷移的機(jī)制可能與MMP2和MMP9的下調(diào)相關(guān)。然而,未見有關(guān)Isatin對神經(jīng)母細(xì)胞瘤自噬的影響及其與侵襲遷移關(guān)系之間的相關(guān)報道。本文在前人研究的基礎(chǔ)上,應(yīng)用神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞系,研究Isatin對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞自噬的影響及其與侵襲和遷移的關(guān)系,并探討了可能的機(jī)制。
方法:培養(yǎng)神經(jīng)母瘤SH-SY5Y細(xì)胞,用不同濃度(100μmol/L,200μmol/L,300μmol/L)的Isati
3、n處理SH-SY5Y細(xì)胞,對照組的細(xì)胞不做藥物處理。采用transwell侵襲實驗檢測各組SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲能力;Transwell遷移實驗檢測各組SH-SY5Y細(xì)胞的遷移能力;吖啶橙染色法檢測SH-SY5Y細(xì)胞的自噬溶酶體;Real-time PCR檢測SH-SY5Y細(xì)胞中mTOR信號通路中相關(guān)分子Rheb和mTOR的mRNA表達(dá);Western blotting檢測自噬標(biāo)志性蛋白LC3和P62表達(dá)水平的變化及自噬相關(guān)信號通路蛋
4、白mTOR磷酸化水平。
結(jié)果:Transwell小室實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,Isatin可顯著抑制SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲和遷移能力。Isatin處理細(xì)胞后,SH-SY5Y細(xì)胞穿過 Transwell小室的數(shù)量明顯減少,Isatin對SH-SY5Y細(xì)胞侵襲抑制率分別為40.13%,53.16%和75.74%(P<0.01)。Isatin對SH-SY5Y細(xì)胞遷移的抑制率分別為48.1%,67.24%和83.87%(P<0.0
5、1)。吖啶橙染色結(jié)果顯示,Isatin處理組具有橙紅色自噬囊泡的陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比例隨著藥物濃度的提高而呈現(xiàn)出遞增的趨勢(P<0.0001)。Real-time PCR結(jié)果顯示,與對照組相比,隨Isatin濃度的增加,Rheb和mTOR mRNA表達(dá)顯著下降(P<0.01);Western blotting結(jié)果顯示,隨著Isatin濃度的增加,自噬標(biāo)志性蛋白LC3-II表達(dá)量顯著增加(P<0.05),P62表達(dá)量顯著降低(P<0.
6、01);mTOR磷酸化水平顯著下降(P<0.01),且呈濃度依賴關(guān)系。
結(jié)論:Transwell實驗結(jié)果顯示,Isatin可顯著抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的侵襲和遷移。吖啶橙染色法檢測了SH-SY5Y細(xì)胞的自噬囊泡;Western blotting檢測自噬相關(guān)蛋白LC3-II和P62表達(dá)水平變化;結(jié)果提示,Isatin促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生自噬。Real-time PCR檢測Rheb、mTOR mRNA相對表達(dá)量
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