拓撲替康對NB細胞瘤SH-SY5Y細胞系細胞侵襲-轉(zhuǎn)移相關蛋白MMP-9的影響研究.pdf

1、目的：
　　神經(jīng)母細胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童時期較為常見的顱外神經(jīng)內(nèi)分泌性實體腫瘤[1]。NB細胞多起源于腎上腺髓質(zhì)也可見于其他交感神經(jīng)分布的部位。NB發(fā)病率約為兒童惡性腫瘤的8％～10％，具有起病隱匿、惡性程度高的特點，預后遠低于兒童其他常見惡性腫瘤如:急性淋巴細胞白血病、淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤。神經(jīng)母細胞瘤預后影響因素較多且極易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移[2]?？傮w上神經(jīng)母細胞確診時幾乎70％已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移且多數(shù)為

2、多部位轉(zhuǎn)移，最常見的轉(zhuǎn)移部位是骨髓、骨、淋巴結(jié)、肝臟和皮膚等處[3]，其中骨髓70.5％、骨骼55.7％、淋巴結(jié)30.9％、肝臟29.6％等[4]。神經(jīng)母細胞瘤手術(shù)不易完整切除，容易復發(fā)，所以對腫瘤轉(zhuǎn)移機制及術(shù)后治療成為人們研究的熱點。
　　拓撲異構(gòu)酶抑制劑在兒童腫瘤中的應用開始于上世紀90年代。拓撲異構(gòu)酶抑制劑是最先在兒童腫瘤病人中應用的喜樹堿衍生物，無論是單藥還是和其他藥物聯(lián)合應用目前在橫紋肌肉瘤，神經(jīng)母細胞瘤及腎母細胞瘤中都

3、在進行臨床試驗[5.6]，拓撲替康系半合成的DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅰ抑制劑。與拓撲異構(gòu)酶Ⅰ形成復合物并導致DNA不能正常復制，導致DNA雙鏈損傷，由于哺乳動物不能有效地修復這種DNA損傷，因此抑制細胞增殖。本品屬S期特異性藥物，對多種動物腫瘤有明顯抑制作用，是一種廣譜的抗腫瘤藥物。臨床應用于小細胞肺癌(SCLC)和一線治療藥失敗的晚期轉(zhuǎn)移性卵巢癌[7，8]。在神經(jīng)母細胞瘤的治療領域，在復發(fā)病人中，聯(lián)合應用拓撲替康和環(huán)磷酞胺已經(jīng)有十幾年的歷史[

4、9]，我們也在復發(fā)和廣泛轉(zhuǎn)移的病人中初步應用了這一聯(lián)合用藥方案，取得了不錯的療效(75％緩解率)[10]。最近的一項初步試驗結(jié)果顯示把這個聯(lián)合用藥方案加到一種強有力的誘導用藥方案中有一定的可行性[11]。
　　MMP-9做為基質(zhì)金屬蛋白酶中的一員，能降解細胞外基質(zhì)中Ⅳ、Ⅴ型膠原和明膠等主要成分，打破基底膜，清除腫瘤細胞浸潤轉(zhuǎn)移的首要障礙。近年來國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)MMP-9和多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展關系密切，但NB細胞中MMP9的表達研究國內(nèi)少

5、見報道。本實驗通過將拓撲替康藥物作用于培養(yǎng)好的神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系，觀察拓撲替康對神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系的細胞增殖抑制情況并檢測細胞侵襲/轉(zhuǎn)移相關因子MMP-9表達變化，探討拓撲異構(gòu)酶抑制劑對NB侵襲/轉(zhuǎn)移作用的影響機制。
　　方法：
　　1.SH-SY5Y細胞系細胞培養(yǎng)。
　　2.采用CCK-8法檢測拓撲替康對神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系的細胞增殖抑制。
　　3.采用Western b

6、lot技術(shù)、細胞免疫熒光技術(shù)檢測細胞侵襲/轉(zhuǎn)移相關蛋白MMP9表達變化。
　　結(jié)果：
　　1.拓撲替康抑制神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞系的體外增殖。
　　2.拓撲替康對MMP9的表達抑制具有劑量依賴性，在一定有效藥物濃度范圍內(nèi)隨著拓撲替康藥物濃度的增加，MMP9表達下降。
　　結(jié)論:
　　在拓撲替康有效藥物濃度范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，MMP-9的表達下降，拓撲替康抑制神經(jīng)母細胞瘤體外增殖及抑制腫瘤細胞