VEGF對微小凹結(jié)構(gòu)中SH-SY5Y細(xì)胞VGCCs功能響應(yīng)的影響.pdf

1、目前，三維細(xì)胞培養(yǎng)模型已經(jīng)成為了細(xì)胞與組織工程領(lǐng)域中的研究熱點之一。但是以往的研究主要集中在細(xì)胞的生長行為方面，極少探討三維培養(yǎng)模型中的細(xì)胞鈣通道功能響應(yīng)以及生長因子VEGF的鑒定。因此，本研究將人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y細(xì)胞株)接種于不同的微小凹圖式上，評價基底形態(tài)及VEGF對SH-SY5Y細(xì)胞電壓依從式鈣離子通道(VGCCs)功能響應(yīng)的影響。
　　 目的：比較PLLA平面結(jié)構(gòu)與微小凹圖式上SH-SY5Y細(xì)胞的生長行為

2、、VGCCs功能響應(yīng)以及VEGF的分泌差異，從而評價在體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法中，三維培養(yǎng)模型相較于傳統(tǒng)平面培養(yǎng)的差異性，為構(gòu)建三維細(xì)胞生物傳感器奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：以紫外光光刻、硅蝕刻及軟光刻技術(shù)制備聚乳酸(poly-L-lactide，PLLA)平面基底及微小凹圖式，以共聚焦顯微技術(shù)結(jié)合鈣離子熒光染料CalciumGreen-1，AM評價SH-SY5Y細(xì)胞在PLLA平面基底和微小凹圖式上VGCCs的功能響應(yīng)性。結(jié)合ELISA評

3、價微結(jié)構(gòu)中細(xì)胞分泌的標(biāo)志性生長因子(VEGF)的不同，并研究VEGF對細(xì)胞VGCCs.功能響應(yīng)的影響。
　　 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)，分布在微小凹頂部的細(xì)胞為二維生長方式，凹內(nèi)側(cè)壁的為三維生長方式，凹內(nèi)底部的為近似二維生長方式；可以有效形成三維細(xì)胞生長的微結(jié)構(gòu)為孔徑100μm，通道寬度為0μm和20μm的兩種微小凹圖式。以50mM高鉀溶液去極化刺激發(fā)現(xiàn)，三維及近似二維細(xì)胞VGCCs陽性響應(yīng)比率和反應(yīng)幅度均明顯低于傳統(tǒng)二維培養(yǎng)的細(xì)胞。通過

4、對不同微結(jié)構(gòu)中SH-SY5Y細(xì)胞的VEGF表達(dá)水平的檢測發(fā)現(xiàn)，PLLA微小凹圖式上細(xì)胞的VEGF分泌量明顯高于平面基底上的細(xì)胞，而且VEGF對SH-SY5Y細(xì)胞的VGCCs功能響應(yīng)有明顯的抑制作用。
　　 結(jié)論： PLLA微小凹圖式可以有效形成三維生長方式的SH-SY5Y細(xì)胞，通過研究微小凹中細(xì)胞VGCCs功能響應(yīng)以及VEGF分泌發(fā)現(xiàn)，三維生長的細(xì)胞鈣通道功能以及VEGF均不同于傳統(tǒng)二維培養(yǎng)的細(xì)胞，且VEGF對SH-SY5Y細(xì)胞