人淀粉樣前體蛋白基因高表達對SH-SY5Y細胞膽堿能功能的影響.pdf

1、阿爾茨海默病是威脅老齡人群的一類慢性進行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病.為觀察阿爾茨海默病(AD)的兩大致病相關(guān)基因——淀粉樣前體蛋白(APP)基因和早老素-1(PS1)基因的高表達及其直接后果β-淀粉樣肽(A β)高度生成對人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y膽堿能功能的影響,探討AD腦內(nèi)A β與膽堿能變化的聯(lián)系,以進一步認識AD的發(fā)病機理,本研究將攜帶野生型人APP基因的pCMV695質(zhì)粒和攜帶野生型人PS1基因的pcDNA3.1-PS1質(zhì)粒

2、分別轉(zhuǎn)染至人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y細胞中,穩(wěn)定表達后根據(jù)APP蛋白表達量、PS1蛋白表達量和Aβ生成量篩選出功能蛋白A β高表達細胞株SH-SY5Y-APP和SH-SY5Y-PS1,測定高表達細胞株的M、N-乙酰膽堿受體結(jié)合及膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活性,觀察該細胞的膽堿能功能變化情況.實驗發(fā)現(xiàn),高表達人PS1的SH-SY5Y細胞未出現(xiàn)A β過度生成,提示野生型PS1高表達神經(jīng)細胞與突變型PS1高表達相比,作為AD的細胞模型存

3、在不足.高表達人APP的SH-SY5Y細胞A β生成量明顯增加,并有數(shù)株細胞出現(xiàn)A β過度生成.在轉(zhuǎn)染后高表達APP的SH-SY5Y-APP細胞中,與正常該細胞相比,當A β生成量為對照的2~2.6倍(即115~150pM)時,細胞M受體結(jié)合降低18.53~21.85%(P<0.05);當A β生成量為對照的1.9~2.6倍(即108~150pM)時,細胞α 7N受體結(jié)合與ChAT活性均未出現(xiàn)明顯變化(P>0.05).未觀察到明確的細胞