nm23-h1基因轉(zhuǎn)染前后人肺癌細(xì)胞中pkc轉(zhuǎn)位的研究

1、·8 6·中 固肺 癌 雜 志 2 0 0 4年 4月 第 7卷第 2期 C h i nfIu n gC a n c e r ，Ap r i l2 0 0 - - 1Vo 1 ． 7 ·No ．n m23 一 H1 基 因轉(zhuǎn)染前后 · 研究生專欄 ·人肺癌細(xì)胞 中P KC轉(zhuǎn)位 的研 究 聶強(qiáng)朱文王艷萍陳小禾 楊俊杰劉倫旭付軍科 李定彪 李印周清華【 摘要】目的探討 n m2 3H轉(zhuǎn)染和

2、蛋 白激酶 ( ： ( P K C ) 特 異抑制 劑 C a l p h o s t i nC對(duì)人高轉(zhuǎn)移 夫細(xì)胞肺 癌細(xì)胞株 1 ． 9 9 8 1 細(xì)胞 P K C信 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 的作用 ， 以及 n m2 3 一 H基 對(duì) I } K C激活轉(zhuǎn)位 的影響 。方法 用 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察 n m2 3H基 因轉(zhuǎn)染前后和 C a l p h o s t i nC處理轉(zhuǎn)基 細(xì)胞株 I9 9 8 1n m2 3Hi 前后 P K

3、C在不 同的亞細(xì) 胞 區(qū)域的定 位情 況。結(jié) 果 ( 1 ) 原 代細(xì)胞 株 I9 9 8 ]和 空載 細(xì) 胞 株 1 ． 9 9 8 1p IX S N 中P KC 一、 P K C口 1 1 主要位于胞核及陔 ， 處于激 活狀態(tài) ； 轉(zhuǎn)染 n m2 3H基 因后 的人腫痛細(xì)胞株 L 9 9 8 1n m 2 3H中 P KC、 P K C8 l I主要位于胞漿 ， 處于未激活狀態(tài) 。( 2 ) C a l p h o s t i n

4、C作用后所有細(xì)胞 巾的 P K C均主要位于 胞漿中 ， 處于未激活狀態(tài) 。結(jié)論 ( 1 ) n m2 3 一 H基 可使 1 ． 9 9 8 1細(xì)胞株中 P KC從胞核 胞漿 轉(zhuǎn)位 ， 從 而抑制 P K C信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)。( 2 ) C a l p h o s t i nC 叮使 1 ． 9 9 8 l 、 1 ． 9 ． 9 8 lp lX S N 細(xì)胞 株 中 P K C從胞 核 向胞漿 轉(zhuǎn) ， 從 而抑 制 P KC信 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 。

5、【 關(guān)鍵詞】 n m2 3H基 因激光共聚焦 顯微鏡 P KC轉(zhuǎn)傳 人大細(xì)胞J 】 市 癌細(xì)胞株 L 9 9 8 l【 中圖 分 類 號(hào)】 Q 7 8 5S t u d yo np r o t e i nk i n a s eCt r a n s l o c a t i o nb e f o r ea n da f t e rt r a n s f e c t i o no fn m 2 3 一 HIg e n ei nh u ma

6、nl u n gc a n c e rc e l l su s i n gL a s e rs c a n n i n gc o n f o c a lmi c r o s c o p eNI EQi a n [ g，ZH U We n，W a n gY a n p i n g，CH EN Xi a o h e，1 ， ANG ju n ji e ， LI UL U H ． T U ， F Uju n # e ， L lD i n

7、g b i a o ， Z HOUQi n g h u a ．Ke yL a h o r a t o r yl 1 fL u n g( ? a n t e rMo M l t l a rB i o l o g yo ／S i c h u a nP r o v i ma n dD e p a r t me n tf J ，T i t o r a (S u r g e r y， We s tC h i n aJ t o s p i t

8、a l ， S i c ， ? i d a HU n i v e rs i t y，( ' h e n gd u ，S i c hu a n6 l 0 0 4 1 ，P． R． ( ' h i n aCo r r e s p o n d i n ga u t h o r ：ZH 0U Qi n g h u a，E Ⅲ i l ：z h o u q h @ y ] l a i l ．( ． ∽2 i n／ o ． Ⅲ t

9、[ A b s t r a c t ] Ob j e c t i v eT oe x p l o r et h ei n f l u e n c e so fn m2 3H1g e n et r a n s f e ~ ’ t i o na n dp r o t e i nk i n a s e( 、( P KC)i n h i b i t o rCa l p h o s t i nCo nP KCs i g n a lt r a n

10、s d u c t i o np a t h wa yi nh u ma nh i g hme t a s t a s i sl a r g ec e l lh mgc a n c e rc e l ll i n eI9 9 8 1 ，a n dt oe v a l u a t et h ee f f e c t so fn m2 3H1g e n to nt r a n s l o c a t i o na n da c t i v

11、a t i o ni ns u b c e l l ul a rr e g i o n ．M e t h o d sTh et r a n s l o c a t i o no fP KCi ns u h c e l l u l a rr e g i o nwa so b s e r v e di nI9 9 81b e f o r ea n da f t e rn m2 3 一 H 1g e n et r a n s f e c t

12、i o na n dCa l p h o s t i nCt r e a t me n tb yLa s e rs c a n n i n gc o n f o c a lmi c r o s c o p e( I ． S CM )me t ho d ．Re s u l t sP KC Ⅱa n dPKC一 8l 1we r ef o u n dt ol o c a t ei nd i f f e r e n ts u b c e l

13、l u l a rs i t ( · i nL9 9 81h e f o r ea n da f t e rn m2 3H1g e n et r a n s f e c t i o n ． P K C 一 Ⅱa n dP K C ～ 8I 1ma i n l yl o c a t e di nn u c l e u sa n dp e r i n u c l e u si n1 ． 9 9 81a n dI9 9 8 1p I

14、X S Nc e l 1l i n e s ， w h i c hw e r ei na c t i v es t a t u s ．P K C Ⅱa n dP K C8I Ima i n l y1 o c a t e di ns o l u b l ec y t o s o l i cf r a c t i o ni nI9 9 8 ln m2 3H 1c e l ll i n ea n dwe r ei n a c t i v es

15、 t a t u s ．IKCa n dPKC 一 81 Ima i n l y1 o c a t e di nc y t t ) s o l i cf r a c t i o na n dwe r ei ni n a c t i v es t a t u si na l 1t h et h F e ec e l ll i n e sa f t e rt r e a t me n twi t hCa l p h o s t i nC．

16、C o n c l u s i o nTh er e s u l t ss u g g e s tt h a tn m2 3H 1g e n emi g h tma k ePKCt ot r a n s l < ) c a t cf r o m n u c l e u sa n dp e r i n u c l e u st os o l u b l ec v t o s o l i cf r a c t i o ni nI9

17、9 8 lc e l ll i n e ．PKCi n h i b i t o r ，Ca l p h o s t i nC，c a na l s oma k ePKCt ot r a n s l o c a t ef r o m n u —c 1 e u sa n dp e r i n u c l e u st os o l u b l ec y t o s o l i cf r a c t i o ni nI9 9 8 l ， I

18、9 9 8 lp IXS N e e l l1 i n e s ． B o t ht r a n s f e c t i o no fn m2 3 一 H 】g e n ea n dt r e a t me n twi t hCa l p h o s t i nCc a ns u p p r e s st h eP KCs i g n a lt r a n s d u c t i o ni n1 ． 9 9 8 1c e l ll i

19、 n e ．[ K e yw o r d s ]n m2 3H1g e n eL a s e rs c a n n i n gc o n f o c a lmi c r o s c o p eP K ( ： t r a n s I o c a t i o nHu ma nl a r g ec e l ll u n gc a n c e rc e l ll i n eL 9 9 8 1Th i swo r kwa ss u p p o r

20、 t e db yg r a n t sf r o m t h eNa t i o n a lNa t u r a lS c i e n c e sF o u n d a t i o no fCh i n a ( t oZH( ) U Qi n g h u aa n dII U Iu n x u ) ( No ． 3 0 0 7 0 3 3 3a n dNo ． 3 0 1 0 0 0 7 5 ) ．本 研究 受 國(guó)家 自然科 學(xué)

21、基 金 ( No ． 3 0 0 7 0 3 3 3和 N o ． 3 0 1 0 0 0 7 5 ) 資 助 作者單位 ： 6 1 0 0 4 1 成都 ， 四川 I 大學(xué)華西醫(yī)院四川 I 省肺癌分子重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 、 胸外科 ( 通訊作者 ： 周清華 ， E — m a i l ： z h o u q h @ma i l ． s c ． c n i n f o ． n e t )維普資訊 http://www.cqvip.com I ，