北京市腐乳中蠟樣芽胞桿菌檢測(cè)及毒力基因和耐藥性研究.pdf

1、作為大豆制品，腐乳有著悠久的歷史，其味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、質(zhì)地細(xì)膩，越來越受人們喜愛。然而近幾年腐乳中蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）污染的報(bào)道越來越多，嚴(yán)重影響消費(fèi)者的健康。因此，對(duì)腐乳中Bacillus cereus進(jìn)行檢測(cè)、分型，并掌握Bacillus cereus分離菌株毒力基因攜帶情況及耐藥表型至關(guān)重要。本文建立基于基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術(shù)針對(duì)Bacilluscereus的快

2、速鑒定方法，并利用本研究建立的方法對(duì)腐乳中Bacillus cereus進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)，針對(duì)Bacillus cereus分離菌株，運(yùn)用MALDI-TOF-MS進(jìn)行分型。最后對(duì)Bacillus cereus分離菌株的毒力基因及耐藥表型進(jìn)行檢測(cè)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴建立Bacillus cereus的MALDI-TOF-MS鑒定方法。以Bacillus cereus模式菌株為研究對(duì)象，優(yōu)化該菌樣品處理方法，并選取17株Bac

3、illus cereus標(biāo)準(zhǔn)菌株補(bǔ)充MALDI-TOF-MS數(shù)據(jù)庫，考察MALDI-TOF-MS鑒定方法的靈敏度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度。結(jié)果表明:Bacillus cereus最佳樣品處理方法是甲酸提取法，數(shù)據(jù)庫的補(bǔ)充提高了該菌鑒定的可信度，在此條件下MALDI-TOF-MS鑒定方法準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好，靈敏度為104 cfu。研究的MALDI-TOF-MS鑒定方法準(zhǔn)確快速，為食源性Bacillus cereus快速鑒定和分型提供一定的技術(shù)支持

4、。⑵腐乳中Bacillus cereus的分離鑒定及分型。選取北京市不同品牌、產(chǎn)地、種類或批次的腐乳樣品112份，運(yùn)用國家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)腐乳中Bacillus cereus進(jìn)行分離純化、鑒定及計(jì)數(shù)，并用MALDI-TOF-MS對(duì)分離菌株分型。結(jié)果表明:所有腐乳樣品均分離出Bacillus cereus，共分離Bacillus cereus204株，且大部分腐乳中Bacillus cereus的MPN值大于103 MPN/g;在距離為0.9時(shí)

5、，MALDI-TOF-MS將204株Bacillus cereus分為4個(gè)型別，且同一品牌或產(chǎn)地腐乳中分離的Bacillus cereus具有一定的聚集性，這為Bacillus cereus的品牌及產(chǎn)地溯源提供依據(jù)。⑶Bacillus cereus分離菌株的毒力基因檢測(cè)。采用PCR、電泳等方法對(duì)Bacillus cereus的11個(gè)毒力基因hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、entFM、cytK、bceT、ces

6、、EM1進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明:11個(gè)毒力基因攜帶率依次為34.31％、25.98％、7.84％、100.00％、99.51％、99.02％、99.51％、35.29％、40.69％、4.90％、4.90％，說明非溶血素和腸毒素FM可能是腐乳中Bacillus cereus的主要毒力因子;基于毒力基因的攜帶情況將Bacillus cereus分為30個(gè)基因型，說明腐乳中分離的Bacillus cereus呈現(xiàn)多樣化;幾乎所有Bacillus

7、 cereus分離菌株攜帶4種及以上的毒力基因，說明腐乳中的Bacillus cereus有產(chǎn)生復(fù)合毒素的可能性。⑷Bacillus cereus分離菌株的耐藥表型檢測(cè)。采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)Bacillus cereus對(duì)青霉素、慶大霉素、四環(huán)素、紅霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星、苯唑西林、克林霉素、利福平、阿米卡星、復(fù)方新諾明11種抗生素的藥敏性。結(jié)果表明:Bacillus cereus對(duì)11種抗生素的耐藥率依次為100.00％、0.00％、8