烏賊加工副產物（墨汁黑色素）對機體AGEs及其受體的影響.pdf

1、烏賊的墨汁中含有大量的黑色素，黑色素具有抗輻射、防腐、抗衰老、抗氧化等多種生理生化功能。隨著人口老齡化日趨嚴重，黑色素抗衰老的功能研究越來越多。晚期糖基化終末產物（advanced glycation endproducts，AGEs)是生物體內還原糖類物質的羰基與蛋白質類物質中的氨基經過美拉德反應生成的具有熒光作用的產物，依據(jù)糖基化衰老相關研究發(fā)現(xiàn)，糖基化終末產物的量與機體的衰老程度及健康有直接關系。本實驗依據(jù)糖基化衰老學說，建立糖基

2、化動物模型，進一步通過黑色素灌胃糖基化模型小鼠，檢測和比較各組小鼠晚期糖基化終末產物、晚期糖基化終末產物受體（Receptor for Advanced Glycation End products，RAGE）、可溶性晚期糖基化終末產物受體（Soluble receptor for advanced glycation end products，sRAGE）、內源性分泌型晚期糖基化終末產物受體（Endogenous secretory

3、Receptor for advanced glycation end product，esRAGE）的水平，研究兩種烏賊墨汁黑色素通過降低糖基化產物水平這一途徑發(fā)揮其抗衰老的作用。黑色素分別采用了曼氏無針烏賊墨汁黑色素（melanin from Sepiella maindroni ink，MSMI）和虎斑烏賊墨汁黑色素（melanin from Sepia pharaonis Ehrenberg ink，MSPI)。
　　實驗

4、采用200mg·kg-1·d-1的D-半乳糖誘導小鼠45d建立糖基化模型，通過新物體識別檢測模型組與正常對照組小鼠行為學差異，進一步利用酶聯(lián)免疫法檢測小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎、皮膚、肌肉和血清中的晚期糖基化終末產物、晚期糖基化終末產物受體、可溶性晚期糖基化終末產物受體、內源性分泌型晚期糖基化終末產物受體，分析該模型中4種指標的變化情況。結果表明模型組小鼠的辨別指數(shù)顯著低于空白組（P<0.01）；模型組小鼠各組織器官中的糖基化末端產物和

5、相關受體的表達量顯著高于空白組（P<0.01）。發(fā)現(xiàn)D-半乳糖慢性處理45d后的小鼠從行為上有一定的遲緩，同時各組織器官處于高糖基化狀態(tài)，糖基化模型建模成功，此模型可用于研究AGEs及其受體的發(fā)病機理和藥物治療作用途徑，并且可以選用多個組織器官作為實驗靶點。
　　在已建立的糖基化模型的基礎上，研究烏賊黑色素對糖基化模型小鼠體內糖基化產物和受體的作用。實驗設立空白對照組（Control）、糖基化模型組(Glycation model

6、)、陽性對照組（VC組）、曼氏無針烏賊墨汁黑色素高低高中低3個劑量組（MSMI低劑量組、MSMI中劑量組、MSMI高劑量組）、虎斑烏賊墨汁黑色素高中低3個劑量組（MSPI低劑量組、MSPI中劑量組、MSPI高劑量組）。除空白對照組皮下注射生理鹽水外，其他8組小鼠皮下注射200mg·kg-1·d-1的半乳糖，建立糖基化小鼠模型。對低中高三組分別灌胃120mg·kg-1·d-1，240mg·kg-1·d-1，480mg·kg-1·d-1的黑

7、色素。陽性對照組灌胃120mg·kg-1·d-1的維生素C，空白對照組灌胃等量生理鹽水。45d后測定各組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、腦、肌肉、皮膚和血清中的AGEs、RAGE、sRAGE、esRAGE以及血清中的血紅蛋白晚期糖基化終末產物（Hemoglobin advanced glycosylation end products，Hb-AGE）的水平。結果發(fā)現(xiàn)與糖基化模型組相比，陽性對照組、MSMI低中高3組、MSPI低中高3組的

8、小鼠各組織器官和血液中的Hb-AGE、AGEs及受體的水平顯著降低（P<0.01），且隨著黑色素劑量的增加，所有檢測指標的水平越低。這說明兩種烏賊墨汁黑色素都能有效的清除體內的糖基化產物，可以通過該途徑發(fā)揮抗衰老功能，且黑色素對AGEs及其受體的清除能力與黑色素的劑量成正比。
　　進一步比較兩種黑色素同劑量組中小鼠各組織器官中 AGEs、sRAGE、esRAGE、RAGE和Hb-AGE的水平。發(fā)現(xiàn)與同劑量的MSMI組相比，MSPI