色譜分離材料的設(shè)計(jì)和制備新方法研究.pdf

1、色譜分離材料是色譜技術(shù)的核心，是各種分離模式賴以建立和發(fā)展的基礎(chǔ)。開發(fā)和制備結(jié)構(gòu)新穎、分離性能優(yōu)異的分離材料一直是色譜研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。本論文成功制備了多種新型色譜分離材料，這些材料在手性化合物拆分、堿性化合物分離以及生物樣品中糖蛋白的分離鑒定方面均取得優(yōu)異效果。
　　針對目前β-環(huán)糊精手性固定相存在合成路線繁瑣、穩(wěn)定性差、功能基團(tuán)密度低等問題，我們采用巰基-烯點(diǎn)擊化學(xué)方法快速、高效地將苯基異氰酸酯功能化的β-環(huán)糊精接枝到3-巰

2、丙基功能化二氧化硅微球上，成功制備了β-環(huán)糊精手性固定相。該方法具有反應(yīng)步驟少、操作簡單、反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)效率高等特點(diǎn)。該固定相在HPLC中成功地拆分了15種對映體，而且分離的重現(xiàn)性良好。
　　針對堿性化合物在反相液相色譜分離中容易出現(xiàn)色譜峰拖尾的問題，我們在3-氨丙基功能化二氧化硅微球表面依次采用Michael加成反應(yīng)和巰基-炔點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，制備了分支狀十八烷基修飾的二氧化硅微球固定相。該固定相對三種堿性藥物組成的混合物和延胡

3、索水提物的分離效果明顯優(yōu)于適合極性化合物分離的Atlantis dC18柱。
　　針對目前常用的親水作用色譜材料在糖肽富集時(shí)出現(xiàn)特異性差、靈敏度低的問題，我們采用可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移（RAFT）聚合方式制備了聚2-（甲基丙烯?；趸┒谆?（3-磺酸丙基）氫氧化銨(PMSA)功能化的二氧化硅納米微球(SiO2-RAFT@PMSA)。該親水性納米微球?qū)θ薎gG胰蛋白酶解液中糖肽檢測限為10 fmol，回收率為88.7％-97.1％

4、。進(jìn)一步將SiO2-RAFT@PMSA應(yīng)用于鼠肝樣品中糖肽的富集，在3次質(zhì)譜重復(fù)中共鑒定到303個(gè)非冗余糖基化位點(diǎn)和185個(gè)糖蛋白，這一結(jié)果明顯優(yōu)于其它方式制備的二氧化硅微球，包括單層功能分子修飾的SiO2@single-MSA、多層不均勻PMSA刷修飾的SiO2@PMSA、商品化ZIC@HILIC材料以及Click Maltose材料。
　　針對目前常用的肼化學(xué)功能化材料在糖肽富集時(shí)存在分離過程耗時(shí)、表面肼基團(tuán)含量低的問題，我們

5、采用RAFT聚合方式制備了肼聚合物刷功能化磁性納米顆粒(Fe3O4@SiO2@GMA-NHNH2)。該材料對糖蛋白酶解液中糖肽的富集效果要明顯優(yōu)于單層肼基團(tuán)修飾磁核(Fe3O4@SiO2-single-NHNH2)，并且與商品化的Affi-Gel Hz酰肼微球的性能相當(dāng)。進(jìn)一步將其應(yīng)用于肝癌組織樣品中糖肽的富集，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這種新型肼聚合物刷功能化磁性納米顆粒鑒定到的糖基化位點(diǎn)數(shù)為189，而采用單層肼基團(tuán)修飾磁性納米顆粒只能鑒定到68個(gè)糖基