一株許氏平鲉腸道乳酸菌的分離鑒定、特性分析及其應(yīng)用研究.pdf

1、乳酸菌具有廣譜、高效、穩(wěn)定、安全的特點，可以通過產(chǎn)生有機酸、過氧化氫和細菌素等抑菌物質(zhì)抑制病原菌的生長，加強宿主機體腸道微生物的屏障作用，間接提高宿主非特異性免疫力，從而提高動物的健康水平和抗病力。許氏平鲉(Sebastes schlegelii)是我國黃渤海區(qū)域習(xí)見的魚類之一，因其肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富、抗逆性強、生長迅速，已成為北方沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖和人工放流的重要經(jīng)濟魚類。本研究首次從野生許氏平鲉腸道內(nèi)分離獲得了一株乳酸菌，采用16S rD

2、NA基因序列分析法對其進行了分類鑒定，并對其生長特性、抑菌特性、動物安全性及其應(yīng)用進行了研究，初步分析了該乳酸菌對許氏平鲉生長和抗病力的影響，旨在篩選能夠提高許氏平鲉抗病力、促進其生長的乳酸菌，為研發(fā)適用于許氏平鲉養(yǎng)殖業(yè)的微生態(tài)制劑奠定基礎(chǔ)，從而為其進一步應(yīng)用于海水養(yǎng)殖中提供理論依據(jù)。
　　1.許氏平鲉腸道乳酸菌的分離和鑒定
　　本研究自野生許氏平鲉腸道內(nèi)共分離出35株細菌，從中篩選出1株乳酸菌YH1,其菌落呈白色、圓形、表

3、面光滑、邊緣圓潤，革蘭氏染色呈陽性，且可發(fā)酵脫脂乳產(chǎn)生凝固、無氣泡、呈酸性現(xiàn)象，基于生理生化特征和16s rDNA序列鑒定乳酸菌YH1為食竇魏斯氏菌。掃描電鏡下乳酸菌YH1細胞形狀規(guī)則,呈桿狀,無鞭毛,表面較光滑,長度約為1.87μm。
　　2.食竇魏斯氏菌YH1的特性研究
　　本研究分析了酸堿度、溫度和NaCl含量對食竇魏斯氏菌YH1生長的影響，結(jié)果表明YH1適宜的生長條件為pH5.7—8.8、溫度20—40℃，最適生長條

4、件為pH7.2—8.4，溫度35℃，在MRS培養(yǎng)基中添加NaCl會抑制YH1的生長。選取多種病原指示菌以瓊脂擴散法測定YH1培養(yǎng)12h產(chǎn)物的抑菌活性，結(jié)果顯示YH1的無菌培養(yǎng)產(chǎn)物可顯著抑制金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌、大腸桿菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、遲鈍愛德華氏菌、鰻弧菌、假交替單胞菌、哈維氏弧菌等病原指示菌的生長，表明YH1具有廣譜抑菌性。將YH1代謝產(chǎn)物經(jīng)酸處理、熱處理和酶處理后，比較對鰻弧菌、假交替單胞菌和哈維氏弧菌的抑菌圈大小，

5、初步探究了食竇魏斯氏菌YH1產(chǎn)物的抑菌作用機理，結(jié)果表明YH1代謝產(chǎn)物的抑菌性可能是由酸性物質(zhì)、過氧化氫或細菌素類物質(zhì)導(dǎo)致的。采用肌肉注射和腹腔注射兩種方式對YH1的動物安全性進行檢測，結(jié)果顯示以108CFU/mL YH1注射許氏平鲉并未引發(fā)魚體發(fā)病或死亡，表明YH1在108CFU/mL及以下濃度對許氏平鲉是相對安全的。
　　3.食竇魏斯氏菌YH1用于許氏平鲉養(yǎng)殖的初步研究
　　通過投喂含有105CFU/g食竇魏斯氏菌YH1

6、的飼料56天，研究了YH1對許氏平鲉生長的影響，結(jié)果顯示實驗組許氏平鲉的增重率、特定生長率和飼料效率均高于對照組，表明乳酸菌YH1可促進許氏平鲉的生長。投喂試驗結(jié)束后，使用鰻弧菌感染實驗組和對照組許氏平鲉，觀察各組許氏平鲉的存活狀況，檢測各組許氏平鲉肝臟清除病原菌的能力。實驗結(jié)果顯示：實驗組的魚體未引發(fā)死亡，對照組的魚體12天后全部死亡；鰻弧菌侵染后7天，實驗組的許氏平鲉單個肝臟上細菌的數(shù)量顯著低于對照組的。這表明投喂乳酸菌YH1可以提