南極磷蝦抗氧化肽制備和純化的研究.pdf

1、南極磷蝦是一種高蛋白含量的生物資源，其中的蛋白質(zhì)含量為17.56％，且含有較多不飽和脂肪酸及全部的人體必需氨基酸。近年來，以不同來源的蛋白質(zhì)為原料，研發(fā)功能性多肽產(chǎn)品成為了科研熱點(diǎn)。本課題以南極磷蝦蛋白為實(shí)驗(yàn)材料，通過三種抗氧化活性指標(biāo)評測不同分子量多肽的抗氧化性，并對抗氧化多肽進(jìn)行了分離、純化。旨在增強(qiáng)磷蝦中蛋白的功能性，拓展南極磷蝦資源開發(fā)利用的方向。
　　論文以獲得具有優(yōu)越抗氧化活性多肽為目標(biāo)，首先對南極磷蝦抗氧化多肽的制備

2、條件進(jìn)行了優(yōu)化，其抗氧化性以DPPH.，超氧陰離子，.OH的清除率作為衡量標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)表明：使用胰蛋白酶-中性蛋白酶復(fù)合酶解，時(shí)間為6h時(shí)得到多肽抗氧化活性最好，其DPPH.、超氧陰離子，.OH的清除率分別為72.7%，11.5%，84.8%。利用超濾膜將南極磷蝦蛋白酶解物分級分離成分子量不同的五個(gè)組分，CPH I(>10ku)、CPH II(5ku～10ku)、CPH III(3ku～5ku)、CPH IV(0.5ku～3ku)，CPH

3、 V（<0.5ku)。5～10ku的南極磷蝦多肽抗氧化活性最好。其tricine-SDS-PAGE電泳譜圖上顯示有兩個(gè)條帶。
　　采用Sephadex G-50凝膠層析、高效液相，高速逆流等色譜技術(shù)，對所得多肽粗品進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。經(jīng)葡聚糖 G-50凝膠層析后，得到4個(gè)組分，選取抗氧化活性較好的組分2進(jìn)一步純化。通過分析型HSCCC色譜對分離所用溶劑體系進(jìn)行快速篩選，結(jié)果顯示正丁醇：乙酸：水=4:1:5體系分離效果最佳。采用制備

4、型HSCCC對組分2樣品進(jìn)行分離時(shí)，對其主機(jī)轉(zhuǎn)速、循環(huán)水浴溫度、加樣濃度以及流動相的流速等四個(gè)參數(shù)進(jìn)行了單因素優(yōu)化，確定最優(yōu)操作條件為：轉(zhuǎn)速900r／min、溫度25℃、加樣濃度25mg/mL、流動相流速1.5mL/min。組分2經(jīng)HSCCC分離得到七個(gè)組分，組分P2、P3含量較少，但其超氧陰離子自由基的清除率分別達(dá)到66.68%、70.98%；P5組分含量較多，其清除羥基、DPPH自由基的能力分別達(dá)到61.35%和27.43%。P2、

5、P3和P5組分的氨基酸分析結(jié)果表明，Val、Ile、Met、Tyr、Leu、Glu、Asp、Pro和Phe等氨基酸與南極磷蝦多肽的抗氧化性能有著緊密聯(lián)系，以上氨基酸含量越高，其對應(yīng)的抗氧化性越強(qiáng)。所以多肽的抗氧化活性不僅與分子量有關(guān)聯(lián)，還受到多肽的氨基酸組成，氨基酸含量等因素影響。
　　利用胃蛋白酶-胰酶復(fù)合酶對所得多肽進(jìn)行水解，來模擬其人體自然生理消化過程。純化后的南極磷蝦抗氧化肽經(jīng)過胃蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶酶