中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白激發(fā)小鼠過(guò)敏反應(yīng)及其機(jī)理研究.pdf

1、對(duì)蝦等水產(chǎn)品食用蛋白的致敏性對(duì)食用者的安全健康存在著潛在的威脅，而致敏性的高低主要取決于食用蛋白中過(guò)敏原的種類(lèi)以及含量。對(duì)于易過(guò)敏人群而言，食用對(duì)蝦等富含過(guò)敏原的食物易引發(fā)全身性過(guò)敏反應(yīng)，出現(xiàn)腸道黏膜過(guò)敏癥狀以及體內(nèi)一些生理指標(biāo)的變化。鑒于此，本研究擬以具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的特色物種中國(guó)對(duì)蝦為對(duì)象，建立腹腔注射該蝦肌肉蛋白的ICR小鼠過(guò)敏模型，結(jié)合間接ELISA測(cè)定小鼠血清中過(guò)敏原特異性IgE抗體水平以驗(yàn)證過(guò)敏模型的成功建立，通過(guò)HE/甲苯

2、胺藍(lán)染色以及免疫組化等手段探討該蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機(jī)理，最后通過(guò)測(cè)定小鼠相關(guān)臟器比重、抗氧化酶活性以及過(guò)敏指示酶的變化，表明了機(jī)體內(nèi)發(fā)生過(guò)敏的過(guò)程與一些生理指標(biāo)變化的相關(guān)性。本研究旨在為中國(guó)對(duì)蝦的攝入性過(guò)敏及體內(nèi)相關(guān)的免疫調(diào)控提供相關(guān)理論依據(jù)，同時(shí)對(duì)于臨床評(píng)估中國(guó)對(duì)蝦過(guò)敏原的潛在致敏性具有一定的實(shí)際參考意義。主要研究結(jié)果如下:
　　1、采用腹腔免疫中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白方法，建立針對(duì)該蝦蛋白過(guò)敏的ICR小鼠模型。通過(guò)SDS

3、-PAGE電泳和AlphaView SA3.4.0電泳圖像分析軟件分析，初步推測(cè)了中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白中可能含有的過(guò)敏原種類(lèi);建立小鼠過(guò)敏模型之后，采用間接ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中過(guò)敏原特異性IgE水平在激發(fā)期不同時(shí)間點(diǎn)的變化，并通過(guò)各劑量組OD值和對(duì)照組OD值的橫向比較，結(jié)果大多為2.1倍以上，證明該模型已經(jīng)成功建立，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
　　2、采用各染色方法及免疫組化方法探討中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機(jī)理。通過(guò)H

4、E染色對(duì)小腸腸道形態(tài)學(xué)觀(guān)察初步證明了蝦蛋白致敏組小鼠腸道發(fā)生炎癥且導(dǎo)致上皮損傷;對(duì)小腸肥大細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組小鼠腸道肥大細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的脫顆粒現(xiàn)象，細(xì)胞完整率顯著降低;免疫組化檢測(cè)小腸中相關(guān)T細(xì)胞（CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞）以及IgA+漿細(xì)胞的數(shù)量，結(jié)果顯示該蝦蛋白致敏個(gè)體內(nèi)小腸內(nèi)這些細(xì)胞陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組;提示蝦肌肉蛋白引發(fā)腸道黏膜免疫反應(yīng)是通過(guò)IgE介導(dǎo)的速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)以及T淋巴細(xì)胞依賴(lài)性延遲型過(guò)敏反

5、應(yīng)協(xié)同作用，并伴有B淋巴細(xì)胞向IgA+漿細(xì)胞持續(xù)分化來(lái)實(shí)現(xiàn)。
　　3、研究中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠體內(nèi)相關(guān)臟器比重及酶的變化。采用酶活試劑盒測(cè)定抗氧化酶(SOD、POD、CAT、GSH-Px、GST)和NOS/iNOS活性;使用雙抗夾心ELISA方法檢測(cè)PLA2的濃度;對(duì)Ca2+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)采用RT-PCR方法。對(duì)各蝦蛋白劑量組和對(duì)照組小鼠肝臟、腎臟、脾臟比重比較發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組小鼠肝、腎發(fā)生了不同程

6、度的萎縮，且隨著注射劑量加大而萎縮程度越嚴(yán)重，而脾臟則發(fā)生腫大，且隨著注射劑量加大而腫大程度越嚴(yán)重;通過(guò)測(cè)定小鼠肝、腎、脾及血清中這幾種抗氧化酶的活性發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組個(gè)體內(nèi)這些酶的活性明顯升高;而測(cè)定小鼠體內(nèi)肝、腎、脾和/或血清中三種過(guò)敏特征酶的變化發(fā)現(xiàn)，蝦蛋白致敏組個(gè)體內(nèi)肝、腎、脾及血清中NOS/iNOS活性明顯提高、PLA2濃度顯著增加，而肝臟、腎臟、脾臟內(nèi)Ca2+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量下降;提示過(guò)敏的發(fā)生過(guò)程與機(jī)體內(nèi)