番荔枝果肉多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及體外活性初步研究.pdf

1、番荔枝（Annona squamosa）系番荔枝科番荔枝屬植物，源于印度和南美洲，現(xiàn)廣泛分布于泰國、印度、中國等熱帶地區(qū)。番荔枝除作為熱帶名果之外，民間還常用于治療痢疾、昏厥、傳染病、便秘、出血、發(fā)燒、惡性腫瘤和潰瘍等。番荔枝果實(shí)具有多種藥用性質(zhì)，如抗氧化性、降血糖、保肝、抗腫瘤和抗炎等。
　　本文以臺灣所產(chǎn)番荔枝為研究對象，首次對番荔枝果肉多糖進(jìn)行提取、分離純化、結(jié)構(gòu)表征、硫酸化修飾、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)進(jìn)行了較系統(tǒng)研究。采用水提取

2、、堿提取、酸提取，經(jīng)過分級醇沉、除蛋白、除色素、透析及凍干，獲得六種粗多糖，分別命名為ASPW50、ASPW80、ASPW90、ASPB80、ASPA50和ASPA80。番荔枝粗多糖經(jīng)DEAE-Cellulose52陰離子交換柱、Sephadex G-100柱和Sephacryl S-300HR柱分離純化得到四種精多糖，分別命名為 ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1和 ASPA80-1。采用紫外掃描法、比旋光度法和高效

3、凝膠滲透色譜法檢測其純度，發(fā)現(xiàn)四種精多糖純度良好，均不含有蛋白質(zhì)和核酸。經(jīng)苯酚-硫酸法和高效凝膠滲透色譜法測得四種精多糖ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1和ASPA80-1的糖含量分別為97.70％、96.55%、94.17%和95.36%，其分子量依次為2.29*105 Da、5.41*104 Da、3.89*105 Da和5.48*104 Da。
　　采用經(jīng)典化學(xué)方法完全酸水解、部分酸水解、高碘酸氧化-Smi

4、th降解、甲基化分析等聯(lián)合現(xiàn)代儀器分析技術(shù)FT-IR、1D和2D NMR、HPAEC-PAD、GC-MS、HPLC等對四種精多糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，推斷其可能的一級重復(fù)結(jié)構(gòu)。
　　ASPW80-1由(1→3)-α-L-Rha,(1→6)-α-D-Glc和(1→4,6)-β-D-Gal構(gòu)成主鏈,三個支鏈?zhǔn)?1→)-α-L-Ara,(1→4)-β-D-Man和(1→6)-β-D-Gal,末端由(1→)-α-L-Ara構(gòu)成。
　　ASP

5、W90-1由(1→3)-β-L-Rha,(1→6)-α-D-Man,(1→3)-α-L-Ara和(1→3,6)-β-D-Glc構(gòu)成主鏈,三個支鏈?zhǔn)?1→3)-α-L-Ara,(1→4)-α-D-Glc和(1→6)-β-D-Gal,末端由(1→)-α-L-Ara構(gòu)成。
　　ASPB80-1由(1→6)-β-D-Gal,(1→3,6)-α-D-Man,(1→4)-β-D-Glc和(1→4,6)-β-D-Glc構(gòu)成主鏈，三個支鏈?zhǔn)?1→

6、4)-α-L-Rha,(1→2)-β-D-Gal和(1→6)-β-D-Gal,末端由(1→)-α-L-Ara和(1→)-α-D-Man構(gòu)成。
　　ASPA80-1可能是由(1→6)-β-D-Gal，(1→3)-α-L-Ara和(1→3,4)-β-L-Ara構(gòu)成主鏈,二個支鏈?zhǔn)?1→2)-α-L-Rha和(1→6)-α-D-Glc，末端由(1→)-α-L-Ara構(gòu)成。
　　采用氯磺酸-吡啶法對精多糖ASPW80-1進(jìn)行硫酸化修

7、飾，經(jīng)紅外圖譜鑒定硫酸化取得成功，硫酸基取代度為0.67，硫酸化多糖分子量是1.82*105 Da。采用掃描電子顯微鏡和原子力顯微鏡對硫酸化前后多糖進(jìn)行微觀形貌的分析。
　　通過初步研究番荔枝果肉多糖的體外抗氧化活性，結(jié)果表明番荔枝果肉多糖ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1和ASPA80-1對DPPH自由基和羥基自由基均表現(xiàn)出適中的清除能力，而硫酸化多糖ASPW80-M1的抗氧化活性明顯優(yōu)于其他多糖。