上轉(zhuǎn)換熒光試紙及生物傳感器快速檢測乳品中雌二醇.pdf

1、當(dāng)今雌激素濫用問題逐漸成為引發(fā)食品安全問題的關(guān)鍵因素，雌二醇（Estradiol,E2）作為一種典型的雌激素，是人體內(nèi)生物活性最強的激素類物質(zhì)。過多的外源性雌二醇的攝入會對人體健康造成嚴(yán)重的危害，引起機體性早熟，甚至誘發(fā)癌癥。針對雌二醇現(xiàn)場快速檢測技術(shù)的缺乏現(xiàn)狀，建立快速、簡便、高效的雌二醇小分子檢測方法勢在必行。
　　目的：
　　本研究以雌二醇作為研究對象，以上轉(zhuǎn)換熒光納米技術(shù)和生物傳感技術(shù)為支撐，基于競爭結(jié)合原理，建立高

2、效、靈敏、簡便的免疫層析試紙和生物傳感器檢測方法，實現(xiàn)牛奶中雌二醇的快速檢測。
　　方法：
　　1.使用經(jīng)典的溶劑熱法合成稀土元素?fù)诫s的上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒（Upconversion nanoparticles;UCNPs），使用不同的方法對UCNPs進行改性及表征。
　　2.建立UCNPs為熒光物質(zhì)的免疫層析試紙條檢測雌二醇的方法。修飾有氨基的UCNPs通過戊二醛法偶聯(lián)雌二醇單克隆抗體并固定在結(jié)合墊上，雌二醇包被原固定

3、在檢測線（Test Line,T）上，羊抗鼠抗體固定在質(zhì)控線（Control Line,C）上，基于免疫競爭原理檢測雌二醇小分子，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算最低檢出限。
　　3.建立UCNPs作為能量供體檢測雌二醇的適配體生物傳感器方法。修飾氨基的UCNPs通過戊二醛法與鏈霉親合素（Streptavidin,SA）偶聯(lián)，SA與雌二醇適配體連接后與互補鏈雜交，互補鏈上的熒光基團與UCNPs發(fā)生能量共振轉(zhuǎn)移，熒光淬滅。加入雌二醇小分子，小分子

4、使適配體結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，互補鏈脫離，熒光恢復(fù)。優(yōu)化雜交緩沖液及SA的濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算最低檢出限。
　　結(jié)果：
　　1.UCNPs顆粒表征結(jié)果：粒徑均一，粒徑約100 nm，硅殼厚度約10 nm，功能化修飾的UCNPs在水溶液等極性溶液中分散性良好。
　　2.免疫層析試紙方法的優(yōu)化結(jié)果：加樣墊寬度為1.6 cm，結(jié)合墊寬度為0.9 cm，T線濃度為1.25 mg/mL，C線濃度為0.8 mg/mL。結(jié)果表明在最優(yōu)條

5、件下，該方法具有良好的線性關(guān)系，線性范圍在5 ng/mL~2000 ng/mL之間，最低檢出限為2.75 ng/mL。
　　3.生物傳感器的優(yōu)化結(jié)果：SA濃度為0.033 mg/mL；雜交緩沖液為pH值為7.6的0.01 mol/LPBS和0.1 mol/LNaCl溶液，適配體和互補鏈濃度為5μmol/L。在最優(yōu)條件下，該方法的線性范圍在0.8 ng/mL~180 ng/mL之間，最低檢出限為0.4 ng/mL。
　　結(jié)論：