新型藥物遞送系統(tǒng)LTV-HR與酸敏感性穿膜肽LH-1、LH-2的設(shè)計、合成以及活性測定.pdf

1、傳統(tǒng)的腫瘤治療方案中化學治療具有嚴重的毒副作用，因為抗腫瘤藥物具有滲透性差以及不能特異性生物分布的特點。為了克服抗腫瘤藥物的這些缺點，高滲透性、靶向性、安全性的載體的研究發(fā)現(xiàn)受到業(yè)界的廣泛關(guān)注。現(xiàn)在細胞穿膜肽被認為是最有潛力的藥物載體之一。它具有快速大量進入細胞內(nèi)以及低毒的特點，但是天然的細胞穿膜肽不能區(qū)分正常組織和腫瘤組織。目前提出的靶向修飾策略分為兩種：一種是靶向到腫瘤部位微環(huán)境，因為腫瘤部位的低pH值、基質(zhì)金屬蛋白酶、乏氧以及脈管

2、系統(tǒng)與正常組織部位的存在差異；一種是受體與配體靶向策略，研究者們發(fā)現(xiàn)許多腫瘤細胞表面存在過表達的受體，而正常細胞則不存在或者低表達。
　　本論文研究的第一部分我們設(shè)計了一種新的藥物遞送系統(tǒng)。課題組以前設(shè)計出了一條酸敏感性穿膜肽HR-1，它具有在生理條件下穿膜活性低而在酸性條件時卻擁有高穿膜活性的特點。但HR-1的靶向為被動靶向，為了增強HR-1攜帶抗腫瘤藥物進入細胞的能力，我們決定將酸敏感性肽HR-1與主動靶向肽LTV通過半胱氨酸

3、連接得到新的藥物遞送系統(tǒng)LTV-HR，其中LTV能夠主動靶向到乳腺癌細胞上過表達受體HER2。LTV-HR在與喜樹堿（CPT）通過二硫鍵共價結(jié)合，得到LTV-CPT-HR。在激光共聚焦、細胞凋亡實驗和抗腫瘤活性實驗中我們發(fā)現(xiàn)藥物遞送系統(tǒng)LTV-HR具有很好的酸敏感性，它在低酸條件pH6.0時攜帶了更多的喜樹堿進入癌細胞中，但是在拮抗實驗中我們發(fā)現(xiàn)LTV-HR中的靶向肽LTV并沒有顯示出很明顯的主動靶向作用。在體外實驗中，我們發(fā)現(xiàn)不管是與

4、細胞長時間共孵育或在不同pH條件下的共孵育以及乳酸脫氫酶釋放實驗中LTV-HR皆展示了安全低毒的特點。但在溶血活性實驗中，在高濃度200μmol/L時溶血率達到了13.35％，但是100μmol/L時即為測試最大濃度40μmol/L的2.5倍時溶血率為3.44%，說明在測試濃度范圍內(nèi)LTV-HR是安全的。綜上所述，LTV-HR具有很好的酸敏感性，同時具有低毒性的特點，它有望成為腫瘤靶向治療的載體之一。
　　本論文研究的第二部分我們

5、設(shè)計了兩種新的酸敏感性穿膜肽。我們對母肽LK（LKKLLKLLKKLLKL-NH2）進行氨基酸替換改造得到了肽LH-1與LH-2。在細胞攝取實驗中我們看到LH-2顯示出了明顯的酸敏感性，它在pH6.0條件下的熒光強度顯著高于pH7.4條件，說明在酸性條件下LH-2大量的被細胞攝取。而LH-1在兩個pH條件下細胞攝取沒有明顯區(qū)別。在毒性實驗中，我們發(fā)現(xiàn)LH-1、LH-2與母肽LK相比毒性都顯著降低。在不同pH條件肽毒性實驗與LDH釋放實驗

6、中LH-2顯示毒性皆很弱但LH-1顯示出了差異性，在pH7.4時LH-1的細胞存活率和LDH釋放率顯著低于pH6.0條件，說明LH-1在pH7.4時正電荷被屏蔽所以毒性作用表現(xiàn)很低，而在pH6.0時LH-1中組氨酸被質(zhì)子化帶上大量正電荷從而表現(xiàn)出和母肽相似的毒性作用。綜合毒性實驗以及細胞攝取實驗的結(jié)果，我們選擇酸敏感性好且毒性很低的LH-2與喜樹堿結(jié)合做抗腫瘤活性實驗，MTT數(shù)據(jù)顯示LH-2在pH6.0時擁有更強的穿膜效應，攜帶了更多的