新型凝膠蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移裝置的研究初探.pdf

1、隨著包括人類在內(nèi)的幾十種生物體基因組測序的完成，生命科學(xué)的研究重點轉(zhuǎn)移到了后基因組時代的重要組成部分-蛋白質(zhì)組學(xué)。目前在蛋白質(zhì)組研究中將應(yīng)用最多的分離技術(shù)-二維聚丙烯酰胺凝膠電泳(2D-PAGE)和日益普及的生物質(zhì)譜鑒定技術(shù)相連接是當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)。一種較新的轉(zhuǎn)移技術(shù)是毛細(xì)管電泳轉(zhuǎn)移，相比其它連接技術(shù)此方法在轉(zhuǎn)移時間和轉(zhuǎn)移裝置的通用性上獲得很大的突破。 本論文建立了一種新型的凝膠蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移裝置，力求實現(xiàn)垂直方向上的蛋

2、白質(zhì)電提取和電排出轉(zhuǎn)移。在凝膠蛋白質(zhì)毛細(xì)管轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)上加入了兩處改動：1．使用未涂層的熔融石英毛細(xì)管和添加了陽離子表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨的緩沖液，產(chǎn)生反向電滲流；2．在毛細(xì)管與凝膠的接觸端引入一電極，形成三電極控制的凝膠蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移。通過實驗室前期的工作及后續(xù)改進實驗，驗證了改動后的凝膠蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移是可行的，并對一些相關(guān)因素進行了考察。在垂直蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移單元的研究中，通過預(yù)試驗和以蛋白質(zhì)溶液及凝膠為轉(zhuǎn)移樣品的電轉(zhuǎn)移離線檢測實驗，

3、階段性的分別驗證了反向電滲流對抗重力將下端溶液提升至上端槽的可行性、新裝置在轉(zhuǎn)移過程中的三電極可操作性以及自制的垂直毛細(xì)管電轉(zhuǎn)移裝置對凝膠中蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移可行性。 用毛細(xì)管電泳紫外檢測作為離線檢測手段來模擬質(zhì)譜，在檢測靈敏度較低的情況下，仍然取得了一定的初步研究成果。垂直方向上的電泳轉(zhuǎn)移大大縮短了從凝膠蛋白質(zhì)到后續(xù)檢測的連接時間；三電極的設(shè)計使得凝膠中蛋白質(zhì)的提取和之后的轉(zhuǎn)移排出更容易實現(xiàn)和控制；轉(zhuǎn)移單元制作簡單，成本低廉，也是