內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3參與自噬并影響膽固醇流出機制初探.pdf

1、目的:本研究以肝癌細胞HepG2為研究對象，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3(Reticulon3，RTN3)與自噬的關系，并對RTN3參與細胞脂質(zhì)代謝與膽固醇流出及其可能的機制做初步的探討。
　　方法:(1)通過營養(yǎng)剝奪誘導細胞發(fā)生自噬，WB檢測RTN3和自噬蛋白微管相關蛋白1輕鏈3B(microtubule-associated protein1 lightchain3B，LC3B)的蛋白水平，并調(diào)節(jié)RTN3表達水平檢測Beclin1與LC3

2、B的含量，激光共聚焦檢測RTN3是否參與自噬泡形成。(2)免疫共沉淀檢測RTN3是否與Bcl-2和Beclin1有相互作用，激光共聚焦檢測它們是否有共定位。(3)不同濃度HDL和他汀刺激取樣WB檢測RTN3與LC3B表達變化，探討RTN3是否參與調(diào)控相關脂質(zhì)的代謝過程。(4)調(diào)節(jié)RTN3表達用油紅O染色檢測胞內(nèi)脂質(zhì)變化，并用膽固醇流出檢測RTN3對膽固醇流出的影響。(5)調(diào)節(jié)RTN3表達并用WB檢測RTN3與ABCA1表達變化，在HDL

3、和他汀刺激下檢測RTN3與ABCA1是否有共定位，初步探討RTN3參與膽固醇流出機制。
　　結果:(1)營養(yǎng)剝奪誘導細胞自噬時，RTN3和LC3B均表達上調(diào)，上調(diào)RTN3表達則使LC3B明顯增高;激光共聚焦實驗發(fā)現(xiàn)LC3B和RTN3存在共定位。(2)免疫共沉淀和激光共聚焦結果表明RTN3與Beclin1存在相互作用。(3)隨著HDL濃度增加，RTN3和LC3B均表達下調(diào)，他汀濃度增加時，RTN3和LC3B均表達上調(diào)。(4)油紅O染

4、色發(fā)現(xiàn)在RTN3高表達的細胞中脂滴數(shù)量下降，而RTN3低表達時脂滴在細胞內(nèi)出現(xiàn)累積。當無HDL處理且RTN3高表達時膽固醇流出率高于RTN3低表達和正常組，在高濃度HDL誘導膽固醇流出時，RTN3高表達和低表達均抑制膽固醇流出。(5)在RTN3高表達和低表達時，ABCA1蛋白表達下降，并檢測到ABCA1與RTN3共定位于胞內(nèi)囊泡中。
　　結論:(1) RTN3與Beclin1相互作用影響HepG2細胞的自噬水平;(2) RTN3可