基于脫堿基位點(diǎn)凝血酶的免標(biāo)記檢測.pdf

1、DNA是染色體的主要組成成分，同時(shí)也是遺傳信息的載體。然而，細(xì)胞內(nèi)的DNA不斷受到外界或內(nèi)部因素的干擾。一個(gè)細(xì)胞每天約產(chǎn)生104個(gè)缺嘌呤位點(diǎn)和500個(gè)缺嘧啶位點(diǎn)，簡稱脫堿基位點(diǎn)，即AP位點(diǎn)。目前，對(duì)AP位點(diǎn)的檢測蓬勃發(fā)展，并已將其應(yīng)用于分析檢測領(lǐng)域。作為一類特殊的寡核苷酸鏈，核酸適配體在目標(biāo)分子識(shí)別中有著高靈敏度與高特異性。
　　凝血酶是一種非常重要的蛋白酶，具有促凝和抗凝雙重功能，是機(jī)體凝血系統(tǒng)中重要的衡量指標(biāo)。其在調(diào)控血栓形成

2、、組織修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。因此，對(duì)凝血酶快速、準(zhǔn)確的檢測在臨床診斷中具有重要意義。
　　本文在與凝血酶核酸適配體鏈(Apt15的3'端延長6個(gè)堿基)部分互補(bǔ)的單鏈DNA中引入AP位點(diǎn)，設(shè)計(jì)了含AP位點(diǎn)的雙鏈DNA，即AP-dsDNA。分別以銀納米簇(AgNCs)和2-氨基-6，7-二甲基-4-羥基蝶啶(diMe-pteridine)為熒光探針，基于熒光猝滅和恢復(fù)機(jī)理構(gòu)建了兩種免標(biāo)記的凝血酶檢測傳感器。
　　研究發(fā)現(xiàn)，AP-

3、DNA的長度對(duì)于檢測體系有著重要影響，采用長度適宜的AP-DNA可以提高檢測的靈敏度。同時(shí)，考察了緩沖溶液、孵育時(shí)間、溫度等對(duì)檢測體系的影響。在優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件的基礎(chǔ)上對(duì)凝血酶樣品進(jìn)行檢測，得到其線性范圍。以Ag NCs為熒光探針時(shí)，凝血酶線性范圍:2.98×10-8～1.00×10-7 mol/L，檢出限為1.69×10-8 mol/L(S/N=3)。以diMe-pteridine為熒光探針時(shí)，凝血酶線性范圍:9.09×10-9～9.2×