中國被毛孢固體和液體培養(yǎng)中生長特性的研究.pdf

1、本文綜述了冬蟲夏草和中國被毛孢的生物學特性及其研究進展,其中重點概述了冬蟲夏草菌無性型的確證、中國被毛孢形態(tài)學和生長特性、以及菌體活性物質(zhì)的提取和檢測,之后在此基礎(chǔ)之上展開實驗和研究。實驗以中國被毛孢為研究對象,經(jīng)過培養(yǎng)基優(yōu)化實驗后,分別在固體和液體條件下培養(yǎng)中國被毛孢無性型,通過測定:1)中國被毛孢液體培養(yǎng)條件下,菌體生物量、多糖、甘露醇、蛋白質(zhì)等有效藥用成分含量以及過氧化氫酶、幾丁質(zhì)酶、脲酶、蛋白酶等相關(guān)酶活力的動態(tài)變化。2)中國被

2、毛孢固體培養(yǎng)條件下,菌體形態(tài)學相關(guān)特性(包括菌絲、分生孢子的特征和形成機制)和菌體生物量、菌體多糖、甘露醇含量的動態(tài)變化。取得以下研究結(jié)果:
　　 1.通過碳源、氮源、添加物的單因子實驗以及L934多因子正交試驗,優(yōu)化中國被毛孢培養(yǎng)基成分和配比,結(jié)果表明:中國被毛孢生長最佳碳源、氮源、添加物分別為:葡萄糖、水解乳蛋白和酵母粉、鮮牛奶,其最佳配比依次為2％:0.5%:0.1%:20%。
　　 2.液體培養(yǎng)中,通過檢測菌體生

3、物量、采用葸酮-硫酸法檢測菌體多糖含量、高碘酸鈉比色法檢測菌體甘露醇含量、考馬斯亮藍法檢測菌體蛋白質(zhì)含量,結(jié)果表明:菌體生物量在第16d達到最大,最高得率為2.74mg/mL,菌體多糖、甘露醇、蛋白質(zhì)含量與菌體生物量成正相關(guān),其最大含量分別為4.73%、3.54%、20.99%。不同溫度條件下,18℃菌體生物量和菌體多糖含量要高于同時間段的其他溫度條件,而甘露醇則是20℃培養(yǎng)條件下含量更高。
　　 3.液體培養(yǎng)條件下,采用高錳酸

4、鉀滴定法檢測過氧化氫酶活力、N-乙酰葡萄糖胺比色法檢測幾丁質(zhì)酶活性、靛酚藍比色法檢測脲酶活性、茚三酮比色法檢測蛋白酶活性,結(jié)果表明:過氧化氫酶和蛋白酶的活性隨著培養(yǎng)時間的增加而逐漸提高;脲酶活性在第4-8d逐漸提高,8d活性達到最高,之后出現(xiàn)下降;幾丁質(zhì)酶在第8d-20d酶活力逐漸提高。
　　 4.固體培養(yǎng)條件下,通過光學顯微鏡記錄觀察菌體結(jié)構(gòu)、特征和生長方式、菌體無性孢子(分生孢子)的形成機制、血球計數(shù)版統(tǒng)計分生孢子數(shù)量變化,

5、結(jié)果表明:中國被毛孢菌絲主要是以出芽生長的方式繁殖,分生孢子主要是由分生孢子囊縱裂形成對生分生孢子的方式形成。分生孢子在培養(yǎng)到第20d時能明顯的檢測到,其數(shù)量在第30d達到最大,不同的溫度條件對分生孢子形成時間沒有影響,但是對分生孢子的數(shù)量有影響,以14℃條件下分生孢子數(shù)量更高。
　　 5.固體培養(yǎng)條件下,菌體生物量、多糖、甘露醇的含量隨著培養(yǎng)時間的增長逐漸增高,培養(yǎng)前期(0-20d),其差異不明顯,隨著物質(zhì)的積累,差異逐漸明顯