海藻糖合酶的高效表達(dá)及固定化.pdf

1、大腸桿菌發(fā)酵得到海藻糖合酶，催化麥芽糖轉(zhuǎn)化為海藻糖是生產(chǎn)海藻糖的一條重要途徑。尋找轉(zhuǎn)化率高、副產(chǎn)物少的海藻糖合酶是實現(xiàn)工業(yè)化的基礎(chǔ)，可將海藻糖合酶進(jìn)行固定化，通過循環(huán)利用而降低工業(yè)化成本。
　　現(xiàn)有實驗室自行改造的產(chǎn)海藻糖合酶菌株已實現(xiàn)工業(yè)化，為了創(chuàng)造更大的價值，一方面將工業(yè)化的海藻糖合酶進(jìn)行固定化，另一方面篩選更優(yōu)的基因在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)。
　　因此本論文主要包括兩個方面的內(nèi)容:
　　1.嘗試用三種方法將海藻糖合酶

2、進(jìn)行固定化，分別為無載體固定化、納米花固定化及樹脂固定化。無載體固定化加快了反應(yīng)速度，相同底物濃度，反應(yīng)時間縮短約一半;納米花固定化方法較為新穎，形成了納米花結(jié)構(gòu)，在適宜的條件下，酶活略高于游離酶;樹脂固定化是三種方法中效果最好的，載體價格低廉，固定化方法簡單，不需要添加交聯(lián)劑，能適應(yīng)高濃度底物和50℃的高溫反應(yīng)條件，循環(huán)批次較多。24h為一個反應(yīng)周期，連續(xù)循環(huán)使用14批，轉(zhuǎn)化率為原來的80％，且副產(chǎn)物葡萄糖的量較游離酶減少約3-7g·

3、L-1左右。為了克服載體易被攪碎的缺點，進(jìn)行過柱反應(yīng)，結(jié)合該固定化酶模擬了新的工藝流程圖，將副產(chǎn)物除掉，在結(jié)晶后的母液中繼續(xù)添加固定化酶反應(yīng)，可大大節(jié)省工業(yè)成本。
　　2.篩選了五種不同來源的基因在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，最終篩選出一個來源為彎曲高溫單孢菌Thermomonospora curvata DSM43183的海藻糖合酶，該海藻糖合酶在20mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％的高濃度麥芽糖底物中轉(zhuǎn)化率能達(dá)到68.7％左右，比實驗室目前菌株的