細(xì)菌中乙偶姻代謝相關(guān)研究.pdf

1、本論文對(duì)乙偶姻在細(xì)菌體內(nèi)的分解代謝相關(guān)的未知蛋白AcoX進(jìn)行了NCBI序列比對(duì),對(duì)其性質(zhì)及功能進(jìn)行了預(yù)測(cè),并以Pseudomonas putida KT2440的基因組為模板,克隆表達(dá)了acoX基因,并對(duì)純化后的AcoX進(jìn)行了圓二色譜分析。
　　 NCBI中將AcoX注釋為NADK,NADK家族的氨基酸序列上有兩段高度保守的序列:GGDG模序和Gly-rich模序。但通過(guò)對(duì)九個(gè)物種的典型的AcoX氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),它僅有保守的

2、GGDG模序以及自己獨(dú)特的保守序列,而沒(méi)有Gly-rich模序。因此認(rèn)為AcoX不是NADK,并進(jìn)一步用實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了證明。
　　 以P.putida KT2440的基因組為模板,根據(jù)其acoX序列設(shè)計(jì)引物,克隆表達(dá)acoX基因,并用鎳螯合親和層析法對(duì)AcoX進(jìn)行了純化,得到的純化蛋白用圓二色譜對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,分析結(jié)果表明,AcoX為α螺旋和β折疊混合型。
　　 本論文還以Bacillus subtilis168的基因

3、組為模板,根據(jù)其acoA序列設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,克隆表達(dá)了acoA基因,并對(duì)其進(jìn)行純化,用純化后的蛋白進(jìn)行了E1的酶活驗(yàn)證,實(shí)驗(yàn)沒(méi)有檢測(cè)到酶活,暗示了E1是由E1α亞基和E1β亞基共同編碼的,β亞基對(duì)E1的正確折疊起到不可替代的作用。
　　 另外,本論文還以葡萄糖為底物,用氣相色譜檢測(cè)產(chǎn)物,實(shí)驗(yàn)表明,在葡萄糖發(fā)酵過(guò)程中,首先產(chǎn)生乙偶姻,然后會(huì)有少量的2,3-丁二醇產(chǎn)生,但在較短的時(shí)間內(nèi),2,3-丁二醇產(chǎn)生后又首先被耗盡,實(shí)