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簡介：結核病作為全球性的健康問題，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升態(tài)勢。分枝桿菌MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS是已經發(fā)現的最為重要的傳染性病原體之一，它能夠在宿主巨噬細胞中持續(xù)存活，每年引起八百萬人感染，其中有三百萬病人由于得不到合理的治療而死亡。此外，在過去40年以來，一直沒有開發(fā)出治療效果比異煙肼更優(yōu)的藥物。而多耐藥菌株MUTIDRUGRESISTANT，MDR的出現和廣泛傳播，以及與艾滋病的共同作用，使得結核病的疫情進一步惡化。開發(fā)更有效、更快速的抗結核新藥，徹底攻克結核病已勢在必行。結核桿菌的基因組含4000多個基因，其中有250個基因編碼脂肪酸代謝相關的酶，和大腸桿菌相比多了4倍有余。結核桿菌的細胞壁以肽聚糖為基本架構，共價結合阿拉伯半乳糖及分支菌酸。分支菌酸是自然界中最大的脂肪酸，它和結核桿菌的毒力、結核桿菌逃逸免疫系統(tǒng)攻擊的能力息息相關。另外，細胞壁所含的脂類約占細胞壁干重的60％等等，這些事實均說明了脂肪酸代謝對結核桿菌的重要性。丙二酰COAACP轉化酶MALONYCOAACPTRANSACYLASE，MCAT是脂肪酸代謝中的一個關鍵酶，催化MALONYLCOA形成MALONYLACP，后者進入脂肪酸碳鏈延長循環(huán)，每次增加2個碳原子。ACPACYLCARRIERPROTEIN是FASII系統(tǒng)中的小且酸性的蛋白，它在脂肪酸代謝中起著重要作用，與大分子脂肪酸的合成及結核細胞壁的裝配緊密相關。ACP與MCAT都是很好的抗結核藥物靶位的候選對象。本論文共克隆、表達、純化了結核桿菌的兩個MCAT和三個可能的ACP蛋白，并檢測了這些蛋白的一些生理生化功能及特性。在酶活測定中，我們了解到FABD和FABD2的性能相近，幾種二價陽離子對酶活的影響不大；RVL344轉錄的蛋白確實具有載酰功能，而RV0033可能在別的通路中發(fā)揮作用。RTPCR試驗闡明了兩個MCAT蛋白在結核桿菌侵入巨噬細胞后的轉錄情況，其中FABD的表達上調，而FABD2表達量減少，證實了結核桿菌兩個MCAT蛋白在結核病急性及持續(xù)感染中的重要性。通過WESTERN檢測，耐藥菌株感染的病人血清和敏感株病人血清中都具有ACPL344的抗原，說明了ACPL344的重要性及它作為結核診斷的輔助指標的可能。此外，我們還通過RVL344基因的定點突變試驗，驗證了ACPL344蛋白中一些序列的重要性與保守性。圓二色譜的測定，使我們得到了幾種蛋白的二級結構。為了獲得這些蛋白的三維結構，設計出活性小分子化合物，我們還與清華大學結構生物學實驗室合作，對這些蛋白進行了晶體生長的嘗試性實驗。最終得到兩個MCAT的晶體，其中FABD的分辨率在2A，而FABD2晶體的分辨率只有6A。最后，我們解析出FABD蛋白的晶體結構。雖然未能得到ACPL344的晶體結構，我們仍用同源模建的方法，得到了該蛋白模擬的三維結構，為設計有活性的小分子化合物打下良好基礎。

簡介：第一部分目的比較潰瘍性結腸炎患者與無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65表達差異，探討其臨床意義。方法募集12名無器質性腸道疾病志愿者（男女各6名，平均年齡4613±1205歲）與16名潰瘍性結腸炎患者（男性患者10名，女性患者6名，平均年齡5042±1043歲），電子結腸鏡下取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。實時定量PCR法檢測其基因表達，免疫熒光染色檢測NFΚBP65蛋白表達強度，T檢驗分析兩組之間的差異。結果無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為053±024、210％±064％，潰瘍性結腸炎患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為519±337、1522％±316％，兩組之間差異具有統(tǒng)計學意義（P結論本文在前人基礎上再次證實NFΚBP65參與潰瘍性結腸炎的發(fā)病機制，以此為切入點進行深入研究可能為該病的診斷與治療帶來突破。第二部分目的比較潰瘍性結腸炎患者與結直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65表達差異，探討其臨床意義。方法12名無器質性腸道疾病志愿者、16名潰瘍性結腸炎患者及18名結直腸腺癌患者被納入實驗，電子結腸鏡或手術取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。逆轉錄聚核酶鏈反應法（RTPCR）檢測各組腸黏膜NFΚBP65MRNA的表達，免疫組化法檢測各組腸黏膜NFΚBP65蛋白表達強度，單因素方差分析三組之間的差異。結果無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為010±003、206％±070％，潰瘍性結腸炎患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為096±011、3616％±699％，結直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為042±077、954％±277％，三組之間差異具有統(tǒng)計學意義（P結論盡管炎癥與腫瘤存在某種聯(lián)系已在學界達成共識，課題組也觀察到結直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65的表達較無器質性腸道疾病志愿者增加，但其表達強度并非之前文獻報道的那么高，課題組認為抑制NFΚBP65的表達可能是治療潰瘍性結腸炎的較好思路，但不認為抑制NFΚBP65的表達能從根本上治療結直腸癌。第三部分目的比較分化程度不同的大腸癌患者與無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜血管緊張素Ⅱ（ANGIOTENSINⅡ，ANGⅡ）及其Ⅰ型受體（AT1R）表達差異，初步探討ANGIIAT1R信號通路與大腸癌之間的關系。方法腸鏡室募集大腸癌患者24名（病理學檢查證實其中9名為大腸高分化腺癌患者，9名為大腸中分化腺癌患者，6名為大腸低分化腺癌患者）及6名無器質性腸道疾病志愿者，電子結腸鏡下取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。免疫組化法檢測各組腸黏膜ANGIOTENSINⅡ及AT1R蛋白表達強度，單因素方差分析各組之間的差異。結果大腸腺癌患者腸黏膜ANGⅡ和AT1R的表達較無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜ANGⅡ和AT1R表達明顯增強（P005）；中、低分化組較高分化組AT1R表達增加（P結論ANGIIAT1R信號通路參與大腸癌的發(fā)病過程，可能成為大腸癌治療的新靶點。第四部分目的探討難治性肛瘺的中西醫(yī)結合治療方法并初步總結其療效。方法病例納入標準為同意接受本中西醫(yī)結合治療方法的難治性低位肛瘺患者（外口離肛緣2CM以上的患者），剔除以下病例一些能利用肛瘺切開術輕易治愈的單純性肛瘺患者、直腸陰道瘺患者、直腸膀胱瘺患者、炎癥性腸病患者、肛門先天異常患者、有肛門失禁病史患者及有手術禁忌癥的患者。手術主要器械為瘺管銑刀，術后主要方藥為拔毒生肌散與黃連膏，治療簡要操作步驟如下肛周常規(guī)消毒→麻醉滿意→鋪無菌巾→肛管內碘伏棉球消毒→擴肛并確認病情→探針由外口探入從內口穿出→在與內口對應的距肛緣15CM處作一與瘺管走行方向一致的梭形切口作為新外口→沿探針切開新外口與內口之間的皮膚、皮下組織及瘺管→組織剪修整所切的皮肉組織呈“V”狀敞開→銑刀桿循探針由外口探入從開窗處穿出→退出探針→銑刀頭安裝在肛內由開窗處穿出的銑刀桿上→位于外口之銑刀桿尾部連接微型電機→微型電機接通電源的同時術者持電機緩緩拉出轉動的銑刀→適當撐擴殘余瘺道→再次將探針從外口探入開窗處探出→利用探針將引流條引入殘存瘺道→每日雙氧水替硝唑生理鹽水沖洗傷口→早期傷口引流物渾濁階段，用蘸有拔毒生肌散的凡士林紗條引流；后期傷口引流物清稀階段，用蘸有黃連膏的凡士林紗條引流→適時拔除引流條。結果2009年8月至2009年11月間，課題組運用本中西醫(yī)結合療法治療8例低位單純性肛瘺患者及6例低位復雜性肛瘺患者（男12名，女2名，平均年齡355±1287歲），隨訪半年結果顯示1例未堅持換藥的患者術后1月復發(fā)，其他13例患者均痊愈；平均住院日為7天，患者傷口愈合時間為4143±610天；無1例患者出現術中術后嚴重并發(fā)癥。結論本中西醫(yī)結合療法之手術部分一方面清除了感染的肛腺并作一“V”型切口至肛緣，最大限度的保證術后不復發(fā)；另一方面機械化的隧道式切除瘺管壁肉芽組織而非全程切開瘺道，操作簡單、高效、微創(chuàng)；術后換藥階段融入辨證換藥理念，早期利用蘸有提膿祛腐方藥的凡士林紗條引流，后期用蘸有清熱解毒、消腫止痛方藥的凡士林紗條引流，確保腐去新生。早期臨床試驗結果顯示本中西醫(yī)結合療法是治療難治性肛瘺的一個較佳選擇，其療效好、創(chuàng)傷小，值得大力探索并加以推廣。

簡介：圍絕經期綜合征（PEIRMENOPAUSALPERIODSYNDROME，PPS），是婦女在絕經前后，雌激素水平下降，引起神經內分泌功能失調，免疫功能下降和植物神經系統(tǒng)功能紊亂的綜合征。肝郁是PPS重要病機。本研究運用證素辨證的方法對PPS肝郁及其兼雜特點展開研究，探討肝郁證的兼雜特征及其與植物神經系統(tǒng)功能紊亂等常見癥狀之間的關系。同時從單胺類等神經遞質水平研究產生肝郁及其兼雜證的物質基礎，并從基因層面分析圍絕經期綜合征肝郁及其兼雜特征的易感性，以深化對PPS肝郁的病機認識，同時為PPS的肝郁的早期診斷及防治提供客觀的依據。第一部分圍絕經期綜合征證素分布及肝郁兼雜特征與常見癥狀的相關性研究目的分析PPS婦女的病位病性規(guī)律和肝郁的兼雜特征，探討PPS常見癥狀與肝郁病理及其兼雜特征的相關性。方法收集PPS患者459例，采集相關臨床資料，以證素辨證的方法分析PPS的病位病性證素特征，肝郁兼雜特征，對PPS常見證素進行聚類分析，分析肝郁及其兼雜與PPS常見癥狀的關系。結果1PPS前六位常見癥狀依次為感覺異常6449％，失眠5948％，易激動5468％，眩暈4793％，骨關節(jié)痛、肌肉痛4619％，潮熱汗出4357％2PPS病位涉及心、肝、脾、肺、腎、胞宮、胃、膽、大腸和膀胱。肝為最多7255％P＜001，其次為腎、脾和胞宮P＜001。3PPS實證病性涉及氣滯、痰、濕、血瘀、熱、寒。氣滯為最多達5839％，以氣滯、痰、濕、血瘀為主P＜0014PPS虛證病性涉及陰虛、氣虛、血虛、陽虛、陽亢、精虧。其中以陰虛為最多6972％P＜001，其次為氣虛、血虛和陽虛P＜001，再次為陽亢。5PPS常見病位病性證素聚類顯示氣滯、血瘀、痰和肝為一大類，氣虛、陽虛、血虛、陰虛、脾、腎、濕為一大類，其余病性病位為一大類。6PPS的常見癥狀中，肝郁組的眩暈發(fā)生率低于非肝郁組P＜005，骨關節(jié)痛、肌肉痛發(fā)生率高于非肝郁組P＜005，其他癥狀發(fā)生率無差別。7PPS肝郁兼雜特征病位兼雜主要為腎、脾和胞宮實證病性兼雜主要為痰、血瘀、濕、和熱虛證病性兼雜主要為陰虛、氣虛、血虛、陽虛。8PPS肝郁兼雜特征對其常見癥狀的影響肝郁病位兼腎者潮熱汗出的發(fā)生率高于病位不兼腎者P＜005肝郁兼血瘀者骨關節(jié)痛肌肉痛的發(fā)生率顯著高于無兼血瘀者P＜001，潮熱汗出、失眠的發(fā)生率高于無兼血瘀者P＜005肝郁兼熱的抑郁發(fā)生率高于無兼熱者P＜005肝郁兼氣虛者心悸的發(fā)生率顯著高于無兼氣虛者P＜001，泌尿系癥狀發(fā)生率高于無兼氣虛者P＜005肝郁兼陰虛者泌尿系癥狀發(fā)生率顯著高于無兼陰虛者P＜001肝郁兼血虛者泌尿系癥狀發(fā)生率高于無兼血虛者（P＜005）。結論1PPS是多個臟腑功能失調的結果，病性涉及寒熱虛實，其中主要病位在肝、腎、脾、胞宮實證以氣滯、痰、濕、血瘀為主虛證以陰虛、氣虛、血虛、陽虛為主。實證多與肝有關，虛證多與腎、脾有關。2PPS肝郁常兼腎、脾、胞宮的病理變化，也常兼痰、血瘀、濕、和熱之實證，和陰虛、氣虛、血虛、陽虛的虛證。3PPS肝郁及其兼雜特征會影響PPS常見癥狀的表現形式。第二部分圍絕經期綜合征肝郁及其兼雜特征的分子生物學基礎研究一、圍絕經期綜合征肝郁與神經遞質的相關性研究目的觀察PPS肝郁及其兼雜特征與神經遞質的關系，探討PPS肝郁及其兼雜特征的部分分子生物學基礎。方法應用ELISA等方法檢測189例PPS患者血液中的單胺類神經遞質（5羥色胺5HT，去甲腎上腺素NE，多巴胺DA）以及Β內啡肽ΒEP。比較PPS肝郁組和非肝郁組神經遞質差異，比較肝郁不同兼雜神經遞質差異。結果1肝郁組總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素顯著高于非肝郁組P＜001，肝郁組FSH高于非肝郁組P＜001。2基于肝郁LOGISTIC回歸中，進入方程的自變量是直接膽紅素、谷氨酰轉肽酶和谷丙轉氨酶P＜001。3肝郁組的DA和NE較非肝郁組為低P＜0054肝郁病位兼腎者DA和5HT顯著低于單純肝郁者P＜001肝郁兼痰者DA顯著低于無痰者P＜001，5HT低于無痰者P＜005肝郁兼濕者5HT顯著低于無濕者P＜001肝郁兼熱者5HT顯著低于無熱者P＜001肝郁兼氣虛者5HT顯著低于無氣虛者P＜001肝郁兼血虛者DA和5HT均顯著低于無血虛者P＜001肝郁兼陰虛者DA和5HT均低于無陰虛者P＜005。結論1PPS患者DA和NE的降低可能是肝郁發(fā)生的分子生物學基礎。2PPS單胺類神經遞質的變化與肝郁兼雜特點密切相關。3總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素可以做為PPS肝郁辨證的客觀依據之一。二、圍絕經期綜合征肝郁與雌激素受體基因多態(tài)性相關性研究目的觀察PPS肝郁及其兼雜特征與ER基因型的關系，挖掘PPS肝郁及其兼雜特征的易感因素方法應用探針法檢測189例PPS患者血液中ERΑRS9340799AG、ERΒRS1256030CT，RS3020444TC多態(tài)性。結果1肝郁組的ERΒRS3020444TT頻率8593％高于與非肝郁組6557％P＜001，其余基因型分布無差異。PPSERΒRS3020444為TT型的患者發(fā)生肝郁證的相對危險度為3208。2肝郁患者ERΒRS3020444和ERΒRS1256030的TTCC頻率高于非肝郁者P＜005，肝郁患者ERΒRS3020444和ERΑRS9340799的TTAG的頻率高于非肝郁者P＜005，TCAG和CCAG的頻率低于非肝郁者P＜005。3肝郁兼濕、兼痰ERΒRS3020444基因型分布分別與無濕，無痰者有差異（P＜005），肝郁兼熱、兼氣虛ERΒRS1256030基因型分布分別與無熱、無氣虛者有差異P＜005，肝郁兼濕、兼氣虛、兼血虛、兼陽虛ERΑRS9340799基因型分布分別與無濕、無氣虛、無血虛、無陽虛有差異P＜005。結論1ERΒRS3020444TT型可能是PPS肝郁證的遺傳易感基礎之一。2PPS肝郁兼雜的易感性與ERΑRS9340799、ERΒRS3020444、ERΒRS1256030基因型有關。

簡介：分類號密級洳?！?、嗜博士學位論文⑧單位代碼10335學號蝕Z幽30英文論文題目叢Q壁壁墜魚RID鲴TI丞ATIQNA曲FU璉￡廿ONALCHARACTERIZATIONOFUBIQUITINENZVMESUBE2DCNARACTERLZANONOLUBLAULNNENZVMESLUB．匕ZJLJANDUIP5INABALONE辦口Z湯￡西枷口煅記D勛，S耽巫PN汜睨口ANA0VSTER一R口鼴口．S辦℃口口N口庀P托。SZS論文提交日期至Q坌生魚旦⑧AUTHOR’SSIGNATURESUPERVISOR’SSIGNATUREXTEMALREVIEWERSEXAMININGCOMMITTEECHAI印ERSONPROF．SIFALIEXAMININGCOMMITTEEMEMBERS里￡Q￡￡塾墜世I望Y蠡迅G￡Q￡LI塹西迪麴PROFXIAOLIUDATEOFORALDEF；MCE』墜墜星壘竺，2Q12

簡介：點擊查看更多基于制備環(huán)境的家蠶絲膠蛋白分子形態(tài)構象與生物學性能研究.pdf精彩內容。

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簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數據、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。研究生簽名锍導師簽章掃霧吁二級學院領導尊章‘。O心年歲月，J日河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內容外，文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名中文摘要乳腺癌ET方案新輔助化療前后分子生物學指標變化的分析摘要目的回顧性分析乳腺癌患者行新輔助化療前后其腫瘤組織ER、PR、HER2及KI67的免疫組化表達情況，觀察應用ET方案進行新輔助化療對乳腺癌分子生物學指標的表達有無影響。方法本研究選擇河北醫(yī)科大學第四院乳腺中心2010年1月至2014年8月收治的女性原發(fā)性乳腺癌患者82例，患者新輔助化療方案均為ET方案，在新輔助化療前均行粗針穿刺明確診斷并行免疫組化檢查明確ER、PR、HER2及KI67的表達情況，新輔助化療4周期后實施手術治療，術后標本同樣行免疫組化檢查明確腫瘤細胞ER、PR、HER2及KI67的表達情況，并對其新輔助化療前后的ER、PR、HER2及KI67的表達狀況進行比對分析。結果本研究發(fā)現乳腺癌新輔助化療前后有38例患者KI67的表達發(fā)生改變，占8085％38／47，其中表達增強的L例，減弱的37例，無陰性轉變?yōu)殛栃圆±?，陽性轉變?yōu)殛幮缘?0例；經統(tǒng)計學檢驗得出新輔助化療前后KI67的表達差異有統(tǒng)計學意義P005；ER表達有14例患者發(fā)生改變，占2979％14／47，其中表達增強的5例，減弱的9例，陰性轉變?yōu)殛栃缘?例，陽性轉變?yōu)殛幮缘?例；PR表達有17例發(fā)生改變，占3617％17／47，其中表達增強的6例，減弱的11例，陰性轉變?yōu)殛栃缘?例，陽性轉變?yōu)殛幮缘?例；HER2的表達有9例發(fā)生改變，占2308％9／39，其中表達增強的2例，減弱的7例，陰性轉變?yōu)殛栃缘?例，陽性轉變?yōu)殛幮缘?例；但ER、PR、HER2在新輔助化療前后的表達狀況無統(tǒng)計學意義胗O05。結論乳腺癌應用ET方案行新輔助化療，分子生物學指標中ER、PR、HER2、KI67的免疫組化表達在新輔助化療前后均有部分病例發(fā)生改變，但本研究中僅發(fā)現KI67新輔助化療前后的改變有統(tǒng)計學意義PO05；其變化主要體現在由新輔助化療前的高表達，轉變?yōu)榛熀笫中g標本的低表達，表明高表J。KKI67的腫瘤細胞對化療較為敏感，KI67是一項化療敏感指標，對預測療效有重要的指導意義。ER、PR、HER2的改變無統(tǒng)計學意

簡介：目的探討無遷徙生長現象碳青酶稀耐藥奇異變形桿菌生物學特性、耐藥機制及分子分型特點，為院內感染防控提供指導。此外，通過比較遷徙生長奇異變形桿菌與無遷徙生長奇異變形桿菌耐藥譜差異，為臨床針對該類細菌抗感染治療提供科學依據。方法回顧分析2013年1月至2014年12月武警杭州醫(yī)院臨床分離的奇異變形桿菌耐藥率收集其中碳青霉烯類耐藥無遷徙奇異變形桿菌，菌株經過多次傳代并觀察有無遷徙生長現象，通過半固體培養(yǎng)及鞭毛染色實驗觀察菌株動力及鞭毛利用脈沖凝膠電泳PFGEPULSEDFIELDGELELECTROPHESIS分析菌株之間同源性采用瓊脂稀釋法及ETEST法進行藥物敏感性實驗，同時應用ESBLS雙紙片實驗和改良HODGE實驗進行表型確證，表型實驗陽性菌株采用PCR方法和測序分析明確耐藥基因型。運用S1PFGE聯(lián)合SOUTHERN印跡雜交及質粒電轉化試驗對碳青霉烯耐藥基因進行定位，并分析耐藥基因周圍環(huán)境。最后對電轉子進行目標基因擴增和藥敏驗證。結果無遷徙生長奇異變形桿菌生物學特性通過比較菌體鞭毛染色發(fā)現，鏡下無遷徙菌株菌體小且規(guī)則并明顯缺失鞭毛結構在半固體穿刺培養(yǎng)中只能沿穿刺線生長，不能沿線外蔓延擴散，推測可能由于無遷徙菌株，鞭毛結構缺失而失去遷徙生長的能力。兩種奇異變形桿菌生化特性相同。在不同培養(yǎng)基中生長情況提示，在含有膽鹽的麥康凱、SS平板上，兩種奇異變形桿菌均不能形成遷徙生長的菌落，群集運動消失。本次研究共統(tǒng)計奇異變形桿菌339株，其中無遷徙細菌42株遷徙菌對亞胺培南與美羅培南耐藥率分別為63％與32％，無遷徙菌耐藥率分別為572％與524％，兩種形態(tài)菌株對碳青霉烯耐藥率具有顯著差異42株無遷徒奇異變形桿菌中，碳青霉烯類耐藥的奇異變形桿菌為24株，占57％。對該24株碳青霉烯類耐藥無遷徙生長奇異變形桿菌進行PFGE同源性分析，結果提示分為3個克隆型，以克隆A型（2224株）流行為主，所有菌株改良HODGE實驗均為陽性，且均攜帶BLAKPC2基因，菌株動力實驗及鞭毛染色均為陰性SOUTHERN印跡雜交表明BLAKPC2基因分別定位在約為26KB，55KB，139KB不同大小質粒上部分菌株在攜帶BLAKPC2基因的質粒上同時攜帶BLATEM1、BLACTXM65、RMTB等多種耐藥基因攜帶BLAKPC2基因菌株周圍結構顯示，其上游含有插入元件ISKPN8，下游則由插入元件ISKPN6LIKE構成，該結構易導致耐藥基因在種屬間水平傳播。臨床資料回顧發(fā)現，該類細菌多數分離自呼吸道，病人多為氣管切開狀態(tài)，患者有住院時間長，大量使用廣譜抗生素的特點。結論無遷徙生長奇異變形桿菌因鞭毛結構缺失而失去遷徙生長的能力。該類菌具有較高碳青霉烯類抗生素的耐藥率，產KPC2型碳青霉烯酶是導致無遷徙奇異變形桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥的主要原因。碳青霉烯耐藥無遷徙生長奇異變形桿菌在我院呈克隆播散趨勢，應引起臨床高度重視。

簡介：分類號墨墨墨壘2密級洳≥J～涪博士學位論文⑧單位代碼幽學號LLQL2Q32提交日期2Q蘭生壘目壟蘭旦MOLECULARBIOLOGYOFD批P25OF彳掰而哦聊廳口C口西紗掃，萬記口NUCLEOPOLYHEDROVIRUSIVAUTHOR’SSIGNATUREN●■●JSUPERVLS0R7SSLGNATUREEXTEMALREVIEWERSEX鋤ININGCONML№ECHAI印ERSONGH曼塾GI魚旦GQQ塾G里墅Q魚墨墨Q￡SQQ魚HQ塑墮墜IY曼囟蟻EXAMIILINGCO舢ILITTEEMEMBERS基I墜GM曼塾GL旦里Q魚墨墨Q蘭H自I壘壘G墮塾＆曼墨鰱YY塑G塑叢I壘Q￡￡Q墼墨Q圣蜮I墊G墮塾IY曼堡I鯉至墜I壘塾GH墜里￡Q魚墨墨Q圣魚自I壘墜G也IY星墨量YXI墊魚墜G迎￡煦魚墨墨Q丕H自I塹G坐撾叢墨數DATEOFORALDEFENCE6．7．2013

簡介：引言外傷后細菌性致死性肉芽腫FATALBACTERIAGRANULOMAAFTERTRAUMA，FBGT是由高天文教授發(fā)現并命名的一種新疾病，該病在面部外傷愈合后發(fā)生，預后極差，患者死亡時均有腦部受累癥狀。以往國內多位專家曾先后診治過近20例，進行了認真的普通細菌分離、厭氧菌分離、真菌培養(yǎng)等研究，均未獲陽性結果；曾診為“結節(jié)病、真菌感染”，給予糖皮質激素、抗生素、抗結核、抗真菌等治療，效果不佳，患者全部在發(fā)病后的1到4年內死亡。在總結、分析前人分離、培養(yǎng)該病病原失敗的基礎上，采取嚴格厭氧、運送培養(yǎng)基及增菌肉湯等改進措施后，本課題組其他成員終于成功地從4例FBGT患者的皮損組織中分離培養(yǎng)出病原菌，初步研究表明該菌為革蘭陽性桿菌，但具體種屬不明。由于病原菌種屬、患者的致死機理等不明，盡管采取各種積極的治療措施，除我們所救治的6例患者中有1例獲救外，至今尚無救治成功的病例。FBGT的發(fā)病機制、致死機理的闡明已成為救治患者的關鍵。目的1分別采取PCR擴增FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA、測序結果BLAST比對及患者分離菌與PACNES標準株DNA雜交方法明確病原菌的種屬；采用細菌16SRRNAPCR的方法，檢測2例行尸檢患者病例2和3的病變腦組織是否存在細菌，闡明患者死亡原因，測序結果與皮損分離菌序列比對，明確腦內細菌是否與各自患者皮損分離菌為同一細菌，進一步證實從患者皮損分離的細菌就是FBGT的病原菌。2通過PCR擴增病例2的IFNΓ相關分子IAM，包括IFNΓR1、R2、STAT1、IL12Β、IL12RΒ1、Β2和STAT4的所有外顯子，測序結果與多個數據庫的野生型序列比較，尋找可能引起相應的IAM分子功能缺陷的多態(tài)性位點，初步明確FBGT的發(fā)病機制。方法1FBGT患者皮損分離病原菌分子生物學鑒定及死亡原因分析14例FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA鑒定1提取皮損分離菌的基因組DNA；2利用細菌通用引物擴增皮損分離菌的16SRRNA；3測序結果通過BLAST與已知細菌的16SRRNA序列進行同源性比對，明確FBGT患者皮損分離菌的具體種屬。2皮損分離病原菌與PACNES標準株DNA雜交1DNA結合采用共價法結合DNA到微孔板法進行DNADNA雜交，每個樣品4個平行重復；2標記DNAPHOTOACTIVATABLEBIOTINPAB標記探針DNA；3雜交4測定雜交率50℃雜交12小時，分別用2SSC01％TWEEN2050℃和室溫洗3次15分鐘，堿性磷酸酶法FLUOSTAROPTIMABMD測定雜交率360NM激發(fā)和460NM輻射。32例死亡患者病變腦組織細菌16SRRNA檢測、死亡原因分析1提取2例行尸檢患者病例2和3的病變腦組織基因組DNA；2病變腦組織細菌16SRRNAPCR檢測，明確患者死亡原因；3測序結果分別進行BLAST比對，初步明確病變腦組織內細菌的種屬，并與各自患者皮損分離菌的16SRRNA序列進行比較，明確病變腦組織內的細菌與皮損分離菌是否為同一細菌，進一步證實皮損分離菌就是FBGT的病原菌。2IAM基因外顯子擴增、功能缺陷多態(tài)性位點確定在本課題第一部分已明確PACNES就是FBGT的致病菌的基礎上，通過綜合分析FBGT患者的表型，結合PACNES毒力低，為胞內寄生菌等特點，充分借鑒他人研究成果，提出了IAM基因多態(tài)性是FBGT發(fā)病的重要機制的假說。進行了以下工作1設計IAM相關分子基因所有外顯子包含5和3端的片區(qū)的引物，并對引物進行BLAST比對，確保特異擴增；2PCR擴增，直接測序，測序結果與多個基因多態(tài)性數據庫EGPGSWASHINGTONEDU、GENECARD等的野生型序列比較，找出多態(tài)性位點；3針對此多態(tài)性位點重新設計引物，無關正常對照10人的相應外顯子PCR擴增，直接測序，證實正常人不存在此多態(tài)性位點；4通過PCR單酶切分析進一步證實病例2的多態(tài)性位點，并明確等位基因型；5綜合分析所發(fā)現多態(tài)性位點對相應基因的結構三維構像等、表達和功能可能的影響，進而確認能引起相應分子功能缺陷的多態(tài)性位點，初步明確FBGT的發(fā)病機制。結果1FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA鑒定、病變腦組織細菌16SRRNA檢測和死亡原因分析14例FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA基因序列經BLAST比對后與已知PACNESAB0972151GI26006299的同源性達99％，皮損分離病原菌為PACNES22例尸檢患者病變腦組織內均可檢測到細菌16SRRNA片段，患者死于細菌引起的腦感染；PCR測序結果與相應患者皮損分離菌的16SRRNA序列完全一致，腦內細菌與皮損分離菌為同一細菌。2IAM基因外顯子擴增、功能缺陷多態(tài)性位點確定1通過PCR測序與數據庫比對，發(fā)現IAM重要成員IL12RΒ1基因第五外顯子存在一個錯義突變271G→A，可引起所編碼氨基酸的改變91T→A，未發(fā)現其他IAM分子基因外顯子存在無義或錯義突變；2檢索多個多態(tài)性數據庫EGPGSWASHINGTONEDU、GENECARD等，未發(fā)現與IL12RΒ1基因第五外顯子錯義突變271G→A一致的多態(tài)性位點；310名正常對照IL12RΒ1基因第五外顯子在相應多態(tài)性位點均為野生型271GG；4PCRNAEI單酶切分析進一步證實病例2的IL12RΒ1基因第五外顯子突變?yōu)闉榧兒闲湾e義突變271AA5IL12RΒ1的錯義突變271G→A位于配體識別的關鍵區(qū)域，該突變可引起所編碼氨基酸的理化性質改變疏親水性，進而引起IL12RΒ1三維構像改變，綜合分析證實此錯義突變271G→A可引起IL12RΒ1與配體結合能力下降，導致IL12RΒ1功能缺陷。結論1本研究在以往研究的基礎上，通過分子生物學方法明確了PACNES為新疾病FBGT的病原，患者的死亡原因為PACNES所致的腦感染。2依據FBGT的臨床特點，通過廣泛查閱相關文獻，提出IAM基因多態(tài)性引起相應分子功能的缺陷是FBGT發(fā)病機制的假說；以此為基礎，檢測了病例2的IAM基因的所有外顯子，發(fā)現IAM的重要成員IL12RΒ1第5外顯子存在1個錯義突變271G→A，綜合分析發(fā)現該突變可引起編碼氨基酸疏水性改變，突變氨基酸位于配體結合的關鍵區(qū)域，可引起IL12RΒ1與配體結合能力下降，導致IL12RΒ1功能缺陷，進而導致IAM的核心分子IFNΓ表達障礙，通過對1例患者的深入研究，證實了提出的FBGT發(fā)病機制假說。

簡介：目的1鑒于惡性血液病真菌感染日趨嚴重，探討惡性血液病合并真菌感染的分子生物學診斷方法，以達到對真菌感染的早期診斷的目的。2隨著抗真菌藥物的廣泛使用，耐藥菌株逐漸增多，對菌株進行藥敏實驗，檢測對常用抗真菌藥物的敏感性。方法1采取患者靜脈血進行常規(guī)血液培養(yǎng)；對血培養(yǎng)陽性樣本進行菌株鑒定，并鑒定到種；使用改良的真菌DNA提取法進行基因提?。皇褂猛ㄓ靡颕TS1和ITS4進行基因擴增；使用MSPI酶對擴增產物進行酶切鑒定；對擴增產物進行測序，所得序列與GENBANK核酸庫已登錄的序列進行BLAST比對。2使用ATBFUNGUS3試條進行藥敏試驗?？拐婢幬飪尚悦顾谺（AMB）、5氟胞嘧啶（5FC）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）。結果1在500人份可疑真菌感染的全血標本中，共檢出陽性樣本115份。酶切鑒定結果為白色念珠菌48株417％，熱帶念珠菌27株235％，光滑念珠菌16株139％、克柔念珠菌11株96％、近平滑念珠菌8株70％、其他5株43％。與血培養(yǎng)分離鑒定結果基本一致。2擴增產物經序列比對后發(fā)現，與酶切結果完全一致。PCRRFLP檢測和鑒定結果與血培養(yǎng)法有較好的一致性，但是統(tǒng)計學上無意義（P005）。3真菌主要為白色念珠菌，占417％。體外抗真菌藥敏試驗對兩性霉素B（AMB）、5氟胞嘧啶（5FC）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（VRC）平均敏感率分別100％、9722％、6850％、7778％和8148％。其中對兩性霉素B、5氟胞嘧啶敏感性最好，耐藥率分別為0％和278％。對氟康唑的敏感性最差，耐藥率為3150％。結論1使用PCRRFLP進行菌株鑒定的技術敏感性、特異性高，與常規(guī)血培養(yǎng)方法比較耗時短，可以對真菌感染進行早期的診斷，有一定的臨床意義。2真菌感染主要由白色念珠菌、熱帶念珠菌引起。感染菌株對兩性霉素B，5氟胞嘧啶保持較高的體外活性，兩者是治療真菌的有效藥物。

簡介：目’錄摘要，IABSTRACT111第1章文獻綜述，111納米技術概述，112納米粒子的基本性質213納米顆粒的制備，414納米顆粒的表面改性和包覆修飾615磁性納米粒子在生物醫(yī)學領域的應用研究916納米顆粒的生物安全性及其影響因素研究，1417本論文研究的目的、意義及主要內容，15第2章磁性納米粒子的制備、修飾和表征1721引言，1722材料與方法、1723結果和討論1824本章小結22第3章氧化硅包裹的磁性納米粒子在質粒DNA分離中的應用，2331引言，，，，2332材料與方法，，，，，2433結果和討論‘二，，，，，2634本章小結，，，，，、37第4章氧化硅包裹的磁性納米粒子純化質粒DNA的下游應用，3841引言一‘”“，3842材料與方法，3843結果和討論‘‘”，”二3944本章小結‘，，”45第5章磁性納米粒子對細胞的毒性651弓，言，二，，4652材料和方法，，“”””，465，3結果和討論，二，，，，4854本章小結，，、51第6章全文總結，，，52參考文獻，，53致謝，，，，63在校期間發(fā)表論文及參加課題情況”“、西南大學碩士學位論文里膽口皿里國口里國坦用量等對質粒DNA純度和收率的影響。結果表明當鹽酸呱濃度為4MOUL，溶液C的PH值為45，整個操作在室溫完成時，能夠從15而過夜培養(yǎng)的大腸桿菌LB培養(yǎng)液中純化得到13陀的高純度質粒DNA，整個過程不需接觸酚、氯仿等有機試劑，在20而N內完成，操作簡便，無須分離柱，避免了離心和真空操作，重復性好。隨后，將上述提純的質粒DNA用于分子生物學下游操作，進行了限制酶切、轉化萬COLIDHSQ感受態(tài)細胞再次抽提質粒、測序等檢測，以評價基于氧化硅包裹的磁性納米粒子的純化方法。結果表明采用氧化硅包裹的磁性納米粒子抽提得到的質粒DNA，完全達到了分子生物學常規(guī)實驗的要求，本文建立的質粒DNA提取方法穩(wěn)定可靠。最后，利用SRB法檢測了自制的磁性納米粒子對A549人肺癌腫瘤細胞的生長抑制作用，同時將用氧化硅包裹的磁性納米粒子抽提的質粒DNAPGEX4T一EGFP轉化大腸桿菌，擴增后細菌培養(yǎng)液表達強烈熒光。結果表明自制的磁性納米粒子對A549人肺癌腫瘤細胞無抑制作用，對質粒DNA的生理活性無不良影響，具有良好的生物相容性。關鍵詞氧化硅磁性納米粒子質粒DNA純化細胞毒性

簡介：目的1應用SELDITOFMS技術檢測人巨細胞病毒HCMV感染導致臨床個體致肝炎綜合征血清學和HCMV感染相關細胞的神經瘤細胞內、外液蛋白質組學差異表達，建立與HCMV致病相關的蛋白標志物篩選方法；2建立可調控的針對HCMV即刻早期基因的細胞表達系統(tǒng)，并檢測即刻早期基因對細胞抗凋亡的影響，以此探討可能的機理。材料和方法1取臨床HCMV引起的先天性嬰兒肝炎綜合征CONGENITALHUMANCYTOMEGALOVIRUSHEPATITIS患兒20例作為實驗組，三個對照組25例血清標本肝功能情況檢測、CMV特異性IGM抗體及尿CMV基因定量檢測，分離并制備蛋白，與WCX2蛋白質芯片相互作用，利用SEIDITOFMS技術檢測細胞內液中分子量在500020000DA范圍內蛋白質的表達情況，繪制出蛋白飛行質譜，在BIOMARKERWIZARD軟件的輔助下，分析差異蛋白。根據蛋白質的分子量和等電點，在SWISS蛋白數據庫中對差異蛋白進行初步鑒定。2選擇人星型膠質瘤細胞U251細胞和人神經母細胞瘤細胞SHSY5Y，按細胞數量之比為101的比例將兩種細胞混合培養(yǎng)，感染HCMVAD169株。病毒感染神經瘤細胞6H后，RTPCR的方法檢測HCMVIE基因的表達水平。流式細胞儀檢測，觀察HCMV感染對神經瘤細胞凋亡的影響；體外培養(yǎng)U251，細胞，細胞感染病毒后不同時間段收獲細胞為實驗組，同時收獲正常細胞為對照組，使用基于SELDI技術的時間飛行質譜儀和WCX2芯片，檢測各組之間細胞內、外液蛋白表達譜的差異。將各組蛋白質圖譜進行比較，并將相關蛋白峰在SWISS蛋白數據庫中檢索，尋找與病毒的感染及發(fā)病相關的蛋白分子。3利用已有質粒PIE72，設計人巨細胞病毒HCMV即刻早期基因IE1的特異性引物，進行IE1基因的擴增、提純、鑒定，構建重組的可調控真核表達載體PTRE2HYGIE1，純化質粒。4常規(guī)培養(yǎng)TETONHELA細胞，以陽離子高效轉染試劑HIFECTINⅡ轉染細胞。首先在培養(yǎng)的HELA細胞中轉染增強型綠色熒光蛋白ENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP報道基因，在普通熒光顯微鏡下觀察顯示綠色熒光的HELA細胞，確定轉染效率；在轉染EGFP基因的基礎上，體外常規(guī)培養(yǎng)TETONHELA細胞，轉染PTRE2HYGIE1重組質粒，經G418和潮霉素雙重篩選，RTPCR和WESTERNBLOT和免疫組織化學方法鑒定IE1的表達。5終濃度為100NGML的腫瘤壞死因子A作用于HELA細胞，建立HELA細胞的凋亡曲線；不同終濃度的DOXCYCLINE01ΜGML、1ΜGML和10ΜGML作用轉染PTRE2HYGIE1的HELA細胞，誘導IE1表達，RTPCR方法檢測IE1基因的產生，WESTERNBLOT檢測IE1蛋白的產生水平，MTT法檢測HELA細胞的細胞增值率。結果1HCMV引起的先天性嬰兒肝炎綜合征組與各對照組比較，血清中有4個蛋白質表達水平發(fā)生明顯變化，在SWISS蛋白數據庫中檢索到分子量為58116DA、79356DA和88993DA的蛋白峰分別與Β防御素8、巨噬細胞源性趨化因子和血小板堿性蛋白在分子量和等電點上非常接近。2HCMV感染的兩個組與無HCMV感染的兩組嬰兒比較，血清中共有5個蛋自質表達水平發(fā)生明顯變化，其中56390DA、59096DA、77765DA和158332DA的蛋白峰分別與促胸腺生成素、Β淀粉樣前體蛋白A4、血小板因子4和白細胞介素25在分子量和等電點上非常接近。3HCMV隱性感染組與其他組比較，血清中有2個蛋白質表達水平發(fā)生明顯變化，57107DA的蛋自峰與Β防御素31非常接近。4兩個先天性嬰兒肝炎綜合征組與肝功能正常的另兩組嬰兒比較，血清中有4個蛋白質表達水平發(fā)生明顯變化，其中75676DA、137441DA、150928DA、159316DA的蛋白峰分別與巨噬細胞炎性蛋白4、前白蛋白、肝再生增強因子和結合珠蛋白非常接近。5RTPCR的方法檢測HCMVIE基因的表達用于證實HCMV感染，成功建立了神經瘤細胞的HCMV感染模型。病毒感染1天后細胞無明顯變化，感染3天后細胞在G1峰左側出現一個亞二倍體細胞群的峰亞G1峰，即凋亡峰，感染5天后細胞凋亡峰明顯。6病毒感染后細胞發(fā)生凋亡，且隨病毒感染時間的延長，細胞凋亡明顯增加。感染后3天和6天的細胞凋亡率分別為41％和426％。與正常對照組比較，分子量為26316DA、12027DA和135363DA的蛋白峰在病毒感染后表達持續(xù)上調，HCMV感染后4H略有增高，病毒感染后48H明顯升高。通過在SWISS數據庫中檢索發(fā)現其蛋白峰的分子量和等電點分別與CASPASE1、TNFA、Β淀粉樣前體蛋白非常接近。7構建的真核表達載體PTRE2HYGIE1序列測定正確。DOX調控的重組表達載體PTRE2HYGIE1體外轉染HELA細胞后，經G418和潮霉素B雙重篩選，獲得一株穩(wěn)定表達IE1的HELA細胞株。梯度濃度的DOXCYCLINE01ΜGML、1ΜGML和10ΜGML作用PTRE2HYGIE1HELA細胞48H，RTPCR檢測DOX誘導表達的MRNA比值IE1ΒACTIN分別為0733，0917和1768，WESTERNBLOT檢測IE1蛋白，IE1ΒACTIN分別為132，583和707。8終濃度為100ΜGML的TNFA和25ΜGML的ACTD聯(lián)合作用于轉染IE1質粒的HELA細胞后，MTT檢測HELA細胞增值率顯示轉染IE1的細胞在8H之內細胞活性大于未轉染細胞組，CASPACE檢測CASPASE3表達量分別為06±0029、16±0041和185±0065，而未轉染IE1的HELA細胞CASPASE3表達量分別為085±0061、26±0058和45±0065。統(tǒng)計學分析各組比值差異有顯著意義P001，從而證明轉染后的IE1HELA細胞具有顯著抗凋亡功能，細胞學觀察也證實這一點。結論1建立了HCMV感染引起的先天性嬰兒肝炎綜合征人群的血清蛋白質組學數據庫和HCMV感染神經瘤細胞的細胞內、外液差異蛋白質組學數據庫，并發(fā)現了HCMV臨床個體及細胞學改變的有意義的蛋白質組學指標。2HCMV感染過程持續(xù)增高的細胞蛋自因子，可能與HCMV感染所產生的細胞凋亡有關。3可調控表達外源基因的TETON質粒，可以在DOX誘導下，表達與DOX劑量依賴的外源插入基因編碼蛋白HCMVIE1，可抑制細胞凋亡。

簡介：分類號華中農業(yè)大學碩士學位論文水稻空間誘變生物學效應及分子多態(tài)性的初探STUDIESONTHEBIOLOGICALEFFEETANDMOLECULARPOLYMORPHISMOF形CEMUTANTSFROMSPAEE幾GHT研究生羅華程指導教師羅利軍教授指導小組羅利軍教授余舜武副研究員梅捍衛(wèi)研究員劉灶長研究員陳亮副研究員專業(yè)作物生物技術獲得學位名稱農學碩士研究方向水稻分子生物學獲得學位時間2008年6月華中農業(yè)大學植物科學與技術學院二00八年六月223多態(tài)性片段的回收與分析20224突變株系的RTPCR分析20225突變體種子的直鏈淀粉和蛋白質含量測定21226突變株系的抗旱性213結果與分析2231突變體主要農藝性狀表現22311空間誘變處理對突變體生育期的影響22312空間誘變處理對突變體株高的影響22313空間誘變處理對突變體葉型的影響22314空間誘變處理對突變體穗型的影響2332突變體的分子檢測，24321SSR和INDEL標記的多態(tài)率24322突變株系的突變方式25323突變體的突變序列分析26324突變位點的功能預測28325突變體的AFLP標記篩選2833突變體突變基因在各個時期的表達分析29331苗期突變株系的表達分析29332分集期突變株系的表達分析30333抽穗期突變株系的表達分析3034突變體代謝產物分析‘31341突變體種子直鏈淀粉含量分析31342突變體種子蛋白質含量分析，3135突變株系抗旱性初步分析犯4討論，3341空間誘變的農藝性狀分析3342空間誘變的多態(tài)性分析3443空間誘變的突變位點的結構分析3544部分突變基因功能的預測分析3645突變株系376的分析和探討3646空間誘變效應的探討‘37參考文獻，39致謝47附錄48附錄一AFLP的引物組合48附錄二CTAB法提取大量DNA流程48附錄三RNA的小量提取49附錄四DNA消化處理DNASEL處理49附錄五第一鏈CDNA的合成50附錄六RT一PCR擴增保守片段50附錄七DNA片段的回收一51附錄八PCR產物的克隆51