簡(jiǎn)介：目的設(shè)計(jì)制作組織工程軟骨培育系統(tǒng)，體外周期性壓應(yīng)力條件下，以原代軟骨細(xì)胞和脫鈣骨基質(zhì)DBM材料構(gòu)建組織工程軟骨，初步觀察間歇性周期壓應(yīng)力對(duì)軟骨的增殖和分化影響，為智能化仿生組織工程培育系統(tǒng)的改進(jìn)積累實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1設(shè)計(jì)制作組織工程軟骨培育系統(tǒng)，包括整機(jī)，軟骨培養(yǎng)室，施力裝置和伸縮泵。2酶消化法分離獲得軟骨細(xì)胞，倒置顯微鏡和甲苯胺藍(lán)以及番紅O染色觀察細(xì)胞形態(tài)；參照URIST文獻(xiàn)中報(bào)道的改良方法自制脫鈣骨基質(zhì)DBM材料，掃描電鏡觀察自制的脫鈣骨基質(zhì)結(jié)構(gòu)表面及接種細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)情況。3軟骨細(xì)胞和脫鈣骨基質(zhì)材料DBM復(fù)合構(gòu)建組織工程化軟骨組織，分別在動(dòng)態(tài)周期性應(yīng)力和靜態(tài)條件下培養(yǎng)，取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣品進(jìn)行如下檢測(cè)。常規(guī)石蠟切片，HE和甲苯胺藍(lán)染色、番紅O染色，Ⅱ型膠原免疫組化染色光鏡下比較觀察靜態(tài)和動(dòng)態(tài)周期性應(yīng)力條件下培養(yǎng)的組織工程軟骨組織學(xué)差異；收集培養(yǎng)1、3、710和13天的標(biāo)本，按MTT試劑盒說明加樣，酶聯(lián)免疫儀490NM檢測(cè)OD值，估計(jì)各組標(biāo)本中細(xì)胞的相對(duì)數(shù)，以評(píng)價(jià)周期性動(dòng)態(tài)應(yīng)力對(duì)軟骨細(xì)胞的增殖的影響；取培養(yǎng)5天的標(biāo)本，流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組結(jié)構(gòu)細(xì)胞周期各時(shí)期細(xì)胞的百分比，G2和S期細(xì)胞的百分比之和代表細(xì)胞的增殖率，以評(píng)價(jià)應(yīng)力對(duì)細(xì)胞周期的影響；4取兔原代關(guān)節(jié)透明軟骨的軟骨細(xì)胞與DBM材料復(fù)合后培養(yǎng)，分為靜止培養(yǎng)組和予以壓應(yīng)力刺激組，五天后植入兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型中。選用健康日本大耳白兔15只制造單側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損將實(shí)驗(yàn)兔分為三組壓應(yīng)力培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞支架材料復(fù)合物修復(fù)組實(shí)驗(yàn)組；靜止培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞支架材料復(fù)合物修復(fù)組實(shí)驗(yàn)對(duì)照組及空白缺損對(duì)照組。于術(shù)后8周處死動(dòng)物取材對(duì)修復(fù)組織進(jìn)行大體、組織學(xué)觀察。結(jié)果1制作的組織工程培養(yǎng)系統(tǒng)及配套設(shè)備能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化、無菌、精確壓力刺激等試驗(yàn)要求。2脫鈣骨基質(zhì)DBM呈白色，HE染色未見細(xì)胞核等細(xì)胞碎片殘留，結(jié)構(gòu)疏松而多孔；掃描電鏡觀察，DBM呈多孔性結(jié)構(gòu)，孔隙直徑為400～600ΜM，孔隙率為75％±10％；軟骨細(xì)胞在脫鈣骨基質(zhì)材料上黏附、伸展、生長(zhǎng)良好，可見細(xì)胞分泌的胞外基質(zhì)。3采用凝膠雙相接種法2構(gòu)建種子細(xì)胞支架材料復(fù)合物，細(xì)胞支架結(jié)構(gòu)培養(yǎng)2周后，表面可見透明軟骨組織，較光滑；石蠟切片HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、番紅O染色以及二型膠原免疫組化染色，光鏡下，動(dòng)態(tài)周期性應(yīng)力條件下培養(yǎng)的細(xì)胞支架結(jié)構(gòu)與對(duì)照組比較細(xì)胞密度較大，細(xì)胞與支架結(jié)合緊密，有部分細(xì)胞已長(zhǎng)入支架深層，且分布較均勻。MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各時(shí)相點(diǎn)，除培養(yǎng)第1天各組細(xì)胞增殖無明顯差異，其余各時(shí)相點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞增殖明顯快于對(duì)照組P＜005，各實(shí)驗(yàn)組壓縮幅度均可刺激細(xì)胞增殖，尤以壓縮幅度為10％組最顯著，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線前移，增殖高峰期延長(zhǎng)，峰值增高；各實(shí)驗(yàn)組壓縮幅度也可刺激細(xì)胞增殖，以10％幅度組最明顯。在培養(yǎng)期內(nèi)，各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線變化趨勢(shì)相同，在培養(yǎng)3天～10天細(xì)胞增殖明顯。壓應(yīng)力刺激使G1期細(xì)胞明顯減少P＜005，同時(shí)G2期和S期細(xì)胞顯著增加P＜005，壓應(yīng)力刺激可顯著增強(qiáng)軟骨細(xì)胞GAG表達(dá)，在相同頻率下，10％壓縮幅度對(duì)GAG含量的刺激作用最強(qiáng)；，對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組GAG含量著差別P＜005。4動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果大體觀察術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組應(yīng)力刺激組缺損修復(fù)區(qū)組織與周圍關(guān)節(jié)軟骨相整合軟骨缺損區(qū)被光滑白色半透明的組織覆蓋同周圍其他軟骨組織外形差異較小。靜止培養(yǎng)細(xì)胞DBM復(fù)合物修復(fù)組的缺損區(qū)修復(fù)組織與周圍軟骨部分整合在一起有一部分似軟骨樣修復(fù)，光澤不如實(shí)驗(yàn)組及周圍正常組織；空白對(duì)照組缺損處修復(fù)較差凹凸不平，無光澤與周圍正常軟骨組織有較為明顯的不同。結(jié)論1設(shè)計(jì)制作的智能化組織工程培育裝置能夠滿足自動(dòng)化培養(yǎng)，同時(shí)精確施加壓應(yīng)力刺激；2脫鈣骨基質(zhì)DBM適于作為組織工程軟骨在應(yīng)力條件下培育的支架材料自制的DBM具有良好的親水性、對(duì)軟骨細(xì)胞無毒性、在壓縮應(yīng)力條件下與軟骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)最長(zhǎng)達(dá)2周，無支架斷裂，破碎的情況發(fā)生；3體外壓應(yīng)力能有效促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖應(yīng)力對(duì)細(xì)胞增殖作用可能與應(yīng)力增加G2和S期細(xì)胞比例，促進(jìn)營養(yǎng)成分進(jìn)入支架材料內(nèi)部有關(guān)；4體外壓應(yīng)力可以增加軟骨細(xì)胞GAG分泌，其機(jī)制可能與促進(jìn)細(xì)胞增殖有關(guān)；505HZ10％的應(yīng)力可能更有效地促進(jìn)細(xì)胞增殖，有希望獲得接近于正常軟骨組織的替代物。根據(jù)組織工程原理原代軟骨細(xì)胞復(fù)合支架材料修復(fù)全層關(guān)節(jié)軟骨缺損是具有可行性的。

簡(jiǎn)介：THEBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDMOLECULARMECHANISMOFCATHEPSINZANDCD97INGASTRIC?■■■CANCERCE兒LLNESANDCLIMCAUTHOR’SSIGNATURED●■‘SUPEMSOR7SSIGNATURETHESISREVIEWER1硼1ESISREVIEWER2THESISREVIEWER3THESISREVIEWER4THESISREVIEWER5⑧／廠而州乙A9～／T廠ANONYMOUSCHAIRZHANGSUZHAN，PROFESSORTHESECONDAFFILIATEDHOSPITALOFZHEJIANGUNIVERSITYCOMMITTEEOFORALDEFENCECOMMITTEEMAN1J沌YULIAN，PROFESSOR，THESECONDAFFILIATEDHOSPITALOFZHEJIANGUNIVERSITYCOMMITTEEMAN2．CAIJIANTING，PROFESSOR，THESECONDAFFILIATEDHOSPITALOFZHEJIANGUNIVERSITYCAOLIPING，PROFESSOR，THESHAOYIFUAFFILIATEDHOSPITALOFZHEJIANGUNIVERSITYCOMMITTEEMAN4．SHAOQINSHU，CHIEFPHYSICIAN，ZHEJIANGPROVINCEPEOPLE’SHOSPITALDATEOFORALDEFENCE2016．5．26浙江大學(xué)博士學(xué)位論文致謝致謝時(shí)間如梭，轉(zhuǎn)眼畢業(yè)在即?；叵朐谡憬髮W(xué)求學(xué)的過程，心中充滿了無限感激和留戀之情。感謝母校為我們提供良好的學(xué)習(xí)環(huán)境，使我們能夠在此專心學(xué)習(xí)。在此，謹(jǐn)向我的恩師陳力教授致以最誠摯的謝意在我攻讀博士學(xué)位期間，從論文選題、思路分析、實(shí)驗(yàn)實(shí)施、論文撰寫的全過程中都得到了恩師悉心的指導(dǎo)和幫助。陳老師精益求精的工作態(tài)度、嚴(yán)謹(jǐn)務(wù)實(shí)的科研作風(fēng)、謙虛寬忍的道德人品是我學(xué)習(xí)的榜樣。衷心感謝劉達(dá)人和李國剛在我畢業(yè)論文設(shè)計(jì)及寫作過程中所給予的耐心指導(dǎo)和無私幫助另外，我必須感謝李曉文等師兄弟、師妹在學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)中給予的幫助和支持，正是因?yàn)樗麄冊(cè)诟鞣矫娴臒o私幫助，我才能得以順利完成該論文。感謝在學(xué)習(xí)、工作、生活中所有曾經(jīng)關(guān)心幫助和支持鼓勵(lì)我的老師、同學(xué)。我要衷心感謝我的父母。焉得諼草，言樹之背，養(yǎng)育之恩，無以回報(bào)。作為他們的孩子，我秉承了他們樸實(shí)、堅(jiān)韌的性格，也因此我有足夠的信心和能力戰(zhàn)勝前進(jìn)路上的艱難險(xiǎn)阻；也因?yàn)樗麄兊娜找剐羷冢也庞袡C(jī)會(huì)如愿完成自己的學(xué)業(yè)。最后，我要感謝我的妻子及女兒多年來對(duì)我的理解和無私奉獻(xiàn)感恩之情，難以言表，謹(jǐn)致敬意。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文姓名張琳學(xué)號(hào)11320102所在學(xué)院汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院導(dǎo)師姓名許海云教授專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學(xué)題目NAC對(duì)銅腙短期暴露導(dǎo)致的小鼠工作對(duì)銅腙短期暴露導(dǎo)致的小鼠工作記憶和記憶和神經(jīng)神經(jīng)生物學(xué)物學(xué)變化的影響變化的影響英文題目英文題目EFFECTSOFNACONTHESPATIALMEMYIMPAIRMENTNEUROBIOLOGICALCHANGESINMICEEXPOSEDTOCUPRIZONEFASHTTERM

簡(jiǎn)介：鋁誘導(dǎo)不同耐鋁型速生桉無性系的鋁誘導(dǎo)不同耐鋁型速生桉無性系的根尖細(xì)胞生物學(xué)響應(yīng)機(jī)制研究根尖細(xì)胞生物學(xué)響應(yīng)機(jī)制研究陸明英陸明英二○一四年六月碩士學(xué)位碩士學(xué)位論文碩士論文論文鋁誘鋁誘導(dǎo)不導(dǎo)不同耐同耐鋁型鋁型速生速生碩士學(xué)位碩士學(xué)位論文碩士論文鋁誘導(dǎo)不同耐鋁型速生桉無性的系根尖細(xì)胞生物學(xué)響應(yīng)機(jī)制研究II廣西大學(xué)學(xué)位論文廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性原創(chuàng)性和使用授權(quán)使用授權(quán)聲明聲明本人聲明所呈交的論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同事對(duì)本論文的研究工作所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬廣西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即學(xué)校有權(quán)保存并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于□保密，在年解密后適用授權(quán)?！醪槐Ｃ堋Ｕ?qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”論文作者簽名日期指導(dǎo)教師簽名日期作者聯(lián)系電話電子郵箱

簡(jiǎn)介：研究背景由于創(chuàng)傷、感染等各種原因造成的骨折、骨不愈合等一直是威脅人類生命健康的醫(yī)學(xué)難題。對(duì)于從根本上提高其治療效果而言明確骨形成、重建、塑形的病理生理學(xué)特點(diǎn)及其生物學(xué)機(jī)制是其基礎(chǔ)和出發(fā)點(diǎn)。骨組織是一種伴隨著細(xì)胞外基質(zhì)礦化、根據(jù)需要不斷自我修復(fù)的復(fù)雜動(dòng)態(tài)組織亦是帶有血管、神經(jīng)支配的生物活性組織因此骨折修復(fù)過程中既有機(jī)體多種組織、細(xì)胞因子之間錯(cuò)綜復(fù)雜的協(xié)同作用更與血液供應(yīng)、神經(jīng)支配密切相關(guān)其修復(fù)區(qū)域內(nèi)環(huán)境的生物學(xué)穩(wěn)定性尤其是血液供應(yīng)和神經(jīng)支配的重建是關(guān)鍵因素。血液供應(yīng)的重建對(duì)于骨及移植物保持生物學(xué)活性的重要性已被眾多實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)踐所證實(shí)除此之外骨組織再生中神經(jīng)因素可能同樣發(fā)揮著重要作用。在早期進(jìn)行的骨發(fā)育學(xué)研究顯示一些先天顱面發(fā)育缺陷疾病常常伴有神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙的現(xiàn)象提示神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)骨發(fā)育支配和調(diào)節(jié)的重要性。再者眾多解剖學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)以及臨床實(shí)踐研究均已證實(shí)神經(jīng)因素對(duì)骨折愈合、骨修復(fù)具有確切的生物調(diào)節(jié)作用。但是目前對(duì)神經(jīng)因素調(diào)控骨組織再生的生物學(xué)機(jī)制研究較少。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)植入感覺神經(jīng)能夠促進(jìn)組織工程骨成骨及修復(fù)骨缺損且骨再生區(qū)域的神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY含量明顯增加提示我們神經(jīng)肽類物質(zhì)在骨折愈合、重建中可能起到重要作用可能是神經(jīng)發(fā)揮其調(diào)控作用的關(guān)鍵因素。近年來神經(jīng)肽類物質(zhì)在骨折愈合、骨組織再生中的重要作用已逐漸得到人們的重視并成為國內(nèi)、外學(xué)者新的研究熱點(diǎn)之一。神經(jīng)肽是神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的具有神經(jīng)調(diào)節(jié)活性的肽類物質(zhì)具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)其中降鈣素基因相關(guān)肽CALCITONINGENERELATEDPEPTIDECGRP、P物質(zhì)SUBSTANCEPSP、神經(jīng)肽YNEUROPEPTIDEY是最具代表性的物質(zhì)。CGRP和SP是感覺神經(jīng)纖維分泌的兩種主要神經(jīng)肽NPY是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最高、分布最廣的神經(jīng)肽之一介導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控的重要因子。目前的研究多局限在神經(jīng)肽對(duì)成骨細(xì)胞的影響對(duì)成骨細(xì)胞的前體細(xì)胞骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWSTEMCELLSBMSCS的研究較少。BMSCS具有強(qiáng)大的增殖能力和多向分化潛能在骨代謝中扮演著重要角色在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下可被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和造血細(xì)胞等多種細(xì)胞是骨組織工程研究領(lǐng)域的理想種子細(xì)胞。因此闡明神經(jīng)肽對(duì)BMSCS的具體作用有助于我們更好的了解神經(jīng)肽在骨代謝過程中發(fā)揮的作用進(jìn)一步揭示骨再生過程中的神經(jīng)生物學(xué)作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)通過BMSCS的體外培養(yǎng)從細(xì)胞學(xué)角度采用免疫組織化、細(xì)胞遷移、PCR和WESTERNBLOT等方法對(duì)神經(jīng)肽及其受體在BMSCS中的表達(dá)與生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行研究為進(jìn)一步深入研究骨再生、骨代謝過程中的神經(jīng)生物學(xué)調(diào)節(jié)分子轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)同時(shí)也可為其在骨折以及骨代謝疾病中的臨床應(yīng)用提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究目的1明確神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY受體在BMSCS及其成骨分化中的表達(dá)趨勢(shì)。2明確神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY調(diào)控BMSCS增殖的作用及其機(jī)制。3初步探明神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY在BMSCS成骨分化中的生物學(xué)效應(yīng)及機(jī)制。4初步探明神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS遷移的作用。研究方法1BMSCS及其成骨分化過程中神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY受體的表達(dá)檢測(cè)采用全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分別使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)和免疫細(xì)胞化學(xué)對(duì)BMSCS表型標(biāo)志物和成骨分化進(jìn)行鑒定取第2代BMSCS用于實(shí)驗(yàn)。分為誘導(dǎo)成骨組及未誘導(dǎo)組在BMSCS傳代第2代培養(yǎng)的不同時(shí)期1、2、3W采用REALTIMERTPCR、WESTERNBLOT檢測(cè)細(xì)胞CGRP、SP、NPY受體MRNA及蛋白表達(dá)。2神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS增殖的調(diào)控作用及其機(jī)制研究將活力大于95％的大鼠第2代BMSCS細(xì)胞以104孔密度種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板細(xì)胞貼壁后換無血清培養(yǎng)基24小時(shí)使細(xì)胞同步化于G0期。后以CGRP108MOLLSP108MOLLNPY50NM分別刺激1357D采用MTT法測(cè)定OD值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；采用RTPCR、WESTERNBLOT檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的表達(dá)。3神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS成骨分化的作用及相關(guān)生物學(xué)機(jī)制研究將CGRP108MOLLSP108MOLLNPY50NM分別作用于傳代第3代培養(yǎng)的BMSCS常規(guī)培養(yǎng)組作為對(duì)照于不同時(shí)間點(diǎn)1、7、14、21D應(yīng)用WESTERNBLOT比較分析BMSCS中成骨細(xì)胞特征性物質(zhì)ALP、BGP合成情況；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)、WESTERNBLOT對(duì)細(xì)胞中骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMP2、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)分析。4神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS遷移的作用及其機(jī)制研究應(yīng)用REALTIMERTPCR、WESTERNBLOT檢測(cè)血管細(xì)胞細(xì)胞粘附分子VCAM1表達(dá)對(duì)神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY影響B(tài)MSCS粘附及遷移作用機(jī)制進(jìn)行初步分析；利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、趨化實(shí)驗(yàn)對(duì)神經(jīng)肽作用BMSCS后的遷移能力進(jìn)行檢測(cè)。5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料以X±S表示選取檢驗(yàn)水準(zhǔn)A005采用SPSS130統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。TRANSWELL細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用多樣本均數(shù)比較的方差分析ONEWAYANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析經(jīng)LEVENE檢驗(yàn)滿足方差齊性后組間比較以LSD方法為準(zhǔn)方差不齊的數(shù)據(jù)以近似方法DUNT3分析結(jié)果為準(zhǔn)。BMP2、VEGF表達(dá)的WESTERNBLOT檢測(cè)中同一時(shí)間點(diǎn)多個(gè)組間的數(shù)據(jù)采用ONEWAYANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析經(jīng)LEVENE檢驗(yàn)滿足方差齊性后組間比較以LSD方法為準(zhǔn)方差不齊的數(shù)據(jù)以近似方法DUNT3分析結(jié)果為準(zhǔn)；同組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)并檢驗(yàn)其方差齊性。其他實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析；當(dāng)資料滿足球形假設(shè)時(shí)以SPHERICITYASSUMED方法為準(zhǔn)。當(dāng)資料不滿足球形假設(shè)時(shí)需用Ε校正系數(shù)來校正自由度。對(duì)有顯著意義的主效應(yīng)進(jìn)行多重比較采用LSD法。對(duì)同一時(shí)間點(diǎn)多組別的比較采用ONEWAYANOVA進(jìn)行分析同一組不同時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析經(jīng)LEVENE檢驗(yàn)數(shù)據(jù)滿足方差齊性以LSD方法為準(zhǔn)方差不齊的數(shù)據(jù)以近似方法DUNT3分析結(jié)果為準(zhǔn)。結(jié)果1BMSCS及其成骨分化過程中神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY受體的表達(dá)檢測(cè)11BMSCS的分離和鑒定全骨髓培養(yǎng)的第2代BMSCS表面標(biāo)志物鑒定結(jié)果分別為CD2996％、CD44959％CD4529％、CD3426％；免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示成骨細(xì)胞誘導(dǎo)7D后ALP染色陽性COLⅠ染色陽性；成骨誘導(dǎo)14D后BGP染色陽性COLⅢ染色陰性。WESTERNBLOT檢測(cè)結(jié)果顯示各時(shí)間點(diǎn)的成骨誘導(dǎo)組與未誘導(dǎo)組相比ALP、BGP、COLⅠ蛋白含量隨誘導(dǎo)時(shí)間依次增高COLⅢ隨誘導(dǎo)時(shí)間下降因此本實(shí)驗(yàn)獲取的BMSCS具有干細(xì)胞特性采用適當(dāng)方法可誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞分化。12BMSCS成骨分化過程中神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY受體的表達(dá)CGRP受體的表達(dá)REALTIMERTPCR結(jié)果顯示同一時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組CGRP受體MRNA表達(dá)量高于未誘導(dǎo)組誘導(dǎo)組CGRP受體MRNA表達(dá)以時(shí)間依賴性的方式不斷增高；WESTERNBLOT結(jié)果顯示同一時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組CGRP受體的蛋白水平高于未誘導(dǎo)組誘導(dǎo)組CGRP受體蛋白水平以時(shí)間依賴性的方式增高。SP受體的表達(dá)BMSCS及其誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞有SP受體表達(dá)；SP受體MRNA在誘導(dǎo)1周時(shí)下降在誘導(dǎo)至3周時(shí)顯著增高；同一時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組SP受體的蛋白水平高于未誘導(dǎo)組誘導(dǎo)組SP受體蛋白水平在第3周時(shí)顯著增高呈明顯的時(shí)間依賴性。NPY受體的表達(dá)REALTIMERTPCR結(jié)果顯示同一時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組Y1受體MRNA表達(dá)量低于未誘導(dǎo)組誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組Y1受體MRNA表達(dá)均以時(shí)間依賴性的方式增高。WESTERNBLOT結(jié)果顯示同一時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)組Y1受體的蛋白水平高于未誘導(dǎo)組誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組Y1受體蛋白水平以時(shí)間依賴性的方式減少。2神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS增殖的調(diào)控作用及其機(jī)制研究21神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS增殖作用大鼠BMSCS在三種神經(jīng)肽干預(yù)的不同時(shí)間點(diǎn)之間OD值均有顯著性差異F143271P22細(xì)胞增殖相關(guān)調(diào)控基因表達(dá)檢測(cè)采用WESTERNBLOT技術(shù)檢測(cè)CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS細(xì)胞周期素CYCLIND1、CYCLINEP53基因蛋白表達(dá)的影響。CGRP組中CYCLIND1蛋白表達(dá)在第5D時(shí)達(dá)到高峰與對(duì)照組比較增高明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P3神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS成骨分化的作用及相關(guān)生物學(xué)機(jī)制研究31成骨細(xì)胞特征性物質(zhì)合成檢測(cè)WESTERNBLOT檢測(cè)結(jié)果使用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基的條件下采用不同濃度的CGRP、SP、NPY作用于BMSCS在7、14、21D均明顯促進(jìn)ALP和BGP的蛋白表達(dá)量同一時(shí)間的神經(jīng)肽作用組與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P32BMP2、VEGF表達(dá)檢測(cè)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示在神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY作用后的5、7DBMP2、VEGF染色陽性胞質(zhì)呈棕色。WESTERNBLOT結(jié)果顯示第5天、第7天的三種神經(jīng)肽組與對(duì)照組相比BMP2蛋白表達(dá)增加明顯四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義第5天F292722P第5天的三種神經(jīng)肽與對(duì)照組相比VEGF蛋白表達(dá)增加明顯四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義F429338P4神經(jīng)肽CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS遷移的作用及其機(jī)制研究41細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果與對(duì)照組相比三種神經(jīng)肽均能不同程度的促進(jìn)BMSCS遷移其中以SP組7、9D的作用最強(qiáng)細(xì)胞遷移的總距離和速度明顯增加。42TRANSWELL細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)照組、CGRP組、SP組、NPY組刺激組細(xì)胞遷移數(shù)分別為111±049、320±177、478±177、486±096個(gè)高倍鏡視野各神經(jīng)肽作用組與對(duì)照組比較細(xì)胞遷移數(shù)目增加四組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義F20021P43VCAM1的RTPCR檢測(cè)大鼠BMSCS在CGRP干預(yù)的不同時(shí)間點(diǎn)VCAM1MRNA表達(dá)均有顯著性差異F484012P結(jié)論1BMSCS表達(dá)CGRP、SP、NPY受體在成骨分化過程中各種受體的表達(dá)趨勢(shì)各異可能與其在骨重建過程中的不同介導(dǎo)作用有關(guān)。2CGRP、SP、NPY對(duì)BMSCS的增殖有直接促進(jìn)作用通過影響CYCLIND1、CYCLINE、P53等細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)是其可能的作用機(jī)制。3CGRP、SP、NPY促進(jìn)BMSCS向成骨細(xì)胞分化影響成骨特征性蛋白的表達(dá)是其可能的作用機(jī)制之一。4CGRP、SP、NPY在調(diào)控BMSCS成骨分化的同時(shí)顯著提高BMP2、VEGF的蛋白表達(dá)。5CGRP、SP、NPY作用后能誘導(dǎo)BMSCS的遷移對(duì)其具有趨化作用。6CGRP、SP、NPY可能通過對(duì)BMSCS增殖、分化及遷移的調(diào)控影響骨再生及重建。

簡(jiǎn)介：健身氣功是中國傳統(tǒng)健身術(shù)的瑰寶，具有悠久的歷史和深厚的文化底蘊(yùn)，強(qiáng)調(diào)術(shù)與道并重。健身氣功強(qiáng)調(diào)調(diào)心的作用，調(diào)心即調(diào)節(jié)心理狀態(tài)，而心理狀態(tài)是與人的意識(shí)活動(dòng)密切相關(guān)的，意識(shí)活動(dòng)決定了人的心理狀態(tài)，因此，調(diào)心其實(shí)質(zhì)就調(diào)節(jié)人的“意識(shí)活動(dòng)”，也就是“用意”。目前關(guān)于健身氣功調(diào)心的研究很少，缺乏從生物學(xué)和心理學(xué)方面的深層研究。鑒于健身氣功在國內(nèi)外的蓬勃發(fā)展，要想讓更多的現(xiàn)代人對(duì)中國古老的健身氣功進(jìn)行全方位的了解，必須要用現(xiàn)代人熟悉的語境對(duì)其進(jìn)行解釋，而生物學(xué)和心理學(xué)的知識(shí)是現(xiàn)代社會(huì)大家都認(rèn)可的知識(shí)平臺(tái)，因此，用現(xiàn)代生物學(xué)和心理學(xué)的知識(shí)來解釋健身氣功調(diào)心的內(nèi)涵，是非常有必要的。本文應(yīng)用現(xiàn)代神經(jīng)和腦科學(xué)及心理學(xué)研究成果，采用文獻(xiàn)資料法、歸納法、座談法及專家訪談法對(duì)健身氣功調(diào)心從不同的角度進(jìn)行研究，對(duì)古老的氣功之“意”進(jìn)行了科學(xué)詮釋，得出以下結(jié)論1健身氣功與其他運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目在調(diào)心上的區(qū)別，一是調(diào)心的內(nèi)容不同，二是在意識(shí)的運(yùn)用上，健身氣功由外向性用意轉(zhuǎn)化為內(nèi)向性用意。2顯意識(shí)影響潛意識(shí)的實(shí)證研究，為健身氣功的“意守”理論提供堅(jiān)實(shí)的科學(xué)依據(jù)。3意識(shí)活動(dòng)對(duì)神經(jīng)、大腦塑造作用的實(shí)證研究，間接證實(shí)了健身氣功強(qiáng)調(diào)意念活動(dòng)重要性的科學(xué)性。4鏡像神經(jīng)元的發(fā)現(xiàn)，為健身氣功調(diào)心中的“存想”理論找到生物學(xué)依據(jù)。5健身氣功調(diào)心中的意守丹田、意守呼吸、意守動(dòng)作過程、存想和入靜等都可以從心理學(xué)中的注意訓(xùn)練、呼吸調(diào)節(jié)訓(xùn)練、暗示訓(xùn)練、表象訓(xùn)練和放松訓(xùn)練等到相應(yīng)的解釋。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC學(xué)學(xué)校代碼10593學(xué)號(hào)0831304007密級(jí)上I罩一彥匆。大學(xué)位論文稻曲病菌薄壁分生孢子生物學(xué)研究蔡超專業(yè)名稱植物病理學(xué)學(xué)院名稱農(nóng)學(xué)院指導(dǎo)教師姓名張君成副研究員申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士論文提交日期2011年5月論文答辯日期2011年5月學(xué)位授予日期2011年6月答辯委員會(huì)主席劉志明研究員論文評(píng)閱人韋繼光教授論文評(píng)閱人劉志明研究員▲■●■■IR▲，承諾書廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下完成的，研究工作所取得的成果和相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬廣西大學(xué)所有。除已注明部分外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表過的研究成果，也不包含本人為獲得其它學(xué)位而使用過的內(nèi)容。對(duì)本文的研究工作提供過重要幫助的個(gè)人和集體，均已在論文中明確說明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名B朔20陴C其7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解廣西大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即本人保證不以其它單位為第一署名單位發(fā)表或使用本論文的研究?jī)?nèi)容；按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝　⒖s印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；在不以贏利為目的的前提下，學(xué)校可以公布論文的部分或全部?jī)?nèi)容。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。本學(xué)位論文屬于，口保密，在年解密’后適用本授權(quán)書。日不保密。學(xué)位論文全文電子版提交后翻同意在校園網(wǎng)上發(fā)布，供校內(nèi)師生和與學(xué)校有共享協(xié)議的單位瀏覽。作者簽名絲呈作者簽名瑾絲筆導(dǎo)師簽名日期呈竺三墨日期Z呈垡二笪二9

簡(jiǎn)介：有序納米結(jié)構(gòu)往往表現(xiàn)出獨(dú)特的性能，在生物學(xué)領(lǐng)域有著很大的應(yīng)用潛能。某些貴金屬納米陣列結(jié)構(gòu)在一定波長(zhǎng)激光激發(fā)下，表現(xiàn)出表面等離體激元共振效應(yīng)，是一種高效的表面增強(qiáng)光譜襯底材料。具有特別形貌的納米陣列結(jié)構(gòu)，當(dāng)尺寸匹配時(shí)，具有抗抑菌效果，可用于制備物理抗菌材料。本論文以模板法為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)并制備出有序納米陣列結(jié)構(gòu)并將其用于表面增強(qiáng)光譜及抗菌研究領(lǐng)域。通過對(duì)有序納米結(jié)構(gòu)的調(diào)控，建立性能與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，最終達(dá)到應(yīng)用目的，主要研究?jī)?nèi)容如下（1）以二氧化鈦納米管陣列結(jié)構(gòu)為模板，結(jié)合物理氣相沉積法制備出有序的銀納米結(jié)構(gòu)，作為表面增強(qiáng)拉曼光譜基底。通過調(diào)節(jié)銀納米結(jié)構(gòu)尺寸及單元周期，得到了具有最佳增強(qiáng)效果的襯底，其增強(qiáng)因子達(dá)到768104，羅丹明6G的檢測(cè)極限濃度低至1010MOLL。通過有限區(qū)域時(shí)域分析法模擬該結(jié)構(gòu)表面的電磁場(chǎng)分布，計(jì)算結(jié)果與實(shí)測(cè)結(jié)果匹配度高，證明增強(qiáng)效果的可靠性和設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)的合理性，在生物物質(zhì)及分子檢測(cè)領(lǐng)域具有應(yīng)用價(jià)值。（2）以二氧化鈦納米孔板結(jié)構(gòu)為模板，結(jié)合直流磁控濺射成膜工藝，通過參數(shù)調(diào)節(jié)控制銀納米有序結(jié)構(gòu)，并將其應(yīng)用于表面增強(qiáng)拉曼光譜和熒光實(shí)驗(yàn)。當(dāng)銀納米結(jié)構(gòu)單元直徑約為100NM時(shí)，拉曼散射信號(hào)的增強(qiáng)因子可達(dá)到214106，羅丹明6G濃度檢測(cè)限可達(dá)到1014MOLL，適于極低濃度的生物物質(zhì)的拉曼光譜檢測(cè)；105MOLL羅丹明6G的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)至18倍，通過異硫氰酸熒光素進(jìn)行染色的倉鼠卵巢細(xì)胞骨架（MC3T3E1）的熒光增強(qiáng)強(qiáng)度為細(xì)胞熒光強(qiáng)度的14倍。此外，熒光信號(hào)穩(wěn)定性得到大幅提升，20分鐘后仍保持初始強(qiáng)度的20％，該有序納米結(jié)構(gòu)具有優(yōu)異的表面增強(qiáng)拉曼和增強(qiáng)熒光效果，在生物學(xué)上具有極強(qiáng)的應(yīng)用潛力。（3）在傳統(tǒng)陽極氧化工藝的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)新的制備方法以及電解液配方分別制備出了結(jié)構(gòu)可控的超薄通孔陽極氧化鋁薄膜以及氧化鋁納米線陣列結(jié)構(gòu)。新的制備方法只需一步陽極氧化，簡(jiǎn)化了制備流程。通過鍍膜時(shí)間控制超薄通孔陽極氧化鋁的厚度；通過氧化電壓、氧化時(shí)間、電解液濃度、溫度等參數(shù)對(duì)氧化鋁納米線結(jié)構(gòu)單元進(jìn)行有效調(diào)控。參考物理抗菌機(jī)制的理論，以制備的氧化鋁納米線陣列結(jié)構(gòu)為基底，對(duì)不同尺寸形貌的氧化鋁納米線的抗菌效果進(jìn)行了評(píng)估，當(dāng)納米線直徑為86NM，間距為180NM時(shí)，具有較優(yōu)的抗抑菌效果抗菌率達(dá)到9371

簡(jiǎn)介：下腰痛（LOWBACKPAIN，LBP）是當(dāng)今社會(huì)中的一種常見疾病。在美國，僅次于上呼吸道感染而居第2位，是導(dǎo)致勞動(dòng)力喪失的主要原因之一；亞洲國家如中國因?yàn)轶w力勞動(dòng)者較多，發(fā)病率更高。腰椎間盤突出癥等椎間盤退變性疾病DISCDEGENERATIVEDISEASE，DDD是引起LBP最常見的原因。隨著我國老齡化進(jìn)程的發(fā)展，DDD越來越成為嚴(yán)重影響人們工作生活的疾病。目前治療椎間盤退變性疾病的方法包括保守治療和手術(shù)治療。保守治療包括物理治療和藥物治療等，手術(shù)治療主要包括髓核摘除術(shù)和脊柱融合術(shù)。手術(shù)治療雖然通過摘除病變的椎間盤組織或者犧牲脊柱局部節(jié)段的活動(dòng)度來換取癥狀的解除，然而并沒有從根本上解決椎間盤退變所帶來的生物學(xué)功能丟失。近年來的同種異體椎間盤移植和人工椎間盤置換雖然展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，然而與這些技術(shù)相關(guān)的許多并發(fā)癥和缺陷依然需要克服，遠(yuǎn)期效果尚難以令人滿意。近年來隨著組織工程學(xué)的迅速發(fā)展，使得外科學(xué)進(jìn)入“再生修復(fù)”時(shí)代。組織工程化椎間盤有望重建退變椎間盤的功能，為退行性椎間盤疾病開辟了一條嶄新的生物治療之路。在前期試驗(yàn)中，課題組基于自主設(shè)計(jì)構(gòu)建的仿生髓核組織工程細(xì)胞支架Ⅱ型膠原透明質(zhì)酸硫酸軟骨素支架（COLLAGENHYALURONATECHONDROITINⅡ6SULFATE，CHCS），體外成功構(gòu)建了組織工程髓核，并顯示了良好的生物學(xué)性能；同時(shí)課題組自主設(shè)計(jì)了具有良好結(jié)構(gòu)和性能的組織工程纖維環(huán)支架脫礦脫細(xì)胞骨基質(zhì)環(huán)（DEMINERALIZEDBONEMATRIXGELATIN，DBMG），并對(duì)組織工程化纖維環(huán)進(jìn)行了初步研究。本課題旨在前期組織工程椎間盤系列研究成果的基礎(chǔ)上，擬采用組織工程技術(shù)整合前期已獲得的CHCS支架和脫礦脫細(xì)胞骨基質(zhì)環(huán)，構(gòu)建包含有纖維環(huán)和髓核兩部分、全新的組織工程化椎間盤支架材料，以體外培養(yǎng)的兔髓核細(xì)胞和纖維環(huán)細(xì)胞為種子細(xì)胞，分別接種于椎間盤支架中髓核及纖維環(huán)支架上，體外初步構(gòu)建組織工程椎間盤，并對(duì)其理化性能及生物學(xué)性能進(jìn)行研究分析。通過系列研究與研究的不斷深入，為修復(fù)和功能重建退變的椎間盤奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下應(yīng)用脫礦脫細(xì)胞、冷凍干燥、化學(xué)交聯(lián)等組織工程技術(shù)整合CHCS支架和脫礦脫細(xì)胞骨基質(zhì)環(huán)，體外初步構(gòu)建了包含有纖維環(huán)和髓核兩部分、全新的組織工程化椎間盤支架材料。以體外培養(yǎng)的兔髓核細(xì)胞和纖維環(huán)細(xì)胞為種子細(xì)胞，分別接種于支架材料的髓核及纖維環(huán)部分，體外初步構(gòu)建組織工程椎間盤。體外培養(yǎng)1周后，植入無胸腺裸鼠皮下。經(jīng)體內(nèi)培養(yǎng)12周，組織工程復(fù)合椎間盤的大體形態(tài)和組織學(xué)觀察結(jié)果與天然椎間盤組織相似。形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明了進(jìn)展性的組織形成，同時(shí)纖維環(huán)和髓核區(qū)域得到良好的整合。生化成分的檢測(cè)結(jié)果表明，DNA、蛋白多糖和羥脯氨酸的含量隨時(shí)間顯著增加，在12周時(shí)與天然椎間盤的含量相似。膠原的基因表達(dá)分析結(jié)果也表明組織工程復(fù)合椎間盤與天然椎間盤相似。研究結(jié)果表明，組織工程復(fù)合椎間盤具有與天然椎間盤相似的組織形態(tài)和生化特性，為組織工程椎間盤的臨床應(yīng)用提供了一種可能。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文西瓜病蟲害的種類及生物學(xué)特性研究姓名許田芬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師謝立群20080501西瓜病蟲害的種類及生物學(xué)特性研究英文摘要STUDIESONSPECIESANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOF腸TERMELONDISEASESANDINSECTPESTSABSTRACTTHEWATERMELON’SDISEASESANDINSECTPESTSOCCURGRAVELYINSOOCHOWWHILEFEWSTUDIESPROBEINTOTHISAREATHISTHESISINVOLVESTHEINVESTIGATIONOFTHESPECIESOFTHEWATERMELON’SDISEASESANDINSECTPESTSINSOOCHOWANDTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFTHEDISEASESANDINSECTPESTSAREANALYZEDTHERESULTSAREASFOLLOWS1ISOLATETHEPATHOGENYFROMTHEPLANTWITHWATERMELONWILTDISEASEANDIDENTIFYTHEPATHOGENYASFUSARIUMOXYSPORUMFSPNIVEUMTHEINDOORSTUDIESSHOWTHATTHEPATHOGENYWOULDGROWINALLENVIRONMENTOF28。30“CANDPH608～82，ANDWEALSOFREDTHATLIGHTHASATINYINFLUENCEONTHEPATHOGENYBUT12HOURS’ILLUMINATIONAND12HOURS’DARKNESSISGOODFORTHEGROWTHOFPATHOGENYWHILE24HOURS’ILLUMINATIONWOULDRESTRAINTHEGROWTH’OFPATHOGENYTHECULTUREMEDIUMWITH1％、2％CANESUGARACCELERATESGROWTHOFTHEPATHOGENY75％CHLOROTHALONILISTHEBESTBACTERICIDETHERESTRAININGRATEOFRICHARDSMEDIUMTOWATERMELONSEEDRADICELISUPTO956％，EXCEPTPDMEDIUMTHEOTHERSRESTRAINTHESEEDRADICELMOREANDMORETERRIBLYALONGWINLAUGMENTINGTOXIN’SCONCEN仃AFIONANDTHETIMEISLONGERWITHLARGERCONCENTRATIONTOXIN’SRICHARDSMEDIUMCANCONTROLYOUNGWATERMELONPLANTSMOREANDMOREWELL2WHILESURVEYINGTHEWATERMELONWILTDISEASE，WEDISCOVERANEWWATERMELONDISEASEINSOOCHOW一一WATERMELONLEAFBLIGHTSOFARTHEREAREABITFEWRESEARCHESONTHEDISEASEATHOMEANDOVERSEAS，THISTHESISFORTHEFIRSTTIMEINVESTIGATESTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFWATERMELONLEAFBLIGHTPATHOGENYINSOOCHOWBYISOLATINGTHEWATERMELONLEAFBLIGHT’PATHOGENYANDMENSURATINGTHEGROWTHCHARACTERISTICS，IGETTHERESULTSTHATTHEPATHOGENYGROWSFASTESTUNDERTHECONDITIONOF2784。C，PH65770％OFMANCOZEBWPAND538％OFKOCIDE2000CANRESTRAINTHEPATHOGENYQUITEWELL3THROUGHOBSERVATIONINTHEWATERMELONFILED，IKNOWTHEMAINPESTSFORINSTANSDIAPHANIAINDICASAUNDERS，TRIALEURODESVAPORARIONMWESTWOOD，APHISGOSSYPIIGLOVERLIRIOMYZABRYONIAEKALTENBACH’DAMAGECHARACTERISTICSANDDIAPHANIAINDICA

簡(jiǎn)介：目的觀察評(píng)價(jià)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎合并下肢潰瘍的臨床感染率，描述其微生物學(xué)特征，評(píng)估危險(xiǎn)因素。方法回顧性的臨床數(shù)據(jù)收集自2014年1月2015年1月在山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院和太原市第二人民醫(yī)院入院的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)下肢潰瘍患者臨床感染病例收集菌培養(yǎng)及藥敏結(jié)果。結(jié)果收集類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎合并下肢潰瘍28例，其中合并臨床感染8例并收集菌培養(yǎng)和藥敏結(jié)果（29％）。在這8例患者中男女比例相等，中位年齡為74歲，平均病程為22年。同時(shí)合并心血管及周圍血管疾病6例，合并糖尿病2例。6例予以改變疾病抗風(fēng)濕藥治療，3例予以生物制劑治療，2例予以糖皮質(zhì)激素治療。5例菌培養(yǎng)結(jié)果為皮膚正常菌落，1例為金黃色葡萄球菌，1例培養(yǎng)無結(jié)果，1例由于標(biāo)簽錯(cuò)誤排除。結(jié)論28例中有8例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎合并下肢潰瘍病例入院治療一年以上存在臨床感染，但是微生物學(xué)分析顯示其中6例菌培養(yǎng)未能分離出致病菌。這可能是由于潰瘍感染診斷的不準(zhǔn)確，以及樣本的采樣、收集、運(yùn)輸、分析的問題。由于數(shù)據(jù)不足而不能找出臨床感染與危險(xiǎn)因素的關(guān)系。進(jìn)一步研究需要找到更好的臨床感染診斷技術(shù)，以及創(chuàng)面采樣和處理技術(shù)。

簡(jiǎn)介：柑橘果實(shí)從采收到消費(fèi)需要經(jīng)歷采后處理、貯藏、運(yùn)輸和銷售等環(huán)節(jié)。在這個(gè)過程中，柑橘果實(shí)容易受到一系列生物和非生物脅迫，這些脅迫能引起果實(shí)自身生理生化的變化，并最終導(dǎo)致果實(shí)風(fēng)味品質(zhì)下降，營養(yǎng)物質(zhì)損失，失水及腐爛變質(zhì)。以青霉病、綠霉病和酸腐病為代表的侵染性病害是造成柑橘采后損失的主要原因。這些病害常常發(fā)生在采后果實(shí)抗性較弱的時(shí)候，并且多數(shù)病原菌能通過果實(shí)表皮的傷口、皮孔或破壞果皮組織的角質(zhì)層侵入果實(shí)內(nèi)部。目前，對(duì)柑橘采后侵染性病害的控制主要依賴于化學(xué)殺菌劑的使用，如抑霉唑，噻菌靈，嘧霉胺，咪鮮胺和咯菌腈等。然而，化學(xué)殺菌劑存在增強(qiáng)病原菌耐藥性以及危害環(huán)境和人體健康等問題，所以人們一直尋找能夠代替化學(xué)殺菌劑的病害控制技術(shù)。利用生物的、化學(xué)的和物理的激發(fā)子誘導(dǎo)果實(shí)自身的抗病能力來防治采后病害，被認(rèn)為是一種安全無污染的病害防治新方法。這些激發(fā)子能誘導(dǎo)果實(shí)局部抗病性和系統(tǒng)抗病性，增強(qiáng)果實(shí)自身的非特異性抗性來抵御病原菌的侵襲。其中，水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖作為三種典型的果實(shí)抗性激發(fā)子，能誘導(dǎo)多種果實(shí)自身抗性，增強(qiáng)果實(shí)抵御采后生物脅迫的能力。因此，本論文以柑橘果實(shí)為試材，利用這三種典型的外源激發(fā)子為處理手段，探討這三種激發(fā)子對(duì)柑橘采后病害的控制效力，對(duì)比它們誘導(dǎo)柑橘果實(shí)抗性能力的強(qiáng)弱。在此基礎(chǔ)上，借助轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，結(jié)合傳統(tǒng)生理生化分析方法，全面而系統(tǒng)的分析水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖處理對(duì)柑橘果實(shí)基因表達(dá)、蛋白表達(dá)和物質(zhì)代謝的影響，以此探討激發(fā)子處理后柑橘果實(shí)抗性反應(yīng)的生物學(xué)機(jī)制。本研究主要內(nèi)容包括⑴在損傷接種的模式下，采用25MMOLL1水楊酸，1108CFUML1膜醭畢赤酵母細(xì)胞懸浮液和15殼寡糖處理柑橘果實(shí)，能顯著降低果實(shí)采后青霉病、綠霉病、酸腐病的發(fā)病率和病斑直徑，但三種激發(fā)子的控病能力因接種方式的不同而有所差異。在處理液與病原菌同孔接種的情況下，酵母對(duì)病害的控病能力最強(qiáng)，其次是殼寡糖，水楊酸的效果最弱；在處理液與病原菌異孔接種的情況下，酵母與殼寡糖的控病能力相當(dāng)，均強(qiáng)于水楊酸。⑵采用25MMOLL1水楊酸，1108CFUML1膜醭畢赤酵母細(xì)胞懸浮液和15殼寡糖浸泡柑橘果實(shí)，能顯著降低柑橘果實(shí)貯藏期間自然發(fā)病率和病情指數(shù)，且伴隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，三者控病能力產(chǎn)生一定差異。在果實(shí)貯藏后期，殼寡糖的效果明顯好于膜醭畢赤酵母和水楊酸，酵母和水楊酸之間沒有顯著性差異。⑶利用RNASEQ技術(shù)，從水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖處理的樣品中篩選出差異表達(dá)基因水楊酸處理組2344個(gè)，酵母處理組918個(gè)，殼寡糖處理組1323個(gè)。熒光定量PCR驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RNASEQ的數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。這些差異基因主要參與代謝過程，細(xì)胞過程，單組織過程和刺激的響應(yīng)等生物學(xué)過程。差異基因代謝途徑分析結(jié)果表明，三種激發(fā)子刺激了柑橘果實(shí)次級(jí)代謝通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。同時(shí)，對(duì)碳代謝和氨基酸代謝相關(guān)通路基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)也有顯著影響。⑷利用ITRAQ技術(shù)，從水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖處理的樣品中篩選出差異表達(dá)蛋白水楊酸處理組109個(gè)，酵母處理組327個(gè)，殼寡糖處理組164個(gè)。這些差異蛋白主要參與代謝過程，細(xì)胞過程，單組織過程等生物學(xué)過程。代謝途徑分析結(jié)果表明，三種激發(fā)子能顯著影響柑橘果實(shí)碳代謝、次級(jí)代謝生物合成相關(guān)途徑和抗氧化相關(guān)代謝途徑；同時(shí)，酵母和殼寡糖激子還能顯著影響柑橘果實(shí)逆境相關(guān)氨基酸代謝通路蛋白的表達(dá)水平。⑸柑橘果實(shí)經(jīng)水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖處理后，對(duì)三種處理共有差異基因和共有差異蛋白的分析結(jié)果表明，苯丙烷類生物合成途徑在三種激發(fā)子誘導(dǎo)的柑橘果實(shí)抗性反應(yīng)中具有重要作用，且三種激發(fā)子對(duì)該通路上關(guān)鍵基因和關(guān)鍵蛋白表達(dá)模式的調(diào)控具有一致性。⑹利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GCMS和氨基酸自動(dòng)分析儀，分析了水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖處理后柑橘果皮主要初生代謝物糖、有機(jī)酸和氨基酸的含量變化規(guī)律。結(jié)果顯示，三種激發(fā)子通過提高柑橘果皮中可溶性糖和三羧酸循環(huán)中關(guān)鍵的有機(jī)酸檸檬酸、Α酮戊二酸、琥珀酸、蘋果酸和富馬酸的含量，為抗病反應(yīng)提供能量和底物；通過累積滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)和抗氧化相關(guān)的物質(zhì)肌醇、脯氨酸、谷氨酸等，來增強(qiáng)細(xì)胞組織對(duì)滲透脅迫和氧化脅迫的耐受力，從而強(qiáng)化果實(shí)抗逆性；通過刺激在抗病反應(yīng)中與信號(hào)物質(zhì)和抗性物質(zhì)合成密切相關(guān)的初生代謝物草酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸在果皮中的累積，直接間接的作用于果實(shí)的抗性反應(yīng)。⑺利用傳統(tǒng)的生理生化分析技術(shù)結(jié)合高效液相色譜HPLC，分析了水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖處理對(duì)柑橘果實(shí)苯丙烷代謝途徑的影響。結(jié)果顯示，三種激發(fā)子能顯著增強(qiáng)果皮苯丙氨酸解氨酶PAL、肉桂酸4羥基化酶C4H、4香豆酸輔酶A連接酶4CL、過氧化物酶POD和多酚氧化酶PPO的活性，提高柑橘果皮中綠原酸、咖啡酸、阿魏酸和對(duì)香豆酸的含量，刺激木質(zhì)素的在果皮中的累積，進(jìn)而強(qiáng)化果實(shí)的結(jié)構(gòu)抗性和生化抗性。⑻結(jié)合轉(zhuǎn)錄組、蛋白組和常規(guī)生理生化分析的研究結(jié)果，從轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平和產(chǎn)物水平，全面證實(shí)了苯丙烷代謝通路參與了柑橘果實(shí)對(duì)水楊酸、膜醭畢赤酵母和殼寡糖誘導(dǎo)的抗病性應(yīng)答過程，說明激活苯丙烷代謝途徑關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，誘導(dǎo)該條途徑上抗性物質(zhì)的合成是這三種激發(fā)子誘導(dǎo)柑橘果實(shí)抗病性的共有機(jī)制。

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名緣擺忙日期聲’坪緲刪回學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部?jī)?nèi)容，可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。保密論文在解密后遵守此規(guī)定保密論文注釋本學(xué)位論文屬于保密論文，密級(jí)Z區(qū)盤保L密期限為年。學(xué)位論文作者簽名日嶠船他指導(dǎo)教師簽名期洌紅憫≯F目日期矽悼牛日砂Ⅺ摘要ABSTRACTASPERGILLUSFUMIGATUSISANAIRBORNEANDENVIRONMENTALLYUBIQUITOUSOPPORTUNISTICPATHOGEN，WHICHCANCAUSESEVERELNVASLVEINFECTIONSINIMMUNOCOMPROMISEDHOSTSAFUMIGATUSCONIDIA，AREREALLYCONTAGIOUSPROPAGULES，SOTHEUNDERSTANDINGOFTHEREGULATORYMECHANISMSOFASEXUALSPORULATIONISVITALFOREFFECTIVECONTROLOFASPERGILLOSISSTUDIESHAVESHOWNTHATGPROTEINSIGNALINGPATHWAYPLAYSANIMPORTANTROLEINREGULATINGMYCELIALMORPHOLOGYGROWTHANDSPOREPRODUCTIONINAFUMIGATUSCANONICALHETEROTRIMERICGPROTEINCOMPLEXESARECOMPOSEDOFGA，GD，ANDGYSUBUNITSSTUDIESHAVEREPORTEDTHATAGPLIKEPROTEINCPCBINAFUMIGATUSWHICHISSIMILARTOSIGNALTRANSDUCTIONPROTEIN，PLAYSIMPORTANTROLESINREGULATINGHYPHALGROWTHANDDEVELOPMENT，ANDISALSOANIMPORTANTPROTEINRELATEDTOVIRULENCEITHASNOTBEENREPORTEDWHETHERTHEVIRULENCEASSOCIATEDPROTEINCPCBINARUMIGATUS，WHICHISAMEMBEROFAMINOACIDMETABOLISMPATHWAYCROSSPATHWAYCONTR01，HASAROLEINTHEMETABOLISMOFAMINOACIDSCPCBPOSSESSCONSERVEDMOTIFSANDAMINOACIDSHOWEVERASACONSERVEDGPLIKEPROTEIN，THEMOLECULARCHARACTERISTICSOFCPCBHAVENOTBEENIDENTIFIEDYETTHEREFORE，ITISURGENTLYNECESSARYTOEVALUATETHEMOLECULARCHARACTERISTICSOFCPCBTOUNDERSTANDITSFURTHERFUNCTIONGP1IKECPCBPROTEINCONTAININGSEVENWDREPEATSBELONGSTOAWD40REPEATPROTEINFAMILY，WHICHPOSSESSACOMMON13PROPELLERSTRUCTUREWITHCONSERVEDGHANDWDRESIDUESINWDREPEATINTHISSTUDY，WEDEMONSTRATEDTHATWDREPEATSARERESPONSIBLEFORNORMALHYPHALGROWTHANDCONIDIATIONTHROUGHTRUNCATIONEXPERIMENTMOREOVERWEIDENTIFIEDTHATTHREEGHRESIDUESINWDREPEAT1，2，3ANDTHEWDRESIDUEINWDREPEAT2AREREQUIREDNOTONLYINCONTROLLINGNORMALHYPHALGROWTHANDCONIDIATIONBUTALSOINAFFECTINGTHEANTIFUNGALDRUGSUSCEPTIBILITYUSINGANALYSESOFFLOWCYTOMETRYANDHPLC，WEFOUNDTHEPOSSIBLEREASONSOFENHANCEDDRUGSRESISTANCEARETHEREDUCEDINTRACELLULARDRUGACCUMULATIONANDALTEREDERGOSTEROLCOMPONENTINADDITIONTHEFIRSTGHRESIDUEMUTANTCAUSESTHESIGNIFICANTATTENUATEDVIRULENCECONSISTENTWITHTHEFULL1ENGTHDELETIONOFCPCBTHEREFORE，OURFINDINGPROVIDESTHATGP1IKEPROTEINCPCBCROSSPATHWAYCONTROLBPLAYSALLIMPORTANTROLEINTHEREGULATIONOFDRUGSUSCEPTIBILITYANDVIRULENCEITISAGREATSIGNIFICANCEINEXPLORINGTHEROLEOFGP1IKEHOMOLOGOUSPROTEINSOROTHERFAMILYMEMBERSOFCROSSPATHWAYCONTROLINVIRULENCEMOREOVER，THISISTHEFIRSTREPORTABOUTTHEIMPORTANCEII

簡(jiǎn)介：多基因標(biāo)記輔助選擇及LBX基因家族的分子生物學(xué)研究MULTIGENEMARKERASSISTEDSELECTIONANDSTUDYINMOLECULARBIOLOGYOFPORCINELBXGENEFAMILY博士研究生晁哲指導(dǎo)教師鄧昌彥教授指導(dǎo)小組張沅教授周榮家教授鄭用璉教授熊遠(yuǎn)著教授蔣思文教授專業(yè)動(dòng)物遺傳育種與繁殖獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)博士研究方向分子遺傳學(xué)與豬育種獲得學(xué)位時(shí)間2011年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院二。一一年六月本研究由|IILLIFIIIIILLLIFIWUIY2004666國家863計(jì)劃項(xiàng)目2007從1OZL66NATIONAL863PLANSPROJECTS2007AAL02166“十一五’’國家科技支撐計(jì)劃2006BAD01A08一01NATIONALKEYTECHNOLOGYRDPROGRAMINTHELLTHFIVEYEARPLANOFCHINA2006BAD01A0801湖北省重點(diǎn)項(xiàng)目2006從202A01HUBEIPROVINCEKEYPROJECTOFSCIENCEANDTECHNOLOGY2006從202A01共同資助

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