簡(jiǎn)介：廣西師范大學(xué)碩士學(xué)位論文新課程下生物學(xué)專業(yè)師范生課程能力調(diào)查研究姓名王翠玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)課程與教學(xué)論生物指導(dǎo)教師楊華20080401II實(shí)踐時(shí)間短；教學(xué)資源相對(duì)不足和校園文化建設(shè)缺乏激勵(lì)性等問(wèn)題。自身因素部分師范生學(xué)習(xí)態(tài)度不夠端正；學(xué)習(xí)能力不夠強(qiáng)；缺乏靈活高效的學(xué)習(xí)方法，學(xué)習(xí)的積極性和主動(dòng)性有所欠缺等。通過(guò)研究提出如下建議高等師范院校和高等院校的教師們應(yīng)轉(zhuǎn)變教師教育觀念，明確自己在教師教育中的責(zé)任，結(jié)合基礎(chǔ)教育新課程進(jìn)行教育改革，以教師專業(yè)發(fā)展為基準(zhǔn)對(duì)師范生進(jìn)行綜合培養(yǎng)；進(jìn)一步完善高等師范院校適應(yīng)新課程的教師教育課程體系，增強(qiáng)學(xué)科維度課程的滲透培養(yǎng)，加強(qiáng)文理科知識(shí)的融合，并確保開(kāi)設(shè)課程的實(shí)效；運(yùn)用案例教學(xué)法進(jìn)行教師教育課程的課堂教學(xué)，注重在教學(xué)內(nèi)容與基礎(chǔ)教育新課程的聯(lián)系，促進(jìn)師范生對(duì)所學(xué)理論的遷移；合理安排教師教育課程，強(qiáng)化教師職業(yè)技能訓(xùn)練和教學(xué)技能訓(xùn)練，并注重師范生薄弱的技能以及重點(diǎn)技能的訓(xùn)練，同時(shí)加強(qiáng)教育見(jiàn)習(xí)和教育實(shí)習(xí)等實(shí)踐環(huán)節(jié)；從入校開(kāi)始就樹立師范生做“生物新課程教師”的信念，改革高等師范教育中評(píng)價(jià)方式，多元性評(píng)價(jià)代替單一的紙筆測(cè)驗(yàn)評(píng)價(jià)方式，增強(qiáng)師范生學(xué)習(xí)的主動(dòng)性和積極性，促進(jìn)能力的進(jìn)一步提升。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞課程課程能力生物學(xué)師范生

簡(jiǎn)介：關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名莖塑導(dǎo)師簽名茲雄日期刪目錄中文摘要?????????????????????????????????．IABSTRACT．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．I】1前言??????????????????????????????????11．1土壤微生物學(xué)特性研究進(jìn)展???????????????????????．11．1．1土壤微生物學(xué)特性研究?jī)?nèi)容???????????????????????11．1．2土壤微生物學(xué)特性研究方法???????????????????????31．1．3土壤微生物學(xué)特性影響因素???????????????????????61．2大蒜根際土壤微生物學(xué)特性研究?????????????????????101．3研究目的意義?????????????????????????????102材料與方法??????????????????????????????．．112．1土壤樣品采集?????????????????????????????112．2測(cè)定指標(biāo)及方法????????????????????????????112．2．1土壤理化性狀測(cè)定??????????????????????????112．2．2土壤微生物數(shù)量測(cè)定?????????????????????????．112．2．3土壤酶活性測(cè)定???????????????????????????122．2．4土壤微生物遺傳多樣性測(cè)定??????????????????????．122．2．5土壤微生物功能多樣性測(cè)定??????????????????????132．3數(shù)據(jù)分析???????????????????????????????153結(jié)果與分析??????????????????????????????．．163．1不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤微生物數(shù)量變化???????????????163．1．1不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤細(xì)菌數(shù)量變化???????????????．163．1．2不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤真菌數(shù)量變化???????????????．163．1．3不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤放線菌數(shù)量變化??????????????．173．1．4不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤微生物總量變化??????????????．183．1．5不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤微生物數(shù)量與土壤理化性狀的相關(guān)性?????．183．2不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤酶活性變化?????????????????193．2．1不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤脲酶活性變化???????????????．193．2．2不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤過(guò)氧化氫酶活性變化????????????．203．2．3不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤蔗糖酶活性變化??????????????．203．2．4不同種植年限大蒜近根區(qū)土壤磷酸酶活性變化??????????????．21

簡(jiǎn)介：湖南大學(xué)碩士學(xué)位論文壓電離子色譜用于微生物學(xué)及微量分析研究姓名謝有桃申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)分析化學(xué)指導(dǎo)教師魏萬(wàn)之19990601

簡(jiǎn)介：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文雞、鴨腸道抗菌肽的提取及部分生物學(xué)活性研究姓名譚淑櫻申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師祁克宗20090601菌肽能夠單獨(dú)刺激淋巴細(xì)胞的體外轉(zhuǎn)化增殖，在低濃度時(shí)能促進(jìn)PHA．P／LPS束U激的淋巴細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化增殖；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該抗菌肽對(duì)淋巴細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)化增殖和對(duì)動(dòng)物體重及免疫器官指數(shù)的影響都不顯著。本論文的研究為抗菌肽在畜牧業(yè)上的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供了一定的研究基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞腸道抗菌肽，提取，生物學(xué)活性V

簡(jiǎn)介：研究背景紫外線ULTRAVIOLETUV是電磁波譜中波長(zhǎng)為100～400NM的輻射的總稱人類社會(huì)活動(dòng)中接觸到的紫外線主要來(lái)源于太陽(yáng)輻射和一些人工光源其中來(lái)自太陽(yáng)的紫外線約占太陽(yáng)光譜的5％。根據(jù)紫外線的波長(zhǎng)和生物學(xué)效應(yīng)的不同可以分為3個(gè)波段長(zhǎng)波紫外線UVALONGWAVEULTRAVIOLET320～400NM能穿透人類皮膚真皮層；中波紫外線UVB290～320NM可穿透皮膚幾毫米；短波紫外線UVCSHTWAVEULTRAVIOLET200～290NM穿透力較弱是紫外線輻射殺菌的主要部分。由于地球上方臭氧層的阻擋和過(guò)濾作用使太陽(yáng)紫外線中全部的UVC和大部分UVB被屏蔽從而使到達(dá)地球表面的紫外線絕大部分的是UVA約占9099％和少量的UVB約占110％盡管UVB的含量較低但是UVB的致癌能力卻是UVA的1000到10000倍。UVB是已經(jīng)被確認(rèn)的自然環(huán)境中的環(huán)境致癌因子臭氧空洞的形成和擴(kuò)大使得到達(dá)地球表面的紫外線輻射量尤其是IYVB較以往增多隨之而來(lái)的皮膚疾病和皮膚癌的發(fā)病率也呈逐年上升的趨勢(shì)全球范圍內(nèi)每年新增大約2500000例非黑素瘤皮膚癌患者和132000例惡性黑素瘤患者在日光下的慢性照射是基底細(xì)胞癌BCCS和鱗狀細(xì)胞癌SCCS發(fā)生的主要原因BCCS和SCCS同樣都發(fā)病于皮膚基底層SCCS具有侵襲性超過(guò)10％的SCCS能夠發(fā)生遷移而BCCS不會(huì)發(fā)生遷移但是其在局部具有較強(qiáng)的侵襲性和毀壞性。目前對(duì)UVB致皮膚損傷機(jī)制的研究已經(jīng)是國(guó)內(nèi)及國(guó)際學(xué)術(shù)界和醫(yī)療界的熱點(diǎn)問(wèn)題。皮膚是人體最大的器官覆蓋于機(jī)體表面在對(duì)抗外界環(huán)境的物理、化學(xué)和生物等刺激時(shí)起到機(jī)械屏障和保護(hù)作用皮膚的角質(zhì)細(xì)胞還參與各種細(xì)胞生物學(xué)進(jìn)程如免疫、炎癥、增生以及腫瘤轉(zhuǎn)化等同時(shí)又與體內(nèi)各臟器有著緊密的聯(lián)系從而維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。正因?yàn)槠つw裸露于外環(huán)境中它比其它器官接受更多來(lái)自外界環(huán)境紫外線的輻射角質(zhì)層處在皮膚的最外層角質(zhì)形成細(xì)胞占表皮細(xì)胞的90％以上是UVB作用的主要靶細(xì)胞照射到皮膚的紫外線95％的被角質(zhì)細(xì)胞所吸收。而環(huán)境中UVB的增加無(wú)疑會(huì)加重對(duì)皮膚角質(zhì)細(xì)胞的損傷引起皮膚的紅斑、炎癥甚至皮膚癌等。UVB對(duì)DNA有直接的損傷作用并能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯CELLCYCLEARREST。UVB還是一種重要的氧化應(yīng)激OXIDATIVESTRESS因素UVB輻射產(chǎn)生的活化氧簇REACTIVEOXYGENSPECIESROS可破壞皮膚的酶及非酶性抗氧化防御系統(tǒng)使機(jī)體易受損造成皮膚老化、皮膚腫瘤等病理狀態(tài)。目前認(rèn)為ROS在UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯和凋亡中發(fā)揮重要的作用。研究目的UVB被認(rèn)為是誘發(fā)皮膚癌的主要因素皮膚癌起始于皮膚角質(zhì)化細(xì)胞因此研究UVB致皮膚角質(zhì)化細(xì)胞損傷的機(jī)理具有十分重要的意義。本研究通過(guò)觀察UVB輻射對(duì)HACAT細(xì)胞損傷的生物學(xué)效應(yīng)深入探討UVB致皮膚損傷的機(jī)理并與A431細(xì)胞比較分析不同種類細(xì)胞對(duì)UVB輻射不同的生物學(xué)反應(yīng)；另外我們初步探討紅景天苷在UVB誘導(dǎo)細(xì)胞細(xì)胞壞死和凋亡中的作用為皮膚癌的光化學(xué)預(yù)防和治療尋找新的天然藥物。研究方法1用不同劑量0、10、30、50、70、100JM2的UVB分別照射HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞并繼續(xù)培養(yǎng)24H后MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率；用50JM2劑量UVB照射HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)在照后不同培養(yǎng)時(shí)間2、4、8、12、24H使用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率觀察比較兩種細(xì)胞存活率的變化。2應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)50JM2的UVB照射后培養(yǎng)至12H的HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞周期的變化分析UVB對(duì)細(xì)胞周期的影響及與凋亡的關(guān)系。3用RTPCR和WESTERNBLOT法分別從RNA水平和蛋白水平檢測(cè)UVB照射后HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)2、4、8、12、24HNFKB、BCL2和CDK6的表達(dá)情況探討NFKB信號(hào)通路及相關(guān)蛋白在UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷中的作用。4應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度100、300、500ΜGML紅景天苷預(yù)處理的HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞在UVB照射后24H的存活率并與陽(yáng)性對(duì)照組比較探討紅景天苷的對(duì)細(xì)胞是否存在保護(hù)或者殺傷的藥效作用。研究結(jié)果1UVB對(duì)HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞存活率的影響存在時(shí)間依賴性和劑量依賴性隨著UVB照射劑量的增加細(xì)胞存活率逐漸降低；50JM2劑量的UVB照射后隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加細(xì)胞的存活率逐漸降低但A431細(xì)胞在24H時(shí)間點(diǎn)的存活率略有回升。在兩種細(xì)胞之間不同劑量照射后培養(yǎng)24H的細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著差異；50JM2劑量照射后培養(yǎng)不同時(shí)間的MTT結(jié)果表明兩種細(xì)胞在UVB照射后4H和8H的存活率沒(méi)有顯著差異P005在此之前的2H時(shí)間點(diǎn)A431存活率略高于HACAT細(xì)胞P2HACAT細(xì)胞經(jīng)50JM2照射后12H發(fā)生G0G1期阻滯并且出現(xiàn)明顯的凋亡峰。而在A431細(xì)胞中細(xì)胞周期分布基本沒(méi)有改變。3在HACAT細(xì)胞中UVB照射能夠誘導(dǎo)NFKB信號(hào)通路的激活上調(diào)NFKBP65的表達(dá)與對(duì)照組相比在8H有顯著性差異并持續(xù)高表達(dá)至24H同時(shí)UVB照射也能夠引起B(yǎng)CL2和CDK6基因的高表達(dá)；在A431細(xì)胞中有與上述相似的結(jié)果。4在紅景天苷藥效學(xué)的研究中紅景天苷對(duì)A431細(xì)胞和HACAT細(xì)胞在UVB照射后的影響對(duì)于A431細(xì)胞單純UVB照射組細(xì)胞的存活率低于陽(yáng)性對(duì)照組P005說(shuō)明紅景天苷藥物對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性作用；在50JM2UVB照射并給予不同劑量的紅景天苷處理的細(xì)胞中隨著紅景天苷應(yīng)用劑量的增加細(xì)胞存活率呈下降趨勢(shì)單獨(dú)照射UVB組與UVB500ΜGML紅景天苷組有顯著性差異P結(jié)論1UVB誘導(dǎo)HACAT細(xì)胞和A431細(xì)胞損傷具有時(shí)間依賴性和劑量依賴性UVB誘導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)與細(xì)胞的種類有關(guān)不同種類細(xì)胞對(duì)UVB照射的生物學(xué)反應(yīng)不同。2NFKB信號(hào)通路可能參與UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷應(yīng)答并與同樣高表達(dá)的BCL2、CDK6之間存在一定的聯(lián)系；在A431細(xì)胞中有與HACAT細(xì)胞相似的結(jié)果這些基因和蛋白能夠?yàn)槠つw癌的治療提供新的靶點(diǎn)。3紅景天苷聯(lián)合UVB照射能夠降低細(xì)胞存活率提示紅景天苷具有光致敏作用或者其他活性作用紅景天苷有可能成為皮膚癌化學(xué)治療和預(yù)防的新藥物。

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名手寫蘭嘉拇蕨簽字日期夕口11年I1月力轤學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解直昌太堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)直昌太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名手寫臻拇炙導(dǎo)師簽名手寫簽字日期。山JF年FF月砷日簽字日期2幽，J年痔ETFF月列L■1』P。，7。嶧NJI；一ID鼉ABSTRACTABSTRACTCHINAISTHELARGESTCOUNTRYRMSINGPIGSINTHEWORLDASEFFECTIVEFEEDINGADDITIVES，ANTIBIOTICSHAVEBEENWIDELYUSEDINPIGRAISINGSTOMEETTHEREQUIREMENTSOFINTENSIVEANDLARGESCALELIVESTOCKBREEDINGHOWEVERSOMEADVERSEEFFECTS，EGDRUGRESIDUES，TERATOGENESIS，CARCINOGENICMUTAGENICAREEMERGINGCOMPAREDWIMTHEANTIBIOTICABUSING，WHICHMAKESTHEECOLOGICALPIGRAISINGMETHODTOBETHERESEARCHFOCUSECOLOGICALPIGRAISINGMETHODREFERSTOREPLACINGTHEANTIBIOTICS誦TLLPROBIOTICMICROORGANISMSWHENRAISEPIGS，INCLUDINGTHEPROBIOTICSPREPARATIONFORFERMENTATIONBEDINRECENTDECADES，THISMETHODHASBEENAPPRECIATEDBYMOSTRESEARCHERSFORITSBENEFICIALEFFECTS，SUCHASGROWTHPROMOTINGWITHOUTSIDEEFFECTS，NORESIDUALCONTAMINATIONANDNODRUGRESISTANCEINORDERTOINVESTIGATETHEEFFECTSOFPROBIOTICMICROBESONFERMENTATIONBEDSEVERALSELECTEDMEDIAWEREUSEDFORTHEISOLATIONOFMICROORGANISMSCONTAININGINMICROBIALECOLOGICALAGENTS，AND6ISOLATESWEREOBTAINEDACCORDINGTHEIRCLONEMORPHOLOGYCELLMORPHOLOGYTHENTHEPCRDGGETECHNOLOGYWASSUBSEQUENTLYUSEDTOCLASSIFYTHEMANDONLYTWODIFFERENTSTRAINS，NAMED雒LACTOBACILLUSPLANTRUMANDCANDIDATROPICALISWEREIDENTIFIEDINNEXTSTEP，THEEFFECTSOFTHEPH，TEMPERATURE，BILESALTS，COPPERAEROBIC／ANAEROBICONTHEVIALBLECELLCOUNTINGOFISOLATESWEREINVESTIGATEDOURRESULTSSHOWEDTHATTHELACTOBACILLUSPLANTRUMCAN’TGROWWHENTHEPHISBLOW25ORTHECOPPERIONCONCENTRATIONISHIGHERTHAN150PPM，WHILETHENUMBEROFCANDIDATROPICALISRECEIVESLITTLEIMPACTBYSUCHFACTORSINADDITION，THEAMOUNTSOFCANDIDATROPICALISREDUCED6MAGNITUDESAT42“12COMPAREDWITHTHATAT37℃ALSO，WECHECKEDTHEIMPACTSOFDIFFERENTANTIBIOTICSAMOXICILLINOXYTETRACYCLINEHYDROCHLORIDE，METHACHOLINEQUINOLINE，OLAQUINDOX，CLARITHROMYCIN，CIPROFLOXACIN，OXYTETRACYCLINEONTHEGROWTHOFPROBIOTICSANDPATHOGENSCOMMONLYEXISTEDINFERMENTATIONBED，ANDTHECONCENTRATIONSOFANTIBIOTICSWEREDETERMINEDACCORDINGTOTHEIRFEEDINGQUALITYANDCONVERSIONRATEINPREVIOUSLITERATURES，ANDO1NATIONALSTANDARD，LXNATIONALSTANDARDAND10XNATIONALSTANDARDWEREUSEDASTHETESTEDDOSESTHERESULTSINDICATEDTHATTHESURVIVALRATEOFPROBIOTCSWEREPOORANDFEWVIABLECELLSLII

簡(jiǎn)介：目的探討用豬小腸粘膜下層SMALLINTESTINALSUBMUCOSA，SIS作支架，復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELLS，BMSC與由BMSC誘導(dǎo)而來(lái)的成骨細(xì)胞在體外構(gòu)建組織工程化生物活性骨膜的可行性，并研究種子細(xì)胞的生物學(xué)特性。方法以常規(guī)方法培養(yǎng)BMSC，并在條件培養(yǎng)基下誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞，再分別與SIS進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng)，對(duì)兩種細(xì)胞分別進(jìn)行生物學(xué)特性檢測(cè)，包括生長(zhǎng)曲線繪制，流式細(xì)胞周期分析、表型鑒定。并對(duì)兩種細(xì)胞復(fù)合而成的生物活性骨膜進(jìn)行倒置顯微鏡、掃描電鏡及骨鈣素，堿性磷酸酶，I型膠原的WESTERNBLOT檢測(cè)。從而判斷BMSC及誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞在SIS上的生長(zhǎng)、分化、增殖及細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)的情況。結(jié)論SIS與BMSC及誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞在體外復(fù)合培養(yǎng)可以構(gòu)建出生物活性骨膜，BMSC與誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞在SIS上維持了正常的生物學(xué)特性，兩者均顯示了與SIS支架材料良好的組織相容性，且兩者在成骨活性表達(dá)上存在差異，與誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞復(fù)合的SIS表現(xiàn)出了更為活躍的成骨活性，這為進(jìn)一步研究以組織工程化生物活性骨膜修復(fù)骨缺損打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文胸膜肺炎放線桿菌APXLV乙。RFJ缺失株的構(gòu)建及生物學(xué)特性研究CONSTRUCTIONANDCHARACTERIZATIONOFAAPXIVAO成MUTANTOFAETIROBAEILUSPLEUROPNEUMONIAE研究生郭毅指導(dǎo)教師陳煥春院士貝為成副教授專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向病原分子生物學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士獲得學(xué)位時(shí)間2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技與動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二00八年六月2008屆碩士研究生學(xué)位論文321胸膜肺炎放線桿菌的增殖22322胸膜肺炎放線桿菌基因組的提取23323PCR產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物的回收與純化23324大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備23325連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化23326質(zhì)粒的制備23327重組質(zhì)粒的鑒定243280爪基因上下游同源臂的克隆與鑒定24329重組自殺性質(zhì)粒PEMORF的構(gòu)建253210胸膜肺炎放線桿菌基因缺失株的構(gòu)建2532N缺失菌株生物學(xué)特性的研究2632H1缺失株生長(zhǎng)特性的研究，2632112缺失株遺傳穩(wěn)定性的研究263212缺失菌株對(duì)小鼠的毒力試驗(yàn)及LD50的測(cè)定263213缺失株與親本株的致病性比較263214缺失菌株對(duì)斷奶仔豬的免疫保護(hù)試驗(yàn)26第4章結(jié)果與分析2841重組自殺性質(zhì)粒PEMORF的構(gòu)建284110汀基因上下游片段的擴(kuò)增與測(cè)序28412重組自殺性質(zhì)粒PEMORF的構(gòu)建2842基因缺失株的篩選和鑒定29421基因缺失株SLW04的篩選和鑒定29422基因缺失株SLW05的篩選和鑒定3143突變株生物學(xué)特性的研究33431突變株生長(zhǎng)特性的研究33432突變株遺傳穩(wěn)定性的研究3444缺失菌株的毒力研究35441缺失菌株對(duì)小鼠LD50的測(cè)定35442缺失株與親本株對(duì)仔豬致病性的比較3545缺失株SLW05對(duì)斷奶仔豬的免疫保護(hù)試驗(yàn)36451免疫仔豬血清抗體檢測(cè)結(jié)果36452臨床癥狀，36453攻毒后仔豬的體溫變化38454肺損傷38455細(xì)菌的回收鑒定，38

簡(jiǎn)介：膿毒癥是感染因素介導(dǎo)的全身炎癥反應(yīng)綜合征SYSTEMICINFLAMMATYRESPONSESYNDROME，SIRS，是燒傷、創(chuàng)傷和感染性疾病患者的常見(jiàn)并發(fā)癥。流行病學(xué)資料顯示，每年全球有超過(guò)1800萬(wàn)的膿毒癥病例，且患者數(shù)目每年以10％速度遞增。重癥膿毒癥和膿毒性休克是重癥監(jiān)護(hù)病房INTENSIVECAREUNITS，ICU病人死亡的首要因素，死亡率高達(dá)50％60％。內(nèi)毒素ENDOTOXINLIPOPOLYSACIDE，LPS是G￣菌外膜的主要成分，是介導(dǎo)細(xì)菌膿毒癥的重要病原體相關(guān)分子模式PATHOGENASSOCIATEDMOLECULARPATTERNS，PAMPS。LPS進(jìn)入機(jī)體內(nèi)后，首先與內(nèi)毒素結(jié)合蛋白LIPOPOLYSACIDEBINDINGPROTEIN，LBP結(jié)合，在LBP的作用下，LPS與單核巨噬細(xì)胞膜上的受體CD14結(jié)合形成LPSCD14復(fù)合物，復(fù)合物中的LPS與跨膜受體TLR4TOLLLIKERECEPT4，TLR4結(jié)合，將信號(hào)轉(zhuǎn)入胞內(nèi)，導(dǎo)致靶細(xì)胞的活化，釋放TNFΑ、IL6等炎癥介質(zhì)，介導(dǎo)膿毒癥的發(fā)生。盡管對(duì)膿毒癥的病理生理機(jī)制及其防治策略的研究較為深入，但至今仍無(wú)特殊有效的藥物供臨床治療。中草藥在膿毒癥中的應(yīng)用具有悠久的歷史，已證實(shí)多種中草藥具有較好的拮抗內(nèi)毒素作用，但由于中藥成分復(fù)雜，加之缺乏有效的分離檢測(cè)手段，限制了中草藥在膿毒癥防治中的應(yīng)用與發(fā)展。在前期的研究中，我們將LPS的活性中心LIPIDA包被于生物傳感器上，建立了以LIPIDA為靶點(diǎn)的篩選拮抗LPS藥物的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)?；诖思夹g(shù)平臺(tái)，本研究采用大孔吸附樹脂、超濾膜分離和高效液相色譜HIGHPERFMANCELIQUIDCHROMATOGRAM，HPLC技術(shù)，對(duì)中藥水提液進(jìn)行多級(jí)分離純化，以期從天然藥物中獲取具有拮抗LPS活性的單體化合物，為膿毒癥防治藥物的研發(fā)提供新的思路和方法。方法1應(yīng)用以LIPIDA為靶點(diǎn)的生物傳感器技術(shù)平臺(tái)，檢測(cè)60種中藥水煎液與LIPIDA的結(jié)合活性；對(duì)明確具有與LIPIDA結(jié)合活性的中藥，采用大孔吸附樹脂分離技術(shù)、超濾膜技術(shù)和HPLC技術(shù)進(jìn)行分離提取，應(yīng)用生物傳感器進(jìn)行活性追蹤監(jiān)測(cè)，收集能與LIPIDA結(jié)合的組分，并對(duì)其進(jìn)行針對(duì)LPS的體內(nèi)外生物學(xué)活性評(píng)估。對(duì)活性明確的有效組分，用HPLC作進(jìn)一步的分離純化，選擇與LIPIDA具有較高結(jié)合活性的HPLC產(chǎn)物作進(jìn)一步的研究，對(duì)所得單體化合物進(jìn)行純度分析和結(jié)構(gòu)解析。2對(duì)得到的單體化合物進(jìn)行針對(duì)細(xì)菌膿毒癥的體內(nèi)外生物學(xué)活性評(píng)價(jià)，包括①鱟試劑法檢測(cè)單體對(duì)LPS的體內(nèi)外中和作用；②ELISA法檢測(cè)單體對(duì)LPS刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子TNFΑ和IL6的抑制作用；③RTPCR法檢測(cè)單體對(duì)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TLR4和TNFΑMRNA表達(dá)的影響；④觀察單體化合物對(duì)膿毒癥模型小鼠的保護(hù)作用。結(jié)果1應(yīng)用生物傳感器技術(shù)平臺(tái)，從60種中藥中篩選出黃芩、胡連、赤芍、五倍子、訶子等5種具有與LIPIDA較高結(jié)合活性的中藥RU＞200ARCSECONDS。以黃芩為研究對(duì)象，從黃芩水提液中分離出與LIPIDA具有結(jié)合活性的組分SBG4；SBG440MGKG能顯著提高熱滅活大腸埃希氏菌攻擊小鼠72H的存活率；物質(zhì)屬性鑒定SBG4為黃酮類物質(zhì)。應(yīng)用膜分離技術(shù)從SBG4中分離出分子量小于5000DA的5KL，5KL經(jīng)HPLC分離獲得5個(gè)HPLC組分5KL1～5；在5個(gè)組分中，以5KL1與LIPIDA的結(jié)合活性最高；在體外5KL1對(duì)LPS具有直接中和作用、可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW2647細(xì)胞釋放TNFΑ，體內(nèi)評(píng)價(jià)顯示5KL1對(duì)膿毒癥模型小鼠具有顯著的保護(hù)作用；5KL1經(jīng)HPLC進(jìn)一步分離后，得到5KL1A、5KL1B和5KL1C三個(gè)產(chǎn)物；其中僅5KL1B是單一物質(zhì)并與LIPIDA的結(jié)合活性最高，純度分析顯示，5KL1B的純度因子為999685；經(jīng)質(zhì)譜、核磁、紅外等波譜分析，對(duì)5KL1B的結(jié)構(gòu)指認(rèn)為2’，5，6’，7四羥基二氫黃酮醇2’，5，6’，7TETRAHYDROXYFLAVANONOL，THF，分子式為C15H12O7。2對(duì)THF的活性研究顯示①、THF在體內(nèi)外對(duì)LPS均具有直接中和作用；②、THF能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)RAW2647細(xì)胞釋放TNFΑ和IL6，并具有明顯的量效關(guān)系；⑧、THF對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW2647細(xì)胞TLR4和TNFΑ在MRNA水平的表達(dá)均具有顯著的抑制作用；④、THF對(duì)致死劑量熱滅活大腸埃希氏菌攻擊的小鼠具有顯著的保護(hù)作用。結(jié)論應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)從黃芩中定向分離出2’，5，6’，7四羥基二氫黃酮醇；2’，5，6’，7四羥基二氫黃酮醇在體內(nèi)外對(duì)LPS均具有拮抗作用，對(duì)膿毒癥模型小鼠具有保護(hù)作用。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明191126L本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名日期型三蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明’本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即‘學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔韻內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。經(jīng)校保密辦審核批準(zhǔn)，本學(xué)位論文屬保密論文，在年解密后適用本規(guī)定。論文作者簽名杰鰣日期絲左主嚴(yán)導(dǎo)師簽名二趁通牡EL期J拿啤’

簡(jiǎn)介：分類號(hào)S85511單位代碼10364密級(jí)學(xué)號(hào)12720247安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文安徽地區(qū)豬源鏈球菌分離鑒定安徽地區(qū)豬源鏈球菌分離鑒定及其及其生物生物學(xué)特性研究學(xué)特性研究ISOLATIONIDENTIFIATIONBIOLOGICALACTERISTICRESEARCHOFSTREPTOCOCCUSFROMPIGINANHUI研究生焦安心指導(dǎo)教師李郁教授申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向家畜傳染病學(xué)所在學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院答辯委員會(huì)主席二零一五年六月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名時(shí)間年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議研究生簽名時(shí)間年月日第一導(dǎo)師簽名時(shí)間年月日

簡(jiǎn)介：㈣Y2㈣52㈣7㈧47M0帥BIOLOGICALCHARACTEIUSTICSOFTHETWOSI爪FACE．LOCALISEDGLYCOLYTICE八『ZYMESIN冊(cè)D尸乙彳SI，糾G么三乙厶SEP7刀ⅢBYHESUIBINDIRECTEDBYASSOCIATEPROF．FEIRONGMEIANDPROF．DINGCHANADISSERTATIONSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEMASTERDEGREEOFAGRONOMYVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINAPRIL2013COMMENCEMENTINJUNE2013目錄目錄摘要????????????????????????????????????IABSTRACT??????????????????????????????????????????．III縮略詞表?????????????????????????????????一V第一篇文獻(xiàn)綜述??????????????????????????????1第一章醛縮酶與丙酮酸激酶的概述?????????????????????11醛縮酶???????????????????????????．?????L1．1醛縮酶概述????????????????????????????L1．2醛縮酶的特性和功能????????????????????????22丙酮酸激酶??????????????????????????????32．1丙酮酸激酶概述??????????????????????????32．2丙酮酸激酶的同工酶????????????????????????42．3丙酮酸激酶的結(jié)構(gòu)?????????????????????????42．4丙酮酸激酶的特性和功能??????????????????????52．5雞毒支原體中的丙酮酸激酶?????????????????????73本研究的目的和意義??????????????????????????73．1醛縮酶和丙酮酸激酶作為雞毒支原體糖酵解酶的研究意義????????73．2醛縮酶和丙酮酸激酶作為膜蛋白的研究意義??????????????8第二篇醛縮酶的生物學(xué)功能研究??????????????????????．11第二章醛縮酶的原核表達(dá)及酶活性測(cè)定??????????????????111材料與方法?????????????????????????????一111．1菌種與載體????????????????????????????111．2主要生化試劑???????????????????????????111．3雞毒支原體基因組的提取?????????????????????。121．4目的基因的OVERLAPPCR擴(kuò)增???????????????????．．121．5重組表達(dá)載體的構(gòu)建及融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)?????????????一131．6RMGFBA的酶活性檢測(cè)???????????????????????132結(jié)果????????????????????????????????????一132．1目的基因的OVERLAPPCR擴(kuò)增???????????????????．132．2重組表達(dá)載體PET28A．FBA的構(gòu)建??????????????????．142．3RMGFBA的誘導(dǎo)表達(dá)及純化?????????????????????152．4RMGFBA酶活性檢測(cè)????????????????????????163討訓(xùn)≥???????????????????????????????????????????．16第三章醛縮酶多克隆抗體的制備及其在雞毒支原體的定位??????????．．191材料與方法?????????????????????????????．．19

簡(jiǎn)介：骨性關(guān)節(jié)炎OSTEOARTHRITIS，OA是一種好發(fā)于中老年人的慢性進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)病。它是一種以軟骨退行性變?yōu)楹诵?，累及骨質(zhì)，包括滑膜，關(guān)節(jié)囊及關(guān)節(jié)囊外其他結(jié)構(gòu)的不同程度的炎性病變。隨著我國(guó)人口老齡化和OA發(fā)病趨勢(shì)年輕化，OA逐漸成為危害人類健康和生存質(zhì)量的重要疾病。對(duì)OA發(fā)生和發(fā)展機(jī)制的研究也已成為骨科領(lǐng)域研究的重點(diǎn)。研究顯示無(wú)論何種原因引發(fā)的OA多伴有關(guān)節(jié)內(nèi)微環(huán)境失衡，滑膜及其細(xì)胞是其主要因素。目的建立滑膜細(xì)胞與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系，構(gòu)筑類OA微環(huán)境，探討滑膜細(xì)胞在OA發(fā)生中的作用，為OA發(fā)病機(jī)理研究提供依據(jù)。方法⑴采用改良的HULTH法復(fù)制兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型，切除內(nèi)側(cè)半月板，切斷內(nèi)側(cè)副韌帶及前交叉韌帶，術(shù)后4周關(guān)節(jié)腫脹、滑膜增生明顯，獲得大量滑膜組織。⑵用胰蛋白酶Ⅱ型膠原酶聯(lián)合酶消化法分離滑膜細(xì)胞進(jìn)行原代與傳代培養(yǎng)，觀察滑膜細(xì)胞形態(tài)、活性，進(jìn)行CD68免疫組化鑒定。⑶采用兩步酶消化法從正常兔膝關(guān)節(jié)軟骨組織獲取軟骨細(xì)胞，進(jìn)行原代、傳代培養(yǎng)及細(xì)胞學(xué)觀察；⑷建立滑膜細(xì)胞與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系，將原代和傳代滑膜細(xì)胞分別以不同的比例11，112，114，118分別與軟骨細(xì)胞細(xì)胞數(shù)為4104個(gè)共培養(yǎng)，以正常軟骨細(xì)胞組為對(duì)照組，觀察原代及傳代滑膜細(xì)胞微環(huán)境對(duì)軟骨細(xì)胞形態(tài)及生物學(xué)活性的影響。⑸采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)REVERSETRANASEPOLYMERASECHAINREACTION，RTPCR方法檢測(cè)共培養(yǎng)10天和20天時(shí)原代及傳代滑膜細(xì)胞微環(huán)境對(duì)各組軟骨細(xì)胞在RNA水平上，Ⅱ型膠原及蛋白多糖基因表達(dá)的影響。結(jié)果①改良HULTH法復(fù)制膝骨性關(guān)節(jié)炎模型，造模4周關(guān)節(jié)腫脹，滑膜組織增生明顯，襯覆滑膜細(xì)胞層數(shù)增加，間質(zhì)纖維組織增生，軟骨表面裂隙或纖維化，軟骨細(xì)胞呈小灶性壞死。②胰蛋白酶Ⅱ型膠原酶聯(lián)合酶消化法可培養(yǎng)獲得大量滑膜細(xì)胞且細(xì)胞活性大于98％，巨噬細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞CD68免疫組化染色陽(yáng)性。③胰蛋白酶Ⅰ型膠原酶Ⅱ型膠原酶聯(lián)合酶消化法可成功分離并獲得大量高活性軟骨細(xì)胞。④以滑膜細(xì)胞與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系構(gòu)筑了滑膜細(xì)胞微環(huán)境，滑膜細(xì)胞數(shù)量、培養(yǎng)時(shí)間與軟骨細(xì)胞形態(tài)及增殖活性密切相關(guān)，滑膜細(xì)胞數(shù)量越多、作用時(shí)間越長(zhǎng)，軟骨細(xì)胞增殖活性越低。⑤滑膜細(xì)胞與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系中，滑膜細(xì)胞數(shù)量、代次與Ⅱ型膠原及蛋白多糖基因表達(dá)密切相關(guān)。共培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞基因表達(dá)明顯下調(diào)，原代滑膜細(xì)胞作用強(qiáng)于傳代滑膜細(xì)胞；滑膜細(xì)胞數(shù)量越高，軟骨細(xì)胞基因表達(dá)越低。結(jié)論⑴改良HULTH造模法可迅速形成骨性關(guān)節(jié)炎，使滑膜組織在短時(shí)間內(nèi)增生明顯，襯覆滑膜細(xì)胞層數(shù)增加，間質(zhì)纖維組織增生，獲得大量的滑膜組織，解決了滑膜取材難的問(wèn)題。該法適用于提取滑膜組織和OA發(fā)病機(jī)制的研究。⑵聯(lián)合酶消化法可分離獲取滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、快捷，細(xì)胞貼壁快且細(xì)胞活性率較高，可在短時(shí)間內(nèi)為實(shí)驗(yàn)研究提供大量目標(biāo)細(xì)胞，為實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步研究提供了方便。⑶構(gòu)筑的滑膜細(xì)胞與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)體系適用于OA微環(huán)境的研究，且該體系可模擬類OA關(guān)節(jié)內(nèi)環(huán)境，適用于研究軟骨損傷的進(jìn)程。⑷滑膜及滑膜細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能與關(guān)節(jié)內(nèi)微環(huán)境的平衡密切相關(guān)，這種微環(huán)境的失衡可導(dǎo)致軟骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能學(xué)活性的改變，可為OA發(fā)病的重要因素之一。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多沙芥與斧形沙芥生理生態(tài)適應(yīng)性及生殖生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文畢赤酵母表達(dá)豬Γ干擾素及其抗病毒生物學(xué)活性的研究姓名萬(wàn)建青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師夏春200251測(cè)定的結(jié)果表明RPOLFNY2的抗病毒活性的范圍為450540UNIT／ML。本研究為生物工程發(fā)酵生產(chǎn)豬熏組卜干擾素打下了的基礎(chǔ)。7。關(guān)鍵詞豬II型干擾素畢赤酵母基因表達(dá)抗病毒活性