簡介：學科專業(yè)課程與教學論生物教育學MAJORCURRICULUMANDINSTRUCTIONBIOLOGYEDUCATION浙江師范大學化學與生命科學學院CHEMISTRYANDLIFESCIENCESCOLLEGEOFZHEJIANGNORMALUNIVERSITY二零一零年四月一令一令，牛心月APRIL，2010中學生物學教師職業(yè)技能體系研究摘要教師職業(yè)技能是教師素質(zhì)結構的重要組成部分，教師不僅要具有專業(yè)文化知識，更重要的是要具有相應的職業(yè)技能。在素質(zhì)教育不斷深入、基礎教育課程改革逐步實施和信息技術高度發(fā)展的今天，教師職業(yè)技能的結構和內(nèi)涵發(fā)生了變化。為此，本文對中學生物學教師職業(yè)技能體系進行了研究。該體系一方面可以為教師個人專業(yè)發(fā)展指明方向；另一方面可以為教師教育培訓機構設置培訓課程、開展培訓活動提供依據(jù)。本文通過文獻法、問卷法和訪談法等方法，調(diào)查分析了浙江省中學生物學教師的教師職業(yè)技能現(xiàn)狀，重點構建和詮釋了中學生物學教師職業(yè)技能體系。論文首先通過對近幾年國內(nèi)外學者對教師職業(yè)技能研究的梳理，結合生物學科教學的特點，對中學生物學教師職業(yè)技能的內(nèi)涵進行了鑒定和分析，初步構建了中學生物學教師職業(yè)技能體系。在此基礎上，編制“浙江省中學生物學教師職業(yè)技能現(xiàn)狀調(diào)查“和“中學生物學教師職業(yè)技能重要性調(diào)查”兩份問卷，在全省范圍內(nèi)進行調(diào)查，各發(fā)放400份。浙江省中學生物學教師職業(yè)技能現(xiàn)狀調(diào)查結果顯示，調(diào)查對象的教師職業(yè)技能總體上掌握情況較好，但個別技能校本課程開發(fā)技能和教育論文撰寫與發(fā)表技能掌握情況不理想，男女教師在中學生物學教師職業(yè)技能總體得分上差異不顯著，普通中學和重點中學教師在中學生物學教師職業(yè)技能總體得分上差異極顯著，不同地區(qū)教師在中學生物學教師職業(yè)技能總體得分上差異不顯著，不同教齡教師在中學生物學教師職業(yè)技能總體得分上差異極顯著，不同職稱教師在中學生物學教師職業(yè)技能總體得分上差異極顯著。最后，編制訪談提綱，采取結構式訪談的方式對五位相關領域的專家進行訪談，結合中學生物學教師職業(yè)技能重要性調(diào)查結果，完成了中學生物學教師職業(yè)技能體系的最終構建，包括對中學生物學教師職業(yè)技能體系結構的分析和各項技能內(nèi)涵的詮釋。中學生物學教師職業(yè)技能是建立在一定的知識積累和智力訓練基礎之上的，中學生物學教師必備的學科教學工作技能，以互斥性、周延性、系統(tǒng)性、實用性為分類原則，按照教學工作環(huán)節(jié)將教師職業(yè)技能分為教學資源的開發(fā)與利用技能、教學設計技能、課

簡介：目的VPS24VACUOLARPROTEINSTING24是轉運必需內(nèi)吞體分選復合物ENDOSOMALSTINGCOMPLEXREQUIREDFTRANSPT，ESCRT中ESCRTⅢ復合物的重要組成部分。ESCRTS的主要功能包括，介導泛素化的內(nèi)吞體膜蛋白分選，形成多泡體MULTIVESICULARBODY，MVBS，并轉運入溶酶體進行降解，從而調(diào)控受體信號通路。它也能夠調(diào)控胞質(zhì)分裂、病毒包裝、出芽及自噬等。ESCRTS由四類具有不同生物學功能的蛋白復合物構成，即ESCRTS0，Ⅰ，Ⅱ，和Ⅲ，它們通過精密的分工協(xié)作識別并分選泛素化膜受體1。ESCRTⅢ是一種動態(tài)多聚體，主要由四種核心亞基構成，即VPS20，SNF7，VPS24和VPS22。在MVBS形成過程中，VPS24與ESCRTS的其他成員共同作用，使囊泡膜內(nèi)化入腔，并實現(xiàn)腔內(nèi)囊泡與內(nèi)體膜的最終分離3，從而介導受體信號通路的調(diào)控。Ⅱ型肺泡上皮細胞（TYPEⅡALVEOLAREPITHELIALCELL，AEⅡ）是末梢肺組織中的重要細胞系，具有合成、分泌表面活性物質(zhì)PS，增殖分化以補充AEⅠ，及參與免疫調(diào)控等功能。體外研究表明，原代分離培養(yǎng)的AEⅡ，其特征分子SPC的表達和板層小體等會隨著時間的推移而逐漸降低，轉分化為AEⅠ4，5。而在體內(nèi)，AEⅡ是AEⅠ的祖細胞，隨著肺泡上皮的發(fā)育和分化，SPC的表達升高。由此可知，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)與維持AEⅡ分泌PS有關。板層小體是AEⅡ合成分泌儲存PS的主要結構，而多泡體是板層小體的前體6。也有文獻指出，ESCRTS對哺乳動物上皮細胞的極性維持具有重要作用，敲除ESCRTS成員TSG101可使上皮細胞失去極性7。因此，ESCRTS可能在末梢肺組織穩(wěn)態(tài)維持中具有重要作用。MLE12MOUSELUNGEPITHELIAL12細胞是AEⅡ的近似細胞系，以其為研究對象，用以探究AEⅡ在末梢肺組織穩(wěn)態(tài)維持中的重要作用。本課題以探尋VPS24的功能為核心，借助體外重組技術構建表達載體，建立高表達VPS24的穩(wěn)定轉染細胞系，并初步分析高表達VPS24對MLE12細胞生物學特性的改變。方法1、重組質(zhì)粒的構建2、細胞培養(yǎng)3、基因轉染及穩(wěn)定篩選4、WESTERNBLOTTING5、碘化丙啶染色6、REALTIMEPCR7、RTPCR8、統(tǒng)計分析結果1、成功構建外源性高表達VPS24的重組質(zhì)粒將小鼠的VPS24全長編碼區(qū)基因克隆入PCDNA31MYCHISB真核表達載體2、成功建立外源性高表達VPS24的穩(wěn)定轉染細胞系將重組質(zhì)粒轉染入MLE12細胞并進行穩(wěn)定篩選及鑒定，得到外源性高表達VPS24的穩(wěn)定轉染細胞系M12V243、外源性高表達VPS24能夠增強ESCRTS行使胞質(zhì)分裂的能力流式細胞技術檢測細胞周期可知，VPS24的過表達能夠增強ESCRTS行使胞質(zhì)分裂的能力，消解多倍體。4、外源性高表達VPS24顯著降低ECADHERINMRNA表達水平隨機選取的10個M12V24陽性單克隆中，9個單克隆的ECADHERINMRNA表達水平均出現(xiàn)明顯的降低，提示VPS24的過表達可能影響MLE12細胞的分化。5、外源性高表達VPS24不能顯著增強BLEOMYCIN誘發(fā)EMT1BLEOMYCIN處理細胞后，在我們觀察的時間段內(nèi)，細胞形態(tài)均發(fā)生一定改變，并未出現(xiàn)明顯的上皮細胞表型變?yōu)殚g質(zhì)細胞表型2REALTIMEPCR檢測可知，細胞并未發(fā)生VIMENTINMRNA表達水平的明顯升高6、TUNICAMYCIN誘發(fā)ERSTRESS體外模型的確立1通過活細胞計數(shù)，確定TUNICAMYCIN誘發(fā)ERSTRESS的最佳濃度為6NGML2通過檢測BIPMRNA表達水平及XBP1剪切情況，確定TUNICAMYCIN誘發(fā)ERSTRESS最佳時間為24小時7、ERSTRESS及VPS24過表達與ERSTRESS聯(lián)合作用均不能誘發(fā)EMT1在正常MLE12細胞培養(yǎng)條件下，經(jīng)TUNICAMYCIN處理后，細胞并未由上皮細胞表型變?yōu)殚g質(zhì)細胞表型2REALTIMEPCR檢測可知，細胞并未發(fā)生VIMENTINMRNA表達水平的明顯升高結論外源性高表達VPS24能夠增強ESCRTS行使胞質(zhì)分裂的能力，顯著降低MLE12細胞ECADHERIN表達水平在現(xiàn)有條件下，高表達VPS24不能使MLE12細胞對促纖維化試劑BLEOMYCIN更為敏感ERSTRESS與其聯(lián)合作用，不能促進MLE12細胞發(fā)生EMT轉化，表明外源性高表達VPS24可能通過下調(diào)ECADHERIN表達水平介導MLE12細胞的分化調(diào)控。

簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產(chǎn)權歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。研究生簽名锍導師簽章掃霧吁二級學院領導尊章‘。O心年歲月，J日河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名中文摘要乳腺癌ET方案新輔助化療前后分子生物學指標變化的分析摘要目的回顧性分析乳腺癌患者行新輔助化療前后其腫瘤組織ER、PR、HER2及KI67的免疫組化表達情況，觀察應用ET方案進行新輔助化療對乳腺癌分子生物學指標的表達有無影響。方法本研究選擇河北醫(yī)科大學第四院乳腺中心2010年1月至2014年8月收治的女性原發(fā)性乳腺癌患者82例，患者新輔助化療方案均為ET方案，在新輔助化療前均行粗針穿刺明確診斷并行免疫組化檢查明確ER、PR、HER2及KI67的表達情況，新輔助化療4周期后實施手術治療，術后標本同樣行免疫組化檢查明確腫瘤細胞ER、PR、HER2及KI67的表達情況，并對其新輔助化療前后的ER、PR、HER2及KI67的表達狀況進行比對分析。結果本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌新輔助化療前后有38例患者KI67的表達發(fā)生改變，占8085％38／47，其中表達增強的L例，減弱的37例，無陰性轉變?yōu)殛栃圆±?，陽性轉變?yōu)殛幮缘?0例；經(jīng)統(tǒng)計學檢驗得出新輔助化療前后KI67的表達差異有統(tǒng)計學意義P005；ER表達有14例患者發(fā)生改變，占2979％14／47，其中表達增強的5例，減弱的9例，陰性轉變?yōu)殛栃缘?例，陽性轉變?yōu)殛幮缘?例；PR表達有17例發(fā)生改變，占3617％17／47，其中表達增強的6例，減弱的11例，陰性轉變?yōu)殛栃缘?例，陽性轉變?yōu)殛幮缘?例；HER2的表達有9例發(fā)生改變，占2308％9／39，其中表達增強的2例，減弱的7例，陰性轉變?yōu)殛栃缘?例，陽性轉變?yōu)殛幮缘?例；但ER、PR、HER2在新輔助化療前后的表達狀況無統(tǒng)計學意義胗O05。結論乳腺癌應用ET方案行新輔助化療，分子生物學指標中ER、PR、HER2、KI67的免疫組化表達在新輔助化療前后均有部分病例發(fā)生改變，但本研究中僅發(fā)現(xiàn)KI67新輔助化療前后的改變有統(tǒng)計學意義PO05；其變化主要體現(xiàn)在由新輔助化療前的高表達，轉變?yōu)榛熀笫中g標本的低表達，表明高表J。KKI67的腫瘤細胞對化療較為敏感，KI67是一項化療敏感指標，對預測療效有重要的指導意義。ER、PR、HER2的改變無統(tǒng)計學意

簡介：目的模擬椎間盤組織結構和功能，構建具有生物學活性的組織工程椎間盤，初步評價其在體內(nèi)的生物學功能。方法⑴取3周齡新西蘭大白兔椎間盤組織，利用Ⅱ型膠原酶消化法分別獲取髓核細胞和纖維環(huán)細胞，觀察鑒定第二代P2細胞。⑵利用交聯(lián)反應制備的殼聚糖水凝膠作為髓核支架，利用靜電紡絲技術制備的聚對苯二甲酸共丁二酸丁二醇酯POLYBUTYLENESUCCINATECOTEREPHTHALATE，PBST紡絲薄膜作為內(nèi)纖維環(huán)支架，以實心的PBST環(huán)作為外纖維環(huán)支架。采用掃描電鏡表征殼聚糖水凝膠和PBST紡絲薄膜的空間結構，測試PBST紡絲薄膜的孔隙率及吸水率。⑶在殼聚糖水凝膠、PBST紡絲薄膜上分別接種髓核細胞和纖維環(huán)細胞，培養(yǎng)3W后，HE染色檢測支架的細胞相容性。⑷以殼聚糖水凝膠作為髓核支架，PBST紡絲薄膜作為內(nèi)纖維環(huán)支架，實心的PBST環(huán)作為外纖維環(huán)支架，組裝成PBST殼聚糖水凝膠三相組織工程椎間盤支架，檢測三相組織工程椎間盤支架的力學性能。⑸將P2代纖維環(huán)細胞、髓核細胞分別接種在纖維環(huán)、髓核支架上，再移至裸鼠皮下培養(yǎng)4W后，通過HE、番紅O、COLLAGENⅡ免疫組化、AGGRECAN免疫熒光染色觀察組織工程椎間盤的形態(tài)結構和Ⅱ型膠原蛋白、蛋白聚糖的表達。⑹用上述裸鼠皮下培養(yǎng)的組織工程椎間盤置換3月齡新西蘭大白兔的椎間盤，鋼板固定相鄰椎體。術后4W行X線、MRI檢測并獲取組織工程椎間盤標本，通過HE、番紅O、COLLAGENⅡ免疫組化、AGGRECAN免疫熒光染色觀察組織工程椎間盤的形態(tài)結構和Ⅱ型膠原蛋白、蛋白聚糖的表達。⑺提取裸鼠皮下組織工程椎間盤（裸鼠組）、實驗兔體內(nèi)組織工程椎間盤（實驗兔組）、兔正常椎間盤（對照組）的RNA，體外擴增COLLAGENⅡ、AGGRECAN基因，RTPCR檢測Ⅱ型膠原蛋白及蛋白聚糖的表達。結果①體外培養(yǎng)的P2代纖維環(huán)細胞、髓核細胞在形態(tài)上呈長梭形或多邊形，生長速度快。兩種細胞的番紅O、COLLAGENⅡ免疫組化、AGGRECAN蛋白聚糖免疫熒光染色均呈陽性，表明細胞分泌Ⅱ型膠原、蛋白聚糖。②殼聚糖水凝膠呈白色海綿狀，吸水后呈透明膠凍狀，掃描電鏡見支架存在大量孔隙，孔隙之間相互連通。接種髓核細胞體外培養(yǎng)3W后，HE染色可見細胞在支架內(nèi)生長良好，細胞分布均勻。③光鏡下見PBST纖維粗細均勻，無珠狀體形成PBST紡絲薄膜呈白色，較疏松，孔隙率為6183％±733％，吸水率為29734％±5713％復合纖維環(huán)細胞體外培養(yǎng)3W后的PBST紡絲薄膜HE染色可見纖維環(huán)細胞在PBST紡絲薄膜內(nèi)分布均勻，細胞大量增殖。④組裝的三相組織工程椎間盤支架大小約952MM，各相之間連接緊密，無明顯縫隙壓縮強度為310MPA±013MPA，彈性模量為2222MPA±092MPA拉伸強度為321MPA±018MPA，彈性模量為1813MPA±130MPA。⑤裸鼠皮下構建的組織工程椎間盤具有與正常椎間盤相似的結構，各相之間融合良好，種子細胞在組織工程椎間盤內(nèi)分泌Ⅱ型膠原和蛋白聚糖。⑥X線檢測見鋼板內(nèi)固定位置良好，無斷裂、移位，椎間隙高度正常MRI檢測見組織工程椎間盤T2相為高信號。⑦術后4W解剖實驗兔，組織工程椎間盤在椎間隙位置良好，形態(tài)完整，無移位、碎裂組織工程椎間盤的HE染色見大量細胞，番紅O、COLLAGENⅡ免疫組化、AGGRECAN免疫熒光染色陽性，表明組織工程椎間盤含有Ⅱ型膠原和蛋白聚糖。⑧RTPCRCOLLAGENⅡMRNA的表達對照組高于實驗兔組，P0001，差異具有統(tǒng)計學意義對照組高于裸鼠組，P0000，差異具有統(tǒng)計學意義。AGGRECANMRNA的表達對照組高于實驗兔組，P0000，差異具有統(tǒng)計學意義對照組高于裸鼠組，P0000，差異具有統(tǒng)計學意義裸鼠組高于實驗兔組，P0000，差異具有統(tǒng)計學意義。結論⑴PBST殼聚糖三相組織工程椎間盤支架材料符合正常椎間盤的結構特點，具有良好的細胞相容性、孔隙率、力學性能和可塑性。⑵在裸鼠皮下構建的組織工程椎間盤各相之間融合良好，形態(tài)學觀察、組織結構特點與正常椎間盤相似，具有細胞生物活性。⑶采用鋼板固定相鄰上下椎體的固定方式可靠。組織工程椎間盤在體內(nèi)繼續(xù)保持細胞活性，分泌椎間盤細胞外基質(zhì)，部分發(fā)揮椎間盤的生物學功能。⑷本實驗可為組織工程椎間盤構建提供理論依據(jù)。

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簡介：ATHESISDISSERTATIONSUBMITTEDTOZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTORSILENCINGOFFGFR4COULDINFLUENCETHEBIOLOGICALFUNCTIONOFGASTRICCANCERCELLSANDITSTHERAPEUTICVALUEBYXIAORUILIUSUPERVISORPROFQUANCHENGKANDIGESTIVESYSTEMDEPARTMENTTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITALOFZHENGZHOUUNIVERSITYSEPTEMBER2015摘要成纖維細胞生長因子受體4基因沉默對胃癌生物學功能影響的研究及其臨床意義摘要胃癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，在亞洲尤其是在我國的發(fā)病率甚高。在我國，早期胃癌的發(fā)現(xiàn)率約為20％，遠低于韓國和日本等其他亞洲國家。胃癌的發(fā)現(xiàn)常在癌癥晚期或者因轉移性胃癌而被發(fā)現(xiàn)。在我國胃癌多為進展期，并且預后比較差，常需要通過手術治療為主、放化療等為輔的綜合治療。目前，胃癌的輔助化療、姑息化療的方案很多，如順鉑氟尿嘧啶、氟尿嘧啶奧沙利鉑、DCF、ECF等，其中以氟尿嘧啶為基礎化療藥物。由于胃癌發(fā)病機制的復雜性和不確定性，目前胃癌治療的生存時間并不理想，無論是美國的NCCN指南還是歐洲腫瘤醫(yī)學協(xié)會ESMO均沒有治療胃癌的標準方案。盡管近年來靶向藥物在胃癌研究領域非常熱門，但是由于胃癌的發(fā)生發(fā)展一個是具有多因素、多階段和多種基因共同參與的過程，其發(fā)病機制并不清楚；目前除了赫塞丁外，多數(shù)藥物如貝伐珠單抗、愛必妥等藥物在胃癌研究中并未取得突破。所以尋找新的靶基因，闡明胃癌的發(fā)生發(fā)展機制對有效治療胃癌有著重要的作用。由近年來靶向藥物的相關研究可以看出，EGFR、VEGF等相關信號通路藥物在肺癌、乳腺癌等一些惡性腫瘤治療中取得了突破性進展，但是這些研究對胃癌治療并無作用。因此尋求新的治療靶點是胃癌治療的一大任務。近年來，對于FGFRFIBROBLASTGROWTHFACTORRECPTOR的研究日益增多，成纖維細胞生長因子受體FGFRS是免疫球蛋白基因超家族成員，分布在多種細胞膜上，其中以FGFR4多肽性位點GLY388ARG研究最多。FGFR4基因編碼的蛋白是一類跨膜酪氨酸激酶受體，為分布在多種細胞上的膜蛋白。它對細胞的增殖、分化、創(chuàng)傷修復、血管生成、肌肉形成以及生長發(fā)育等都起著極其重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，該種蛋白在多種腫瘤中均有表達異常，如胰腺癌、乳腺癌等，因此FGFR家族在惡性腫瘤診治方面有著廣闊的應用前景。但迄今為止，F(xiàn)GFR4在胃癌中的研究很少，并且研究不夠深入。一些報道顯示BGJ398與FGFR家族有很好的親和力和選擇性，并且BGJ398

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簡介：究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、已公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容，也不包含為獲得中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本學位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任由本人承擔。’學位論文作者簽名曼蔭和IJ年月學位論文版權使用授權書本人完全了解中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所關于收集、保存、使用學位論文的規(guī)定，同意如下各項內(nèi)容按照中監(jiān)所要求提交學位論文的印刷本和電子版本；中監(jiān)所有權保存學位論文的印刷本和電子版，并采用影印、縮印、掃描、數(shù)字化或其它手段保存論文；中監(jiān)所有權提供目錄檢索以及提供本學位論文全文或者部分的閱覽服務；中監(jiān)所有權按有關規(guī)定向國家有關部門或者機構送交論文的復印件和電子版；在不以贏利為目的的前提下，中監(jiān)所可以適當復制論文的部分或全部內(nèi)容用于學術活動。保密的學位論文在年解密后適用本授權書‘指導刻程各A釤學位論文作者簽名歪J銪

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簡介：第一部分入骨髓間充質(zhì)干細胞體外擴增后的生物學特性及聯(lián)合造血干細胞移植治療血液病的研究目的體外擴增源于人骨髓的間充質(zhì)干細胞MSCS，鑒定其生物學特性，及探討其聯(lián)合造血干細胞移植治療血液病的可行性和安全性。方法體外擴增來自16例健康供者及4例經(jīng)過化療的惡性血液病患者的骨髓單個核細胞。擴增后的細胞經(jīng)免疫表型檢測、成骨和成脂肪誘導、染色體分析、衰老相關性Β半乳糖苷酶染色和與混合淋巴細胞共培養(yǎng)，進一步鑒定其是否為臨床所需的MSCS。體外擴增后的MSCS聯(lián)合造血干細胞共移植治療血液病患者自體移植5例、HLA全相合異基因移植15例、HLA半相合親緣供者非去T細胞移植2例，觀察輸注反應和移植后臨床特征。結果①從256士51ML骨髓來自16例正常供者樣本中成功擴增得約182士038106KG受者體重MSCS，均體外培養(yǎng)3～4代。其免疫表型為CD73、CD90、CD105陽性，CD34、CD45，CD38、CD10、CD20、CD33、HLADR陰性，純度達95％以上；具有成骨和成脂肪分化能力，可抑制MLRS中的淋巴細胞增殖，染色體核型正常，衰老相關性Β半乳糖苷酶染色絕大多數(shù)細胞呈陰性、少數(shù)呈弱陽性。②從4例化療后的惡性血液病患者3例NHL，1例ANLL骨髓中分離培養(yǎng)獲得的MSCS經(jīng)擴增3～4代后獲得MSCS為193士057106KG。其各項生物學特征與正常供者骨髓來源的MSCS一致。③5例進行自體外周血干細胞移植的惡性血液病患者無論是輸注自體的MSCS4例還是異體的MSCS1例，MSCS來自健康供者，無輸注不良反應。且患者均造血重建迅速，無嚴重并發(fā)癥，已隨訪45～70月。④12例HLA全相合同胞供者移植患者輸注來源于同一供者骨髓的MSCS無輸注不良反應所有患者造血重建成功，移植后一月均呈100％供者型造血。2例1667％出現(xiàn)Ⅱ～Ⅳ度AGVHD，2例1667％出現(xiàn)廣泛性CGVHD。4例出現(xiàn)CMV感染，均治愈。有7例已隨訪29～57月，5例死亡。⑤3例HLA半相合親緣供者非去T細胞移植患者輸注來源于同一供者骨髓的MSCS無輸注不良反應所有患者造血重建成功，移植后一月均呈100％供者型造血。2例因預防或治療疾病復發(fā)予DLI后才發(fā)生Ⅳ度AGVHD和廣泛型CGVHD。另1例僅發(fā)生Ⅰ度急性GVHD和局限性慢性GVHD。2例現(xiàn)已分別隨訪了53月和43月，1例死亡。結論體外擴增人骨髓中貼壁生長的細胞3～4代后經(jīng)免疫分型檢測和兩系分化誘導符合MSCS，且足夠數(shù)量、純度高、核型正常、幾乎沒有老化，可應用于臨床。在3種造血干細胞移植模式中，給患者輸注體外擴增的BMMSCS，均是安全可行的要明確BMMSCS輸注對于移植后造血重建、免疫重建、GVHD的影響，還需要更大樣本量和將患者分組統(tǒng)計分析。第二部分真性紅細胞增多癥骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及其功能特性的研究目的分離、培養(yǎng)真性紅細胞增多癥PV患者骨髓間充質(zhì)干細胞MSCS，并對MSCS的功能、特性進行研究。方法采集9例初診PV患者和6例正常個體的骨髓，應用密度梯度離心法結合貼壁培養(yǎng)法獲取MSCS，并傳代、擴增。擴增至第3代培養(yǎng)細胞，瑞氏染色觀察細胞形態(tài)，隔天消化細胞計數(shù)繪制細胞生長曲線，電鏡檢測MSCS的超微結構，流式細胞術檢測MSCS免疫表型和細胞周期，通過油紅O染色、VONKOSSA染色檢測MSCS向脂肪、骨的分化，常規(guī)核型分析檢測MSCS染色體，等位基因特異性聚合酶鏈反應ASPCR檢測其JAK2V617F點突變，RTPCR檢測其造血因子在MRNA水平的表達。結果PV和正常個體來源的MSCS均呈成纖維樣貼壁生長，細胞倍增時間約為43H，流式細胞術檢測大部分細胞處于靜止期90％，只有少部分細胞處于分裂期10％。MSCS表達CD73、CD90，而CD34、CD45、CD133、HLADR均為陰性。MSCS在相應的誘導條件下可以向骨、脂肪分化。PV來源的MSCS染色體檢測均為正常核型，其JAK2V617F點突變均為陰性。PV患者的MSCS表達Β2ΜG、SCF、FLT3配體、TPO、LIF、IL6、IL11；不表達GMCSF、GCSF、IL3，與正常人的一致。結論該細胞群體表現(xiàn)為正常人MSCS的生物學特性。第三部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)過程中老化的研究目的MSCS因其多向分化潛能和免疫調(diào)節(jié)功能在再生醫(yī)學和臨床移植中被廣泛研究，需要在體外大量擴增已有人關注到人MSCS在體外擴增的過程中會漸漸老化。關于大鼠MSCS在體外擴增過程中老化過程的研究未見報道。我們將大鼠骨髓MSCS在體外擴增、傳代，觀察有無老化現(xiàn)象。方法全骨髓培養(yǎng)法接種大鼠骨髓細胞，貼壁培養(yǎng)獲得骨髓間充質(zhì)干細胞，成骨和成脂肪培養(yǎng)鑒定。在傳代過程中，對每代細胞進行測定。瑞氏染色觀察其形態(tài)，掃描電鏡測定其超微結構，CCK8試劑測定其生長曲線，成骨培養(yǎng)及VOSKOSSA染色，成脂肪培養(yǎng)及油紅O染色，以及衰老相關性Β半乳糖苷酶染色和P16INK4A基因定量測定。結果大鼠骨髓單個核細胞經(jīng)貼壁培養(yǎng)獲得的細胞呈梭型或多角型，有成脂肪和成骨分化能力。細胞瑞氏染色示細胞在傳代后漸趨肥大，相差顯微鏡顯示細胞傳代后漸趨扁平。超微結構顯示2代細胞有20％有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張和少量線粒體髓鞘樣變；4代細胞均呈線粒體髓鞘樣變和空泡化。細胞在6代以前增殖旺盛，6代以后生長變緩，8～9代以后細胞幾乎不見生長細胞衰老相關性Β半乳糖苷酶染色陽性率和P16INK4A基因表達量隨細胞傳代逐漸增加。成脂肪培養(yǎng)顯示細胞自6代以后成脂肪能力減弱。成骨培養(yǎng)顯示細胞自6代以后成骨能力減弱，且成骨培養(yǎng)中的脂肪化現(xiàn)象增多。結論大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在體外培養(yǎng)的過程中逐漸老化，增殖能力和分化能力減弱，形態(tài)漸趨扁平肥大在應用體外擴增后MSCS進行研究時需考慮細胞老化的狀態(tài)。髓間充質(zhì)干細胞

簡介：V1023534浙江師范大學教育碩士學位論文學科專業(yè)堂盤熬堂F生塹年級一2Q魚曼熟學號2Q壁曼照2研究生奎擔國指導教師捌墮F煎筮中圖分類號逝33窆答辯時間2QQ查年J三月J￡日的評價在課程開發(fā)的不同階段采取不同的方式課程開發(fā)的準備階段采取背景性評價；在課程編制階段進行實質(zhì)性評價；在課程使用階段進行診斷性評價。經(jīng)過校本課程開發(fā)活動，基本實現(xiàn)了校本課程開發(fā)的價值預期。學生具有了一定的課程選擇權，學生的個性得到了一定的發(fā)展。校本課程開發(fā)使教師的角色發(fā)生了轉變，教師的專業(yè)的到了發(fā)展。同時校本課程開發(fā)使學校的辦學思路日漸清晰，“健康、個性”等漸漸成為學校的辦學宗旨。同時，也存在有待進一步改進的地方，如教師的課程意識和課程開發(fā)理論水平及實踐能力都有待進一步提高；教師參與校本課程開發(fā)的時間需要進一步得到保證；課程資源開發(fā)利用的范圍需進一步擴寬；課程評價仍需不斷完善等。關鍵詞普通高中，校本課程開發(fā)，課程評價

簡介：目的探討無遷徙生長現(xiàn)象碳青酶稀耐藥奇異變形桿菌生物學特性、耐藥機制及分子分型特點，為院內(nèi)感染防控提供指導。此外，通過比較遷徙生長奇異變形桿菌與無遷徙生長奇異變形桿菌耐藥譜差異，為臨床針對該類細菌抗感染治療提供科學依據(jù)。方法回顧分析2013年1月至2014年12月武警杭州醫(yī)院臨床分離的奇異變形桿菌耐藥率收集其中碳青霉烯類耐藥無遷徙奇異變形桿菌，菌株經(jīng)過多次傳代并觀察有無遷徙生長現(xiàn)象，通過半固體培養(yǎng)及鞭毛染色實驗觀察菌株動力及鞭毛利用脈沖凝膠電泳PFGEPULSEDFIELDGELELECTROPHESIS分析菌株之間同源性采用瓊脂稀釋法及ETEST法進行藥物敏感性實驗，同時應用ESBLS雙紙片實驗和改良HODGE實驗進行表型確證，表型實驗陽性菌株采用PCR方法和測序分析明確耐藥基因型。運用S1PFGE聯(lián)合SOUTHERN印跡雜交及質(zhì)粒電轉化試驗對碳青霉烯耐藥基因進行定位，并分析耐藥基因周圍環(huán)境。最后對電轉子進行目標基因擴增和藥敏驗證。結果無遷徙生長奇異變形桿菌生物學特性通過比較菌體鞭毛染色發(fā)現(xiàn)，鏡下無遷徙菌株菌體小且規(guī)則并明顯缺失鞭毛結構在半固體穿刺培養(yǎng)中只能沿穿刺線生長，不能沿線外蔓延擴散，推測可能由于無遷徙菌株，鞭毛結構缺失而失去遷徙生長的能力。兩種奇異變形桿菌生化特性相同。在不同培養(yǎng)基中生長情況提示，在含有膽鹽的麥康凱、SS平板上，兩種奇異變形桿菌均不能形成遷徙生長的菌落，群集運動消失。本次研究共統(tǒng)計奇異變形桿菌339株，其中無遷徙細菌42株遷徙菌對亞胺培南與美羅培南耐藥率分別為63％與32％，無遷徙菌耐藥率分別為572％與524％，兩種形態(tài)菌株對碳青霉烯耐藥率具有顯著差異42株無遷徒奇異變形桿菌中，碳青霉烯類耐藥的奇異變形桿菌為24株，占57％。對該24株碳青霉烯類耐藥無遷徙生長奇異變形桿菌進行PFGE同源性分析，結果提示分為3個克隆型，以克隆A型（2224株）流行為主，所有菌株改良HODGE實驗均為陽性，且均攜帶BLAKPC2基因，菌株動力實驗及鞭毛染色均為陰性SOUTHERN印跡雜交表明BLAKPC2基因分別定位在約為26KB，55KB，139KB不同大小質(zhì)粒上部分菌株在攜帶BLAKPC2基因的質(zhì)粒上同時攜帶BLATEM1、BLACTXM65、RMTB等多種耐藥基因攜帶BLAKPC2基因菌株周圍結構顯示，其上游含有插入元件ISKPN8，下游則由插入元件ISKPN6LIKE構成，該結構易導致耐藥基因在種屬間水平傳播。臨床資料回顧發(fā)現(xiàn)，該類細菌多數(shù)分離自呼吸道，病人多為氣管切開狀態(tài)，患者有住院時間長，大量使用廣譜抗生素的特點。結論無遷徙生長奇異變形桿菌因鞭毛結構缺失而失去遷徙生長的能力。該類菌具有較高碳青霉烯類抗生素的耐藥率，產(chǎn)KPC2型碳青霉烯酶是導致無遷徙奇異變形桿菌對碳青霉烯類抗生素耐藥的主要原因。碳青霉烯耐藥無遷徙生長奇異變形桿菌在我院呈克隆播散趨勢，應引起臨床高度重視。

簡介：缺氧是最重要的應激反應之一，是也臨床最常見的病理生理過程，與心血管疾病和高原性肺水腫等的發(fā)生密切相關。糖皮質(zhì)激素作為體內(nèi)最重要的應激激素，在機體對低氧適應中發(fā)揮重要作用。人工合成的糖皮質(zhì)激素地塞米松（DEX）在臨床上被廣泛用于治療肺水腫和肺損傷，它的這種作用是通過降低血管內(nèi)皮細胞的通透性、加速肺泡腔中液體的清除以及增強肺上皮屏障功能來實現(xiàn)的。STOMATIN是一個重要的脂筏標志蛋白，它廣泛表達在人和小鼠的各組織細胞中，參與脂筏結構的裝配，囊泡運輸、物質(zhì)的跨膜轉運、以及對離子通道和細胞骨架的調(diào)節(jié)等生理過程。但是迄今對STOMATIN的功能了解的有限，對其在生理和病理條件下的調(diào)節(jié)研究的更少。我們前期研究了低氧和地塞米松（DEX）單獨及聯(lián)合作用對大鼠肺臟和人肺腺癌A549細胞STOMATIN表達的影響。結果發(fā)現(xiàn)低氧和DEX在體內(nèi)和體外均可以上調(diào)STOMATIN的表達。本課題將從細胞和整體水平進一步確定糖皮質(zhì)激素和低氧單獨或共同作用對STOMATIN基因表達的影響，在此基礎上，重點研究低氧和地塞米松上調(diào)STOMATIN表達的機制，并初步探討STOMATIN表達上調(diào)的生物學意義。采用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT的方法，我們首先在大鼠肺臟和原代培養(yǎng)的肺泡上皮細胞水平進一步證實了地塞米松和低氧不僅單獨可誘導STOMATIN的表達，二者還能聯(lián)合上調(diào)STOMATIN表達。接下來我們研究了低氧和地塞米松上調(diào)STOMATIN的機制。研究發(fā)現(xiàn)，STOMATINMRNA有一個相當長的半衰期，約為32小時，低氧和地塞米松處理都能夠增強STOMATINMRNA的穩(wěn)定性使它的半衰期分別延長至原來的122倍和15倍。我們用熒光素酶報告基因實驗研究發(fā)現(xiàn)，低氧不能誘導STOMATIN啟動子的轉錄活性，與低氧不同的是，地塞米松能夠以時間和濃度依賴性的方式誘導STOMATIN啟動子的活性，這個結果表明地塞米松也能夠直接在轉錄水平上誘導STOMATINMRNA的表達。為了進一步定位STOMATIN啟動子對糖皮質(zhì)激素誘導反應的位點，我們構建了一系列含STOMATIN啟動子5’端不同截短形式的報告基因載體，熒光素酶活性分析試驗表明，啟動子的162至244區(qū)域是對糖皮質(zhì)激素誘導反應所不可缺少的，而且這一區(qū)域在多種細胞類型中均貢獻了STOMATIN基因的絕大部分基礎轉錄活性，因此我們推測這一區(qū)域是它的核心啟動子區(qū)。隨后，我們用軟件預測了這一區(qū)域所包含的可能介導糖皮質(zhì)激素誘導反應的轉錄因子結合位點，并且構建了這些位點的相應突變型報告基因載體。結果發(fā)現(xiàn)，其中一個位點GRE3，突變之后能夠使STOMATIN啟動子失去對地塞米松的誘導反應，這說明GRE3介導了地塞米松對STOMATIN的誘導反應。因此我們認為，地塞米松在轉錄水平上對STOMATIN的誘導是通過激活的糖皮質(zhì)激素受體與這個GRE3位點結合來實現(xiàn)的。最后，我們用激光共聚焦顯微鏡的方法觀察了A549細胞中STOMATIN的表達與ACTIN細胞骨架的關系。結果發(fā)現(xiàn)，STOMATIN在膜周與ACTIN細胞骨架存在共定位。低氧暴露或DEX處理均能使膜周ACTIN增加干擾內(nèi)源性STOMATIN表達后低氧暴露或DEX處理A549細胞都能使ACTIN細胞骨架在膜周分布顯著減少，表明低氧和DEX能通過上調(diào)STOMATIN表達增加與細胞膜連接的細胞骨架，從而增強肺泡上皮細胞膜的穩(wěn)定性。這可能是低氧和GC增強肺泡上皮細胞屏障的功能，從而使得機體產(chǎn)生對低氧適應性反應的機制之一。