簡(jiǎn)介：分類號(hào)S墨22UDC碩士學(xué)位論文山羊痘病毒基因缺失重組毒株的構(gòu)建與生物學(xué)特性鑒定李春艷學(xué)科專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)堂指導(dǎo)教師鍪塞強(qiáng)論文答辯日期2QL530學(xué)位授予日期2Q魚12窆廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和學(xué)位論文使用授權(quán)說明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的，研究工作所取得的成果和相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬?gòu)V西大學(xué)所有。除已注明部分外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表過的研究成果，也不包含本人為獲得其它學(xué)位而使用過的內(nèi)容。對(duì)本文的研究工作提供過重要幫助的個(gè)人和集體，均已在論文中明確說明并致謝。論文作者簽名套痞彳渺A礦，，年月／A日學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人完全了解廣西大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即本人保證不以其它單位為第一署名單位發(fā)表或使用本論文的研究?jī)?nèi)容；按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝　⒖s印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；學(xué)?？梢怨颊撐牡牟糠只蛉?jī)?nèi)容。請(qǐng)選擇發(fā)布時(shí)間函口時(shí)發(fā)布口解密后發(fā)布保密論文需注明，并在解密后遵守此規(guī)定～套忿掃一名弗專騖州

簡(jiǎn)介：意大利蜜蜂是蜜蜂的一種，在分類學(xué)上屬動(dòng)物界、節(jié)肢動(dòng)物門、昆蟲綱、膜翅目、蜜蜂總科、蜜蜂科。意大利蜜蜂（意蜂）是世界上分布最廣且被大量利用的西方蜜蜂。蜂毒是存在于蜜蜂毒囊內(nèi)的透明液體，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)包含多種有活性的物質(zhì)，包括蜂毒肽、蜂毒明肽和透明質(zhì)酸酶等。為了探究意蜂毒的物質(zhì)成分及其生物化學(xué)性質(zhì)，我們收集意蜂毒液，在粗毒水平檢測(cè)了意蜂毒對(duì)白血病細(xì)胞K562的毒害作用，發(fā)現(xiàn)對(duì)K562細(xì)胞的IC50是549ΜGML。隨后我們用倒置顯微鏡檢測(cè)了細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，發(fā)現(xiàn)5ΜGML的蜂毒使細(xì)胞膜受損傷，細(xì)胞邊緣模糊，而在10ΜGML的濃度下蜂毒完全破壞了癌細(xì)胞的細(xì)胞膜，細(xì)胞完全死亡。本研究采用反相高效液相色譜對(duì)意蜂毒素進(jìn)行分離純化，共收集到20個(gè)峰，分別收集，真空凍干。隨后對(duì)每個(gè)組分進(jìn)行了電生理檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)滯留時(shí)間在8MIN的成分可以完全抑制ND723細(xì)胞表達(dá)的鈉通道電流。ND723細(xì)胞可以表達(dá)幾種不同的鈉電流，為了進(jìn)一步研究毒素的選擇性，將NAV13、NAV14、NAV15和NAV17通過HEK293T細(xì)胞異源表達(dá)，將NAV18通過ND723細(xì)胞異源表達(dá)。結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)它完全抑制NAV13、NAV14鈉電流，抑制60％的NAV15電流，抑制52％的NAV17電流，抑制93％的NAV18電流，結(jié)果表明毒素對(duì)離子通道有一定的選擇性。LYCOSINⅠ是本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的一種抗菌藥物，對(duì)多種臨床致病菌株都有很好的抑制作用，為了進(jìn)一步提高LYCOSINⅠ的抗菌活性，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)LYCOSINⅠ進(jìn)行了分子改造，在其氨基端偶聯(lián)一個(gè)葡萄糖分子，即GLULYCOSINⅠ。隨后檢測(cè)了野生型LYCOSINⅠ與GLULYCOSINⅠ的抗菌活性，我們發(fā)現(xiàn)改造后的GLULYCOSINⅠ對(duì)幾種臨床致病菌的抑制弱于野生型LYCOSINⅠ，因此在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中我們會(huì)嘗試將不同的分子與LYCOSINⅠ偶聯(lián)，使之成為更好的抑菌藥物。

簡(jiǎn)介：目的促甲狀腺激素THYROIDSTIMULATINGHMONE，TSH是調(diào)控甲狀腺功能的關(guān)鍵蛋白，TSH由Α亞基和Β亞基通過非共價(jià)鍵連接組成，Β亞基具有激素特異性。2009年VINCENT等報(bào)道了第一個(gè)功能性TSHΒ剪接變體，TSHΒ新剪接變體在免疫神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)中可能具有不同于天然型TSHΒ的調(diào)控作用。由于該TSHΒ剪接變體是新近才被發(fā)現(xiàn)的，所以目前對(duì)其基本生物學(xué)特性、表達(dá)調(diào)控機(jī)制及與甲狀腺相關(guān)疾病相關(guān)性等均不清楚。本研究擬從上述幾個(gè)方面對(duì)這個(gè)TSHΒ新剪接變體進(jìn)行逐步深入的探討。方法1TSHΒ剪接變體在正常人外周血中的研究對(duì)血清樣品進(jìn)行鹽析、透析和濃縮預(yù)處理后采用免疫沉淀法鑒定人血清中是否存在TSHΒ剪接變體蛋白；運(yùn)用RTPCR和WESTERNBLOT方法分別從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)水平檢測(cè)人外周血白細(xì)胞PERIPHERALBLOODLEUKOCYTE，PBL中TSHΒ剪接變體表達(dá)情況；制作人PBL涂片，運(yùn)用免疫熒光染色檢測(cè)人PBL中TSHΒ剪接變體的表達(dá)。2人TSHΑ與TSHΒ剪接變體體外結(jié)合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)構(gòu)建PGFPZEOTSHΒ剪接變體和PCDNA31DV5HISTOPOTSHΑ兩個(gè)重組表達(dá)載體，分別轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞系，建立能穩(wěn)定表達(dá)TSHΒ剪接變體和TSHΑ的CHO細(xì)胞系，將上述兩種CHO細(xì)胞系混合培養(yǎng)后，取培養(yǎng)上清，利用免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證人TSHΑ是否能與TSHΒ剪接變體形成二聚體。3不同病理生理?xiàng)l件對(duì)TSHΒ剪接變體表達(dá)影響定量PCR檢測(cè)GD和HT患者PBL中TSHΒ剪接變體的表達(dá)差異；分離培養(yǎng)人PBL，分別給予致炎因子LPS10MGL、抗炎因子地塞米松106，107108M、TRH100NM和T3100NM直接刺激，定量PCR技術(shù)檢測(cè)人PBL中TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)差異。4人TSHΒ新剪接變體蛋白的原核表達(dá)及純化采用PET高效大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對(duì)人TSHΒ剪接變體進(jìn)行表達(dá)并利用免疫親和層析技術(shù)純化獲得重組人TSHΒ剪接變體蛋白。結(jié)果1鑒定出人血清中存在TSHΒ剪接變體蛋白，正常人PBL僅表達(dá)TSHΒ剪接變體而不表達(dá)天然型TSHΒ，免疫熒光染色顯示人PBL中有TSHΒ剪接變體陽性表達(dá)細(xì)胞。2成功構(gòu)建PGFPZEOTSHΒ剪接變體和PCDNA31DV5HISTOPOTSHΑ兩個(gè)重組表達(dá)載體；建立能穩(wěn)定表達(dá)TSHΒ剪接變體和TSHΑ的CHO細(xì)胞系；免疫共沉淀技術(shù)證實(shí)人TSHΑ能與TSHΒ剪接變體形成二聚體。3TSHΒ剪接變體在GD和HT患者PBL中的表達(dá)差異與正常人相比，HT初發(fā)患者未經(jīng)任何藥物治療PBL中TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量上調(diào)12333％N10，P18個(gè)月的HT患者PBL中TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量上調(diào)7667％N5，P0023而發(fā)病初期曾使用強(qiáng)的松治療3個(gè)月，病程≤9個(gè)月的HT患者PBL中TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量下調(diào)40％N8，P4單次給予致炎因子LPS刺激后，人PBL中TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)變化趨勢(shì)是先增高后下降最后恢復(fù)至正常。與正常對(duì)照組相比，LPS處理6H組TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量增高P0003，LPS處理12H組TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量下降P0008，LPS處理24H、48H組TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量與正常對(duì)照24H、48H組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？寡滓蜃拥厝姿梢种芓SHΒ剪接變體MRNA表達(dá)并呈時(shí)間濃度依賴性。5TRH作用人PBL6H時(shí)，TSHΒ剪接變體MRNA表達(dá)量增高P6成功構(gòu)建PET28ATSHΒ剪接變體重組表達(dá)載體，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，免疫親和純化，最后獲得了74MGTSHΒ剪接變體蛋白，純度大于90％。結(jié)論1TSHΒ剪接變體既可以存在于外周血循環(huán)中，以遠(yuǎn)距分泌TELECRINE方式發(fā)揮生物學(xué)作用，也可以表達(dá)于免疫細(xì)胞，以旁分泌PARACRINE的方式發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。2人TSHΑ能與TSHΒ剪接變體形成二聚體，該研究結(jié)果對(duì)于證明它的穩(wěn)定性和是否具有高度生物活性至關(guān)重要。3TSHΒ剪接變體可能參與了HT患者的甲狀腺病理?yè)p傷。機(jī)體在不同狀態(tài)下，TSHΒ剪接變體可能受HPT軸和或免疫系統(tǒng)調(diào)控。4純化獲得的TSHΒ剪接變體蛋白將為TSHΒ剪接變體功能及調(diào)控機(jī)制的深入研究提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：ILLILILLHLLLLLLJLIJLLLLLLLFLTLLLLLLFIJY3268499分類號(hào)8ZI2密級(jí)壘玨單位代碼學(xué)號(hào)10159201110272碴幸回塞拜失孥博士學(xué)位論文中文題目長(zhǎng)鏈非編碼LNAKCNQL0T在肺腺癌中的表達(dá)及其對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞惡性生物學(xué)袁型和化療耐藥性的影響英文題目THEEXPRESSIONOF10NG13011CODINGRNAKCNQL0T1INLUNGADENOCARCINOMAANDITSINFLUENCETOMALIGNANCYANDCHEMORESISTANCEINA549CELLS論文作者指導(dǎo)教師學(xué)科專業(yè)完成時(shí)間壁亞塑石文君教授鹽盤堂2017年2月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，論文中除加以標(biāo)注的內(nèi)容外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含本人為獲得其他學(xué)位而使用過的成果。對(duì)本研究提供貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體均己在文中進(jìn)行了明確的說明并表示謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名印弄壚斗日期勘，年’6月S一日中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的原件、復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密，在年后解密適用本授權(quán)書。保密請(qǐng)?jiān)诶ㄌ?hào)內(nèi)劃“√”敝儲(chǔ)攤修3日期山，7年F月R日指導(dǎo)教師簽名嗍加／7年翻J百

簡(jiǎn)介：大面積皮膚嚴(yán)重?zé)齻木戎问悄壳柏酱鉀Q的醫(yī)學(xué)和社會(huì)問題。全國(guó)每年近千萬人的燒傷病人，近萬人嚴(yán)重?zé)齻渲屑s10％的嚴(yán)重?zé)齻∪擞捎谌狈ζぴ瓷袩o法挽救其性命。嚴(yán)重?zé)齻@救的病人由于無汗腺功能的疤痕組織取代皮膚使其終生喪失正常皮膚功能，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量。汗腺是人體皮膚組織中重要的功能性附屬器，汗腺可分為頂泌汗腺即大汗腺，和外泌汗腺即小汗腺。一般所說的汗腺是外泌汗腺，在調(diào)節(jié)體溫、分泌汗液及排出人體部分代謝廢物的過程中發(fā)揮重要的作用。外泌汗腺是單管狀腺，分為分泌部和導(dǎo)管部，分泌部位于真皮層或皮下組織內(nèi)，是盤曲成團(tuán)的小管，而導(dǎo)管部開口于表皮層，連接分泌部和外界環(huán)境。汗腺的發(fā)育開始于胚胎時(shí)期1416周，至24周基本成熟，出生之后不會(huì)有新生的汗腺組織形成。皮膚組織修復(fù)和功能重建在國(guó)內(nèi)和國(guó)際上都是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的核心和熱點(diǎn)。輕度燒傷時(shí)，汗腺的導(dǎo)管處細(xì)胞可以其深部未受損的部分為模版從而重建汗腺被損壞的部分；但全層皮膚大面積深度燒傷時(shí)，由于汗腺組織被毀，則不能依賴細(xì)胞的分裂、增殖與終末分化來自我更新而重建其復(fù)雜結(jié)構(gòu)。至今尚無有效的方法體外擴(kuò)增人汗腺細(xì)胞，對(duì)其生物學(xué)特性知之甚少。同時(shí)，干細(xì)胞可以定向分化為并構(gòu)建具有覆蓋保護(hù)能力的表皮層組織；也有研究表明干細(xì)胞可以定向分化為具有汗腺細(xì)胞表型的汗腺樣細(xì)胞，但是對(duì)于汗腺組織的功能性重建還未見報(bào)道，且干細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞的具體機(jī)制尚待探討。本研究皆在建立人外泌汗腺細(xì)胞體外分離和培養(yǎng)方法，并分析其生物學(xué)特性，在此基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建人汗腺細(xì)胞來源的IPS細(xì)胞，根據(jù)IPS細(xì)胞具有來源細(xì)胞的記憶性這一特性，開展汗腺細(xì)胞來源的IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞的研究，探討其分化的關(guān)鍵分子機(jī)制，為其他類型干細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞提供理論基礎(chǔ)，使汗腺的功能性重建和功能性皮膚修復(fù)成為可能，提高大面積燒傷病人救治后的臨床療效，具有研究的創(chuàng)新性和潛在的應(yīng)用價(jià)值。第一部分人外泌汗腺細(xì)胞體外分離和培養(yǎng)及其生物學(xué)特性的鑒定。目的建立體外分離、提取、培養(yǎng)和純化人外泌汗腺細(xì)胞的方法，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。方法將人皮膚樣本除去脂肪和結(jié)締組織，剪成1MM2的小塊，用分散酶于4℃消化18小時(shí)，第二天取出后用PBS漂洗。用鑷子將真皮層與表皮層輕輕分離，真皮層用剪刀剪碎，加入IV型膠原酶于37℃消化1小時(shí)，然后在倒置顯微鏡下使用移液槍將游離的汗腺組織吸出。在6CM的培養(yǎng)皿中先預(yù)先鋪一層鼠尾膠原，將汗腺貼于預(yù)鋪了膠原的6CM細(xì)胞培養(yǎng)皿中，一個(gè)小時(shí)后加入汗腺細(xì)胞培養(yǎng)基，于37℃、5CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。23D后，汗腺細(xì)胞從汗腺組織中長(zhǎng)出。倒置顯微鏡觀察人外泌汗腺細(xì)胞形態(tài)；免疫組化方法對(duì)比不同部位來源皮膚汗腺數(shù)量的多少；透射電鏡觀察皮膚樣本汗腺細(xì)胞的細(xì)胞器結(jié)構(gòu)；PCR分析汗腺細(xì)胞胚胎干細(xì)胞標(biāo)記和角質(zhì)化細(xì)胞標(biāo)記；免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)體外培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞的標(biāo)志基因CEA和其他角蛋白K14、K8和K18的表達(dá)。結(jié)果（1）光學(xué)倒置顯微鏡下觀察人外泌汗腺，游離出來的汗腺組織可以觀察到盤曲成球的分泌部和較直的導(dǎo)管部；貼壁培養(yǎng)后可見汗腺上皮細(xì)胞從汗腺組織中生長(zhǎng)出來，呈典型的上皮細(xì)胞樣，排列緊密，類似鋪石路狀，細(xì)胞邊界明顯，核清晰，具有一定的增殖能力；（2）免疫組化結(jié)果顯示，成人手掌部、成人頭頸部和成人胸腹部的皮膚處存在的汗腺數(shù)量較少，而手術(shù)切除的嬰幼兒多指樣本皮膚中存在有大量的汗腺；（3）透射電鏡結(jié)果顯示，皮膚中汗腺導(dǎo)管處由兩層細(xì)胞構(gòu)成，且存在有張力原纖維，汗腺腺體分泌部由兩類細(xì)胞構(gòu)成，分別是構(gòu)成管腔的細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞；（4）PCR結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞，不表達(dá)胚胎干細(xì)胞的干性指標(biāo)OCT4、SOX2和NANOG，表達(dá)增殖相關(guān)基因KLF4和CMYC，表達(dá)汗腺特異性指標(biāo)CEA，表達(dá)上皮細(xì)胞指標(biāo)K14、K8、K18和K19；（5）免疫熒光染色結(jié)果顯示，體外分離培養(yǎng)的人汗腺細(xì)胞表達(dá)汗腺特異性指標(biāo)CEA，表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)記K14、K8和K18。結(jié)論成功從手術(shù)切除的嬰幼兒皮膚樣本中分離提取出大量的汗腺組織，滿足實(shí)驗(yàn)研究的需要；體外分離培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞具有一定的增殖能力，能傳代培養(yǎng)23代；對(duì)體外培養(yǎng)的汗腺細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定，表達(dá)汗腺特異性指標(biāo)CEA，表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)記K14、K8和K18具有上皮細(xì)胞的特性，為進(jìn)一步研究汗腺細(xì)胞奠定基礎(chǔ)。第二部分人外泌汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞的構(gòu)建以及定向分化為汗腺樣細(xì)胞的研究目的構(gòu)建人外泌汗腺細(xì)胞來源的IPS細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定；定向誘導(dǎo)人外泌汗腺細(xì)胞來源的IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性及功能性進(jìn)行鑒定。方法取體外培養(yǎng)10天后的汗腺細(xì)胞，以1105個(gè)皿的密度接種于6CM細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加入4種含有胚胎干細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子基因OCT4、SOX2、KLF4和CMYC的慢病毒，24小時(shí)后移除含有慢病毒的培養(yǎng)基，PBS沖洗，加入新鮮的汗腺細(xì)胞完全培養(yǎng)基；23天后，消化細(xì)胞接種到鋪有滋養(yǎng)層細(xì)胞的6CM細(xì)胞培養(yǎng)皿中，更換胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)約10天后，挑選克隆和細(xì)胞形態(tài)與胚胎干細(xì)胞相似的克隆，接種于鋪有滋養(yǎng)層細(xì)胞的24孔板中。培養(yǎng)約10天后，再次挑選克隆和細(xì)胞形態(tài)與胚胎干細(xì)胞相似的克隆，接種于鋪有滋養(yǎng)層細(xì)胞的6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；RTPCR，免疫熒光染色檢測(cè)誘導(dǎo)后的細(xì)胞生物學(xué)特性；細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)計(jì)數(shù)分析汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞的增殖能力；體外培養(yǎng)的人汗腺細(xì)胞經(jīng)過57天的培養(yǎng)，更換培養(yǎng)基為KGM2培養(yǎng)基，收集培養(yǎng)過人汗腺細(xì)胞的KGM2培養(yǎng)基，用022ΜM的濾器過濾，收集到的培養(yǎng)基為CM；取穩(wěn)定培養(yǎng)的人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞，以2105個(gè)孔的密度接種于6孔板中，24小時(shí)后，待IPS細(xì)胞貼壁后，添加汗腺細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基（SGDM，汗腺細(xì)胞培養(yǎng)基CM11，額外添加50NGMLEGF）；然后每天更換培養(yǎng)汗腺細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基；待誘導(dǎo)后的細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合率為70，對(duì)細(xì)胞消化傳代，按1傳4的比例接種細(xì)胞至新的培養(yǎng)皿中，誘導(dǎo)分化21天后得到汗腺樣細(xì)胞；光學(xué)顯微鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)；REALTIMEPCR分析其基因表達(dá)情況；流式細(xì)胞儀檢測(cè)汗腺相關(guān)蛋白表達(dá)；免疫熒光染色檢測(cè)汗腺相關(guān)蛋白表達(dá)；電鏡技術(shù)觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)；3D組織培養(yǎng)方法檢測(cè)分化后的汗腺樣細(xì)胞形成汗腺樣結(jié)構(gòu)的能力，并對(duì)形成的汗腺樣結(jié)構(gòu)進(jìn)行免疫熒光染色檢測(cè)。結(jié)果（1）光學(xué)顯微鏡下觀察構(gòu)建的人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞，呈克隆樣生長(zhǎng)，細(xì)胞邊界明顯，核質(zhì)比較高，有形成類胚體的能力，與人胚胎干細(xì)胞相似；（2）PCR結(jié)果表明人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞表達(dá)胚胎干細(xì)胞指標(biāo)OCT4、SOX2、KLF4、CMYC和NANONG，同時(shí)也表達(dá)汗腺相關(guān)指標(biāo)K14和CD24；（3）免疫熒光染色結(jié)果顯示人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞表達(dá)胚胎干細(xì)胞標(biāo)志物OCT4、SOX2、NANOG、SSEA3、SSEA4、TRA160和TRA181；（4）細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果表明人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞具有良好的增殖能力；（5）光學(xué)顯微鏡下觀察，由汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到的汗腺樣細(xì)胞，細(xì)胞變大，成上皮細(xì)胞樣生長(zhǎng)，核質(zhì)比變?。欢撕瓜偌?xì)胞，細(xì)胞較大，具有明顯的上皮細(xì)胞形態(tài)，呈鋪路石狀生長(zhǎng)，細(xì)胞排列整齊。（6）REALTIMEPCR結(jié)果顯示，汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞在誘導(dǎo)的過程中，在MRNA水平上逐漸表達(dá)汗腺細(xì)胞指標(biāo)EDA、EDAR、K8和CEA，且在分化的過程中逐漸接近汗腺細(xì)胞。（7）流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)汗腺相關(guān)指標(biāo)EDA大約63，EDAR大約65，K8大約76，CEA大約56。（8）透射電鏡結(jié)果表明，誘導(dǎo)后得到的汗腺樣細(xì)胞具有人汗腺細(xì)胞有的微絨毛，而汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞則沒有微絨毛；（9）3D組織培養(yǎng)結(jié)果顯示，汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞誘導(dǎo)分化的汗腺樣細(xì)胞能夠在膠中形成汗腺管狀結(jié)構(gòu)，可見管狀結(jié)構(gòu)橫截面以及管腔，可觀察到誘導(dǎo)后的汗腺樣細(xì)胞在膠中形成管腔的過程，汗腺樣細(xì)胞在膠中增殖成團(tuán)，中間的細(xì)胞逐漸凋亡，形成管腔；（10）免疫熒光染色的結(jié)果表明，汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞誘導(dǎo)分化的汗腺樣細(xì)胞在膠中形成的汗腺樣結(jié)構(gòu)表達(dá)部分汗腺相關(guān)基因。結(jié)論利用IPS技術(shù)成功構(gòu)建人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了檢測(cè)分析，與人胚胎干細(xì)胞相似；定向誘導(dǎo)人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡、REALTIMEPCR、免疫熒光染色、透射電鏡及3D組織培養(yǎng)結(jié)果顯示，人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞能分化為汗腺樣細(xì)胞，并且具有形成汗腺樣結(jié)構(gòu)的能力。第三部分干細(xì)胞汗腺分化機(jī)制的探討目的在建立使用條件培養(yǎng)基（CONDITIONMEDIA，CM）可誘導(dǎo)人汗腺來源IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞的基礎(chǔ)上，分析CM中可能起關(guān)鍵作用的分子，為干細(xì)胞汗腺分化尋找合適的培養(yǎng)體系，為研究干細(xì)胞汗腺分化機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。方法取2104的人汗腺來源IPS細(xì)胞（SGIPS）鋪于6孔板一孔中，加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基（SGDM，汗腺細(xì)胞培養(yǎng)基CM11，額外添加50NGMLEGF），分別取誘導(dǎo)7天，14天和21天的樣本，利用REALTIMEPCR方法檢測(cè)分析不同分化時(shí)間點(diǎn)的汗腺樣細(xì)胞的基因表達(dá)情況；針對(duì)BMP4和HGF信號(hào)通路，利用REALTIMEPCR方法和免疫熒光染色的方法分析在分化過程中BMP4和HGF可能的來源，比較人汗腺細(xì)胞（SG）、人汗腺細(xì)胞培養(yǎng)中存在的成纖維細(xì)胞（SGFIB）以及SGFIB脫離SG環(huán)境培養(yǎng)2周的成纖維細(xì)胞（FIB）；WESTERNBLOT和ELISA檢測(cè)CM中HGF和BMP4的存在；在SGIPS分化到汗腺樣細(xì)胞的過程中，加入HGF和BMP4拮抗劑，分化21天后REALTIMEPCR方法檢測(cè)汗腺相關(guān)基因的表達(dá)；在SGIPS分化到汗腺樣細(xì)胞的過程中額外添加HGF和BMP4，分化21天后REALTIMEPCR方法檢測(cè)汗腺相關(guān)基因的表達(dá)；結(jié)果（1）REALTIMEPCR方法檢測(cè)結(jié)果顯示，汗腺相關(guān)基因EDA、EDAR和LEF1的表達(dá)在分化過程中呈上升趨勢(shì)，在第14天達(dá)到峰值，分化21天后表達(dá)水平接近正常汗腺細(xì)胞，說明EDA，EDAR和LEFT1在汗腺分化過程中發(fā)揮一定作用；進(jìn)一步檢測(cè)其上游基因表達(dá)，包括MAPK通路和WNT通路中相關(guān)基因，發(fā)現(xiàn)ERK和ΒCATENIN的表達(dá)呈現(xiàn)相關(guān)性。BMP4，HGF，F(xiàn)GF10是胞外與MAPK和WNT通路有相關(guān)作用的分子，檢測(cè)其受體在細(xì)胞膜上的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BMP4受體BMPR1和BMPR2及HGF受體HGFR在分化過程中均有表達(dá)，而FGF10受體FGFR2則沒有表達(dá)；REALTIMEPCR方法檢測(cè)BMP4和HGF在分化過程中的來源結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在細(xì)胞中，BMP4主要由汗腺細(xì)胞來源的成纖維細(xì)胞分泌，汗腺細(xì)胞也有不同程度的分泌，而HGF則主要由汗腺來源的成纖維細(xì)胞分泌，免疫熒光染色的結(jié)果也證明了這一結(jié)果；在汗腺來源CM中，WESTERNBLOT和ELISA結(jié)果顯示HGF和BMP4均有存在，這說明在CM中存在對(duì)汗腺分化具有作用的HGF和BMP4；（2）在分化過程中加入BMP4和HGF拮抗劑后，汗腺相關(guān)基因EDA、EDAR、CEA和K8均有不同程度的下降，加入HGF拮抗劑的基因表達(dá)下降的比加入BMP4拮抗劑的明顯；在分化過程中額外加入BMP4和HGF重組蛋白取代CM中可能存在的未知分子，汗腺相關(guān)基因EDA、EDAR、CEA和K8表現(xiàn)出一定的相關(guān)性，但還不如汗腺誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)的效果明顯。結(jié)論由人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞的過程中，從CM中尋找到兩個(gè)相關(guān)因子，HGF和BMP4在人汗腺來源IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞中起關(guān)鍵作用，得出兩條可能的汗腺分化的作用途徑HGF和BMP4通路。HGF與細(xì)胞膜上的受體CMET結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞基質(zhì)中ΒCATENIN表達(dá)上升，ΒCATENIN進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與LEF1作用，激活EDAEDAR信號(hào)通路，從而啟動(dòng)汗腺分化；BMP4與細(xì)胞膜上的受體BMPR1和BMPR2結(jié)合，激活MAPK通路中的其中一條ERK通路，隨后ERK與細(xì)胞核中的LEF1作用激活EDAEDAR信號(hào)通路，從而啟動(dòng)汗腺分化。綜上所述，本課題成功分離提取了人外泌汗腺，建立了體外培養(yǎng)人外泌汗腺細(xì)胞的方法，并用體外培養(yǎng)的人外泌汗腺細(xì)胞成功構(gòu)建的人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了鑒定，并在此基礎(chǔ)上定向誘導(dǎo)人汗腺細(xì)胞來源IPS細(xì)胞分化為汗腺樣細(xì)胞，對(duì)得到的汗腺樣細(xì)胞進(jìn)行了生物學(xué)特性及功能性鑒定，在誘導(dǎo)分化的過程中尋找到了兩個(gè)可能的關(guān)鍵分子HGF和BMP4，建立了合適的干細(xì)胞汗腺分化培養(yǎng)體系，不僅為研究干細(xì)胞汗腺分化機(jī)制的研究提供有價(jià)值的理論依據(jù)，也為汗腺的功能性重建開拓新的途徑，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

簡(jiǎn)介：納米纖維能夠有效模仿細(xì)胞外基質(zhì)，提供適合的接觸引導(dǎo)來幫助神經(jīng)細(xì)胞分化和神經(jīng)突觸生長(zhǎng)，因此成為神經(jīng)組織工程常用的生物材料。為在神經(jīng)組織工程中進(jìn)一步應(yīng)用定向納米纖維，設(shè)計(jì)新的納米纖維材料表面，全面深入地闡釋定向納米纖維影響神經(jīng)細(xì)胞分化的分子機(jī)理，需要了解這個(gè)過程中所有基因、MRNA、蛋白質(zhì)、代謝物的差異表達(dá)以及組分相互間的關(guān)系。近年出現(xiàn)的高通量技術(shù)和系統(tǒng)生物學(xué)方法為從RNA、蛋白質(zhì)、代謝物等層次，全而系統(tǒng)地了解生物材料對(duì)細(xì)胞的影響和深入研究分子機(jī)理提供了強(qiáng)有力的技術(shù)方法支持。本論文的目的是綜合運(yùn)用代謝組學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)方法，研究左旋聚乳酸定向不定向納米纖維對(duì)PC12細(xì)胞內(nèi)代謝物表達(dá)的影響，在代謝層次揭示旋聚乳酸定向不定向納米纖維對(duì)PC12細(xì)胞的影響。隨后與本課題組前期的研究結(jié)果（轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)）進(jìn)行聯(lián)合分析，從系統(tǒng)生物學(xué)的角度闡釋PLLA定向納米纖維影響PC12細(xì)胞分化的機(jī)理。本論文的具體工作如下1、采用靜電紡絲法制備左旋聚乳酸PLLA定向不定向納米纖維，采用勻膠法制備PLLA薄膜。對(duì)三種材料進(jìn)行了掃描電子顯微鏡SEM觀察。結(jié)果表明，PLLA薄膜表面比較平滑，PLLA定向不定向納米纖維粗細(xì)均一且無串珠，纖維直徑分別為27958±667NM和24502±793NM，定向納米纖維具有較好的取向性2、將預(yù)分化48H的PC12細(xì)胞分別種植在PLLA定向納米纖維（實(shí)驗(yàn)組1，簡(jiǎn)稱AF組）、PLLA不定向納米纖維（實(shí)驗(yàn)組2，簡(jiǎn)稱RF組）和PLLA薄膜（對(duì)照組，簡(jiǎn)稱C組）上12H、24H和36H，搜集細(xì)胞樣本用于代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)，一共六個(gè)實(shí)驗(yàn)組AF組的三個(gè)間分別簡(jiǎn)稱為A12、A24和A36，RF組的分別簡(jiǎn)稱為R12、R24和R36，三個(gè)對(duì)照組（分別簡(jiǎn)稱為C12、C24和C36），每組106～107個(gè)細(xì)胞樣本N53、采用基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的代謝組學(xué)研究手段，分別分析了PC12細(xì)胞種植在左旋聚乳酸的三種表面（定向納米纖維表面、不定向納米纖維表面和薄膜表面）12H、24H和36H后，細(xì)胞內(nèi)代謝物的表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定性分析，得到六個(gè)實(shí)驗(yàn)組和三個(gè)對(duì)照組的代謝物表達(dá)譜峰圖。使用主成分分析法和最小二乘判別分析法結(jié)合T檢驗(yàn)，篩選得到相對(duì)于對(duì)照組差異表達(dá)的代謝物，相對(duì)于C12組，A12組和R12組差異表達(dá)的代謝物數(shù)目分別為53種和54種，相對(duì)于C24組，A24組和R24組差異表達(dá)的代謝物數(shù)目分別為50種和47種，相對(duì)于C36組，A36組和R36組差異表達(dá)的代謝物數(shù)目分別為32種和42種4、采用生物信息學(xué)方法對(duì)差異表達(dá)代謝物進(jìn)行了聚類分析和METPA分析，發(fā)現(xiàn)在PLLA定向和不定向納米纖維這兩種表面上培養(yǎng)了12H的細(xì)胞內(nèi)代謝物表達(dá)情況與培養(yǎng)了24H和36H的細(xì)胞內(nèi)代謝物表達(dá)情況差別較大，對(duì)AF組和RF組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均差異表達(dá)的代謝物進(jìn)行通路分析，得到的通路中，AF組與RF組共有的通路苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，苯丙氨酸代謝，組氨酸代謝以及AF組有而RF組沒有的花生四烯酸代謝和牛磺酸，亞牛磺酸代謝通路與神經(jīng)細(xì)胞的分化相關(guān)5、對(duì)所得的代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和課題組前期得到的轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合分析，得到種植在PLLA定向納米纖維表面的PC12細(xì)胞內(nèi)基因、蛋白質(zhì)和代謝物的差異表達(dá)引起的通路有11條，而PLLA不定向納米纖維表面的PC12細(xì)胞內(nèi)基因、蛋白質(zhì)和代謝物的差異表達(dá)引起的通路有7條。在這些通路中，AF組與RF組共有的通路酪氨酸通路和AF組有而RF組沒有的鞘脂類代謝和甘油磷脂代謝通路與分化相關(guān)，從氨基酸代謝和脂質(zhì)代謝兩個(gè)部分對(duì)PLLA影響PC12細(xì)胞的分化機(jī)理進(jìn)行討論發(fā)現(xiàn)，基因LAO1的下調(diào)表達(dá)導(dǎo)致了苯丙氨酸的下調(diào)表達(dá)，加之與酪氨酸分解相關(guān)的蛋白質(zhì)GSTZ1上調(diào)表達(dá)，導(dǎo)致酪氨酸下調(diào)表達(dá)?；駻OC3上調(diào)表達(dá)與基因ALDH3A1下調(diào)表達(dá)的共同作用下，多巴胺上調(diào)表達(dá)?；駻LDH3A1的下調(diào)表達(dá)導(dǎo)致去甲變腎上腺素的上調(diào)表達(dá)?；騊LA2G4B上調(diào)表達(dá)導(dǎo)致磷脂酶的上調(diào)表達(dá)，促進(jìn)了溶血磷脂和花生四烯酸的釋放，因此能夠分泌更多神經(jīng)遞質(zhì)。因此PLLA定向納米纖維表面的PC12細(xì)胞內(nèi)部，不利于神經(jīng)細(xì)胞分化的苯丙氨酸及其代謝物下調(diào)表達(dá)，有利于神經(jīng)細(xì)胞分化的花生四烯酸、多巴胺等上調(diào)表達(dá)，充分說明PLLA定向納米纖維有利于PC12細(xì)胞的分化。

簡(jiǎn)介：及其小孢子萌發(fā)特性研究BIOLOGICALCHARACERISTICSOFTHEMICROCONLDIAMASSFORMINGSTRAINSOF11CZE冠DZ藝FⅥ■5匯ZE足D礬舊皿【脅，ANDTHEGERMINATIONCHARACTEROFMICROCONIDIA研究生張重梅指導(dǎo)教師姜道宏教授指導(dǎo)小組付艷蘋副教授李國(guó)慶教授黃俊斌教授程家森副教授董五輩教授羅朝喜教授專業(yè)植物病理學(xué)研究方向分子植物病理學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士獲得學(xué)位時(shí)間2011年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院二。一一年六月華中農(nóng)、J眨人學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書薹蕓篡姜一吾’；如。霈保密，解密時(shí)間年月弱’。；獨(dú)創(chuàng)性聲明奉人聲明所曼交約論文是我令人在導(dǎo)師指導(dǎo)下避行的研究工作及取得的研究成果盡我所知。豫了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大掌或其他教宵機(jī)構(gòu)的舉位或證拓而使用過的材料，指導(dǎo)教師砑JI龜遂行了審定與霰一同工作的同志對(duì)本明究所傲的任何貢赦均已奩論文孛斂了明確的說明，并表示了掰意研究生簽名子妖重楠時(shí)問ZO∥牟彳月／D日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人究全了撰華中農(nóng)業(yè)大學(xué)爰子保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，彈學(xué)生必須按照擘校要求提交擘餃論文的固副本和電子版本學(xué)棱有權(quán)保存提交論文的印刷黷和電子版，并提供娶錄撿索和聞?dòng)[服務(wù)，可以采用影印?？s印囊掃描等復(fù)鹺手段保存，匯編學(xué)位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不弼煤體上發(fā)震傳播學(xué)位論文的奎郝或都分內(nèi)容，同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力。注保密學(xué)位論文‘印涉及技術(shù)秘密商韭秘密我申請(qǐng)專刷等潛在黌要提交保密的論文1在解密君適用于本授權(quán)書刪黼始撇捷導(dǎo)師料參重老簽’名I】期2。77善占層如轉(zhuǎn)莖名日；9仞11年白I礦日

簡(jiǎn)介：。7S‘；812易東鉀耘大學(xué)教育碩士學(xué)位論文論文題目認(rèn)知方式、教學(xué)方法對(duì)學(xué)生生物學(xué)信息處理能力影響的研究學(xué)科專業(yè)名稱教育管理申請(qǐng)人姓名張恰斌導(dǎo)師姓名李壽欣教授論文提交時(shí)間2005年04月20日沫鬣≯鬈山東師范大學(xué)碩二B學(xué)位論文中文摘要認(rèn)知方式與教育的關(guān)系的研究是教育心理學(xué)領(lǐng)域的重要課題。認(rèn)知方式是個(gè)體在組織、加工信息過程中所具有的個(gè)性化和一貫化的方式，既區(qū)別于智力因素，也區(qū)別于認(rèn)知內(nèi)容和認(rèn)知能力，沒有高低優(yōu)劣的差別。它不僅表現(xiàn)在個(gè)體的認(rèn)知過程中，也反映到個(gè)性心理特征方面，影響可以遍及人的整個(gè)心理活動(dòng)領(lǐng)域。對(duì)學(xué)生而言，不同認(rèn)知方式的個(gè)體采用不同的組織、加工信息的方式，這將影響他們對(duì)不同類型信息的處理能力，進(jìn)而影響他們的學(xué)業(yè)成績(jī)。教學(xué)方法是現(xiàn)代教學(xué)改革的一個(gè)重要的領(lǐng)域。教學(xué)方法是指在教學(xué)過程中，教師和學(xué)生為實(shí)現(xiàn)教學(xué)目的、完成教學(xué)任務(wù)而采取的教與學(xué)相互作用的活動(dòng)方式的總稱。教學(xué)方法對(duì)不同認(rèn)知方式學(xué)生的信息處理能力的影響不同，進(jìn)而對(duì)他們的學(xué)業(yè)成績(jī)的影響也不同。與認(rèn)知方式相匹配的教學(xué)方法，有利于學(xué)生信息處理能力的提高，最終有利于學(xué)生學(xué)業(yè)成績(jī)的提高。國(guó)內(nèi)還沒有關(guān)于認(rèn)知方式與生物教學(xué)關(guān)系的研究，而且關(guān)于信息處理教學(xué)方法的研究較少，因此本研究以168名高二理科學(xué)生為研究對(duì)象，以認(rèn)知方式、教學(xué)方法和生物學(xué)信息處理能力為研究?jī)?nèi)容，主要探討生物教學(xué)中，不同認(rèn)知方式對(duì)學(xué)生生物學(xué)信息處理能力的影響，不同教學(xué)方法對(duì)學(xué)生生物學(xué)信息處理能力的影響，以及認(rèn)知方式、教學(xué)方法對(duì)生物學(xué)信息處理能力影晌的交互作用，以期為改善學(xué)生生物學(xué)信息處理能力以及差異教學(xué)提供理論和實(shí)踐的依據(jù)。研究結(jié)果表明1．在本實(shí)驗(yàn)條件下，場(chǎng)獨(dú)立型學(xué)生在學(xué)習(xí)生物學(xué)方面，具有明顯的優(yōu)勢(shì)，。認(rèn)知方式對(duì)生物學(xué)焦息處理能力有明顯影響，場(chǎng)獨(dú)立型被試的生物學(xué)信息處理能力顯著地高于其他認(rèn)知方式被試。2．在本實(shí)驗(yàn)條件下，相同的教學(xué)方法對(duì)不同認(rèn)知方式被試的生物學(xué)信息處理能力的影響不同。不同教學(xué)方法對(duì)相同認(rèn)知方式被試的生物學(xué)信息處理能力的影響不同。場(chǎng)獨(dú)立型、場(chǎng)中間型被試的生物學(xué)信息處理能力在兩種教學(xué)方法條件下無顯著性差異；在信息轉(zhuǎn)換教學(xué)方法條件下，場(chǎng)依存型被試的生物學(xué)信息處理能力有極顯著提高。關(guān)鍵詞分類號(hào)認(rèn)知方式教學(xué)方法生物學(xué)信息處理能力信息轉(zhuǎn)換教學(xué)方法B844．2

簡(jiǎn)介：福建師范大學(xué)碩士學(xué)位論文多媒體技術(shù)在生物學(xué)教學(xué)中運(yùn)用的研究與實(shí)踐姓名曾慶福申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)教育學(xué)原理指導(dǎo)教師鄭鴻霖2002820ABSTRACTSINCETHE1990S，THECOMPUTERTECHNOLOGYANDTHECOMMUNICATIONTECHNOLOGY，ESPECIALLYTHEMULTIMEDIATECHNOLOGY,HAVEBEENGREATLYDEVELOPED．THEMULTIMEDIATECHNOLOGY，WITHTHEFEATUREOFBEINGAUDIOVISUAL，VIVIDANDHAVINGLARGEAMOUNTOFINFORMATION，ISMOREANDMOREPOPULARAMONGTHETEACHERSANDTHUSBECOMEONEOFTHEMAINTOOLSOFTEACHINGINMODEMSOCIETY．BASINGONTHEFEATURESOFITSELF，BIOLOGYTEACHINGWILLBEINACLOSERANDCLOSERCONNECTIONWITHTHEMULTI．MEDIATECHNOLOGYANDTHISWILLNECESSARILYLEADTOTHERENOVATIONOFBIOLOGYTEACHING．BUT，ATPRESENT，MOSTOFTHETEACHERSOFBIOLOGYDON’THAVEENOUGHCOMPUTERKNOWLEDGEANDTHUSCANNOTAPPLYFREELYTHEMULTIMEDIATECHNOLOGYTOTHETEACHINGOFBIOLOGY．THISWILLHAMPERTHEDEVELOPMENTOFBIOLOGYTEACHING．STARTINGFROMDEALINGWITHTHEAPPLICATIONOFTHEMULTI’MEDIATECHNOLOGYINBIOLOGYTEACHING，THEPAPEREXPATIATESUPONSOMERELATEDRESEARCHINORDERTOOFRERANEXAMPLEANDREFERENCE，TOENABLEPEOPLETOMAKEFULLUSEOFTHEMULTIMEDIATECHNOLOGYINBIOLOGYTEACHINGANDPROMOTETHEREFORMOFTHEBIOLOGYCLASSROOMTEACHING．KEYWORDSTHEMULTI．MEDIATECHNOLOGY，THEMULTI．MEDIATEACHING，RESEARCHPRACTICE．

簡(jiǎn)介：弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生繁殖的機(jī)會(huì)性致病病原體，可以感染包括人在內(nèi)的幾乎所有的溫血?jiǎng)游?，?yán)重威脅人類及動(dòng)物健康。正常人感染弓形蟲后，大多數(shù)不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，呈隱性感染狀態(tài)，但對(duì)嬰兒或機(jī)體免疫力低下或免疫抑制時(shí)（AIDS、骨髓移植、器官移植等）可表現(xiàn)出嚴(yán)重的臨床癥狀，甚至可以引起死亡。妊娠期母畜感染該病，?？梢鹆鳟a(chǎn)，死產(chǎn)，木乃伊胎以及其它一些嚴(yán)重的臨床癥狀，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失目前，對(duì)于弓形蟲病的防治仍以預(yù)防為主，無特效藥物。因此，研發(fā)切實(shí)有效的疫苗是防治的關(guān)鍵。IMP1蛋白是2011年剛發(fā)現(xiàn)的蛋白，被認(rèn)為在弓形蟲病疫苗開發(fā)方面具有重要潛力本研究通過分子生物學(xué)、基因工程學(xué)、免疫生物學(xué)等方法對(duì)弓形蟲IMP1的表達(dá)特性及免疫原性進(jìn)行研究，探討IMP1及其相關(guān)蛋白的功能，為弓形蟲病防控提供新的思路與方法1浙江省動(dòng)物弓形蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查為了解浙江省動(dòng)物弓形蟲病的流行現(xiàn)狀，更好地為弓形蟲病的防治提供科學(xué)的依據(jù)，本項(xiàng)目組成員采集了來自浙江省十一地市的813份豬血清、70份奶牛血清、151份山羊血清、213份犬血清及60份貓血清樣品，進(jìn)行了弓形蟲病的血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，豬的感染率最高，平均血清陽性率高達(dá)534％，其次為犬160％，貓133％及山羊27％在對(duì)70份奶牛的血清進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，未有陽性樣品檢出對(duì)采樣背景較為詳細(xì)的豬、犬、貓樣品的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示，該病的血清陽性率隨動(dòng)物的年齡增長(zhǎng)而顯著性升高弓形蟲血清陽性率與飼養(yǎng)環(huán)境、動(dòng)物品種等相關(guān)本試驗(yàn)首次對(duì)浙江省豬、奶牛、山羊、犬、貓弓形蟲血清陽性率進(jìn)行較為詳細(xì)的調(diào)查，調(diào)查結(jié)果顯示浙江省動(dòng)物特別是豬的弓形蟲感染較為嚴(yán)重，鑒于目前尚無有效的疫苗用于該病的治療，因此制定合理的方案控制該病的傳播在浙江省動(dòng)物弓形蟲的防控方面具有重要意義2基于SAG1基因弓形蟲熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立熒光定量PCR因其高效敏感的特性在各種病原的檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用，然而其檢測(cè)效果與所選擇的目的基因密切相關(guān)本研究根據(jù)GENBANK上公布的弓形蟲RH株SAG1又稱P30基因X14080保守區(qū)域序列設(shè)計(jì)特異性引物，采用SYBRRGREENⅠ熒光染料法建立弓形蟲的熒光定量PCR檢測(cè)體系與傳統(tǒng)的PCR方法相比，該方法表現(xiàn)出更高的敏感性，最低可以檢測(cè)到一個(gè)弓形蟲速殖子對(duì)人工感染小鼠的不同組織進(jìn)行檢測(cè)，1天后各樣品即可被檢出（血液25％、脾臟50％、肺臟50％）本方法特異性好，與新孢子蟲、大腸桿菌、牛巴貝斯蟲、布氏錐蟲、隱孢子蟲、犬弓首蛔蟲DNA均無交叉反應(yīng)用建立的方法對(duì)臨床181份豬血進(jìn)行檢測(cè)，有11份樣品檢測(cè)結(jié)果為陽性，比普通PCR的9份表現(xiàn)出更高的敏感性研究結(jié)果表明，基于SAG1基因建立了一種可靠的弓形蟲SYBRRGREENⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法，該方法的建立可為弓形蟲病理學(xué)、免疫學(xué)及治療方面的研究提供重要的技術(shù)支持3弓形蟲IMP1的表達(dá)特性研究弓形蟲IMP1是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的蛋白，在雞球蟲、犬新孢子蟲中都有高度保守的同源序列，本研究通過基因克隆技術(shù)用弓形蟲RH株為模板成功獲得了弓形蟲IMP1序列，將所擴(kuò)增基因與GENBANK上公布的弓形蟲ME49株XM_0023701082E36的序列進(jìn)行相似性分析比較，分別在114AG與342TC處各有一個(gè)突變，序列相似性為998％，但對(duì)編碼氨基酸無影響對(duì)所獲得的序列進(jìn)行原核表達(dá)、純化，制備了兔源多克隆抗體通過間接免疫熒光技術(shù)進(jìn)一步對(duì)速殖子不同時(shí)期該蛋白的表達(dá)特性進(jìn)行研究研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在游離、吸附于細(xì)胞表面、入侵中、入侵后及納蟲空泡中的速殖子IMP1均有表達(dá)，均被定位于蟲體表面，且在有些蟲體的頂端表達(dá)更為強(qiáng)烈該研究為進(jìn)一步闡明IMP1的功能奠定了基礎(chǔ)4弓形蟲二價(jià)重組亞單位疫苗RSAG1IMP1的免疫原性研究利用分子生物學(xué)技術(shù)分別構(gòu)建BL21PET30AIMP1及BL21PET30ASAG1IMP1原核表達(dá)系統(tǒng)，IPTG誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)用純化后的重組蛋白免疫ICR小鼠，探討弓形蟲重組蛋白R(shí)SAG1IMP1的免疫效果按照每只小鼠100ΜG融合蛋白的劑量進(jìn)行首免，2周后按照每只小鼠50ΜG融合蛋白的劑量進(jìn)行二免，二免后兩周再加強(qiáng)免疫一次分別于免疫前和首免后每2周小鼠眼眶采血分離血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，持續(xù)至三免后4周三免后2周取脾臟，進(jìn)行淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)和細(xì)胞因子檢測(cè)三免后兩周用新鮮傳代的弓形蟲按500個(gè)速殖子只的劑量攻毒，評(píng)價(jià)其免疫保護(hù)效果。結(jié)果表明各重組蛋白均能顯著提高機(jī)體對(duì)融合蛋白的免疫應(yīng)答水平和淋巴細(xì)胞的增殖水平P＜005蛋白免疫組首免后4周抗體水平開始顯著上升，首免后6周即可達(dá)到較高水平其中二價(jià)亞單位疫苗RSAG1IMP1的抗體水平要顯著高于單價(jià)亞單位疫苗RIMP1和SAG1P＜005免疫后機(jī)體IGG1、IGG2A、IL4、INFΓ水平均有所上升，但I(xiàn)GG1、IL4更為明顯攻蟲試驗(yàn)表明各蛋白免疫組均能顯著延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間，弓形蟲重組二價(jià)亞單位疫苗RSAG1IMP1較單價(jià)亞單位疫苗具有更好的免疫效果5減毒沙門氏菌為載體傳遞弓形蟲IMP1基因的免疫原性研究研究利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建了攜帶有弓形蟲IMP1基因的減毒沙門氏菌活載體核酸疫苗ZJ111PCDNA31IMP1、ZJ111PCDNA31SAG1IMP1將構(gòu)建的活載體核酸疫苗與空載減毒沙門氏菌ZJ111PCDNA31免疫ICR小鼠，分別通過抗體水平檢測(cè)、抗體亞類檢測(cè)、淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞因子檢測(cè)以及攻蟲試驗(yàn)等，探討減毒沙門氏菌活載體核酸疫苗ZJ111PCDNA31IMP1、ZJ111PCDNA31SAG1IMP1的免疫效果結(jié)果表明減毒沙門氏菌活載體核酸疫苗ZJ111PCDNA31IMP1、ZJ111PCDNA31SAG1IMP1具有良好的免疫原性，可以誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的體液及細(xì)胞免疫應(yīng)答，顯著提高機(jī)體INFΓ的分泌及IGG2A水平P＜005，對(duì)小鼠抵抗弓形蟲感染具有一定的免疫保護(hù)效果，可顯著延長(zhǎng)小鼠的存活時(shí)間P＜005而且二價(jià)核酸疫苗ZJ111PCDNA31SAG1IMP1的免疫保護(hù)效果要顯著的好于單價(jià)核酸疫苗ZJ111PCDNA31IMP1綜上，本研究基于SAG1基因建立了一種可靠的弓形蟲SYBRRGREENⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法，首次對(duì)浙江省豬、奶牛、山羊、犬、貓弓形蟲血清陽性率進(jìn)行較為詳細(xì)的調(diào)查，通過制備IMP1多克隆抗體，應(yīng)用間接免疫熒光技術(shù)對(duì)弓形蟲速殖子感染不同階段的IMP1蛋白的表達(dá)特性進(jìn)行了研究，構(gòu)建了弓形蟲二價(jià)重組亞單位疫苗RSAG1IMP1及減毒沙門氏菌活載體核酸疫苗ZJ111PCDNA31IMP1、ZJ111PCDNA31SAG1IMP1，并通過體液免疫和細(xì)胞免疫水平及小鼠攻蟲試驗(yàn)等分析弓形蟲IMP1蛋白作為疫苗的可能性及其前景，研究結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)弓形蟲病疫苗奠定了良好的基礎(chǔ)

簡(jiǎn)介：論文答辯日期閉冬玲2盟L逝12窆學(xué)位授予日期2011．6．30學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人完全了解廣西大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即本人保證不以其它單位為第一署名單位發(fā)表或使用本論文的研究?jī)?nèi)容；按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝?、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；在不以贏利為目的的前提下，學(xué)?？梢怨颊撐牡牟糠只蛉?jī)?nèi)容。請(qǐng)選擇發(fā)布口解密后發(fā)布保密論文需注明，并在解密后遵守此規(guī)定論文作者簽名．I司毒絕導(dǎo)師簽名彥氧哆擄文州年6月≯日

簡(jiǎn)介：THECREATINGANDBIOLOGICALPROPERTYRESEARCHOFHIGHQUALITYANDLATEBOLTINGTETRAPLOIDNONHEADINGCHINESECABBAGEBYHUQIUWENSUPERVISEDBYASSOCIATEPROFESSORZHANGSHUNINGTHETHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORMASTERDEGREEOFAGRICULTURESCIENCESCOMPLETEDINAPRIL，2015COMMENCEMENTINMAY2015目錄目錄摘要IABSTRACTIII縮略詞表VII引言Ⅸ第一部分文獻(xiàn)綜述1第一章植物多倍體育種研究進(jìn)展11多倍體的產(chǎn)生途徑L11自然界的天然植物多倍體一1111體細(xì)胞染色體加倍2112未減數(shù)的配子結(jié)合2113多精受精212人工誘導(dǎo)多倍體產(chǎn)生。2121物理方法誘導(dǎo)多倍體3122化學(xué)方法誘導(dǎo)多倍體3123生物方法誘導(dǎo)多倍體32多倍體植物的鑒定421染色體數(shù)目鑒定422生物學(xué)特性鑒定4221植株形態(tài)和花器官鑒定4222種子和結(jié)實(shí)率鑒定423解剖學(xué)特性鑒定524生理生化特性鑒定525分子生物學(xué)特性鑒定6251流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞DNA含量6252分子標(biāo)記方法鑒定6253同工酶鑒定63多倍體植物的應(yīng)用631克服植物遠(yuǎn)緣雜交不孕性632克服遠(yuǎn)緣雜種不實(shí)性6

簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明秉承學(xué)校嚴(yán)謹(jǐn)?shù)男ｏL(fēng)和科研作風(fēng)，本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名L雌日期J型必第三軍醫(yī)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解第三軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬第三軍醫(yī)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為第三軍醫(yī)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名握生指導(dǎo)教師簽名么三毛日期≯匿；；L5第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文英文縮寫ESCCEAENCODEE2FRBCDKDDR1，一H2XPCREDNAGAPDHCHIPCCK8PBSPMSFSDSTBSDDH20TEMEDAPSDMSOPAGEPIMIRNAS3’UTRSIRNANC縮略語表英文全稱ESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMAESOPHAGEALADENOCARCINOMAENCYCLOPEDIAOFDNAELEMENTSE2一PROMOTERBINDINGFACTORRETINOBLASTOMACYCLINDEPENDENTKINASEDNADAMAGERESPONSEPHOSPHORYLATEDHISTONE2AXPOLYMERASECHAINREACTIONCOMPLIMENTAREOXYRIBONUCLEICACIDGLYCERALDEHYDE3PHOSPHATEDEHYDROGENASECHROMATINIMMUNOPRECIPITATIONCELLCOUNTINGKIT8PHOSPHATEBUFFEREDSALINEPHENYLMETHANESULFONYLFLUORIDEDODECYLSULFATESODIUMSALTTRISBUFFEREDSALINEDOUBLEDISTILLEDH20N，N，N’，NTETRAMETHYLETHYLENEDIAMINEAMMONIUMPERSULFATEDIMETHYLSULFOXIDEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHRESISPROPIDIUMIODIDEMICRORNAS3’UNTRANSLATEDREGIONSMALLINTERFERINGRNANEGATIVECONTROL中文全稱食管鱗狀細(xì)胞癌食管腺癌DNA元素百科全書E2啟動(dòng)子結(jié)合細(xì)胞因子視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤CYCLIN依賴激酶DNA損傷反應(yīng)磷酸化組蛋白2AX聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)互補(bǔ)DNA甘油醛3磷酸脫氫酶染色質(zhì)免疫共沉淀細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8磷酸鹽緩沖液苯甲基磺酰氟十二烷基硫酸鈉三羥甲基氨基甲烷緩沖液雙蒸水N，N，N’，N’四甲基乙二胺過硫酸銨二甲基亞砜聚丙烯酰胺凝膠電泳碘化丙啶微小RNA3’非翻譯區(qū)小干擾RNA陰性對(duì)照

簡(jiǎn)介：|||IL川||I|1㈨Y3393306密級(jí)論文編號(hào)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文茶尺蠖兩近緣種的生物學(xué)特性差異和分布研究SMDYONDIFFERENCIALBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDGEOGRAPHICALDISTRIBUTIONOFTHESIBLINGPESTS，F(xiàn)仰婦GR括甜CP即SAND五K唧如OBLIQLL僅碩士研究生白家赫指導(dǎo)教師肖強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位類別農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)茶學(xué)研究方向茶園有害生物綜合治理培養(yǎng)單位茶葉研究所研究生院2018年5月SECRECYNOCHINESEACADEMYOFAGRICULTURALSCIENCESDISSERTATIONSTUDYONDIFFERENCIALBI0109ICALCHARACTERISTICSANDGEO鏟APHICALDIS訂IBUTIONOFTHESIBLINGPESTS，眈飆矽括GRISESCENSA以ECT唧ISOBLIQ銳CIMSCANDIDATEBAIJIAHESUPERVISORPROFXIAOQIANGMAJORTEASCIENCESPECIA塒INTEGRATEDPESTMANAGEMENTOFTEAMAY2018

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