簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV感染在臨床上可呈現(xiàn)不同的疾病狀態(tài)包括無(wú)癥狀攜帶、急性肝炎、慢性肝炎、重型肝炎、肝硬化等與肝癌的發(fā)生也密切相關(guān)。雖然安全有效的預(yù)防性乙肝疫苗廣泛應(yīng)用已使HBSAG攜帶率顯著下降但對(duì)現(xiàn)癥慢乙肝的治療仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。當(dāng)前慢乙肝治療目標(biāo)為最大限度地長(zhǎng)期抑制或消除乙肝病毒延緩和阻止疾病進(jìn)展減少和防止肝臟并發(fā)癥的發(fā)生。核苷酸類似物類抗病毒藥物如拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋及替比夫定通過(guò)作用于HBV的RT區(qū)而發(fā)揮抗病毒作用可顯著抑制HBV的復(fù)制、恢復(fù)患者的肝功能、改善肝組織學(xué)部分患者可發(fā)生NBEAG的血清轉(zhuǎn)換。但要鞏固以上療效需長(zhǎng)期維持治療。不幸的是治療時(shí)間的延長(zhǎng)可導(dǎo)致HBV耐藥株的出現(xiàn)在臨床上引起治療失敗和疾病進(jìn)展。表型耐藥分析通過(guò)體外研究HBV對(duì)藥物的敏感性一方面可以為已發(fā)生耐藥的患者提供更為合理的治療方案另一方面也可以通過(guò)臨床分離株評(píng)估新藥的療效。迄今為止并沒(méi)有一種合適的表型耐藥分析方法。本研究第一部分建立了一種新的表型耐藥分析方法通過(guò)置換病毒逆轉(zhuǎn)錄酶REVERSETRANASERT區(qū)段進(jìn)而研究RT區(qū)突變對(duì)核苷酸類似物類藥物敏感性的影響。第二部分對(duì)阿德福韋耐藥HBV毒株的部分生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。第一部分新的HBV表型耐藥分析方法的建立目的建立一種新的、簡(jiǎn)便的表型耐藥分析方法通過(guò)置換HBV耐藥毒株的RT區(qū)來(lái)研究RT區(qū)變異對(duì)于藥物敏感性的影響。方法構(gòu)建包含野毒株HBV全基因組的真核表達(dá)質(zhì)粒PHY536207B基因型及PHY97C基因型。自GENBANK下載B及C基因型HBV全基因組序列各200條對(duì)其RT區(qū)序列進(jìn)行比對(duì)在RT區(qū)上下游查找或人工引入酶切位點(diǎn)以便能將完整的RT區(qū)進(jìn)行置換。通過(guò)定點(diǎn)誘變的方法在HBVRT區(qū)上游引入PSTI酶切位點(diǎn)誘變成功的質(zhì)粒命名MPHY536207及MPHY97。利用PSTI以及RT區(qū)下游自然存在的SPHI位點(diǎn)酶切后進(jìn)行完整RT區(qū)的置換。為了研究定點(diǎn)誘變所產(chǎn)生的變異對(duì)HBV本身主要生物學(xué)特性的影響將定點(diǎn)誘變前、后的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞ELISA方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清液中HBSAG的水平抽提細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒HBVDNAREALTIMEPCR檢測(cè)其水平觀察誘變位點(diǎn)對(duì)于HBSAG分泌及HBVDNA復(fù)制的影響。以從慢乙肝病人血清中分離到的拉米夫定LAMIVUDINELAM耐藥變異株以及阿德福韋ADEFOVIRDIPIVOXILADV耐藥變異株為骨架分別構(gòu)建LAM耐藥株真核表達(dá)質(zhì)粒PHY634和ADV耐藥株真核表達(dá)質(zhì)粒PHY6923同時(shí)LAM耐藥株和ADV耐藥株以模板擴(kuò)增耐藥變異株的RT區(qū)段分別將其與真核表達(dá)質(zhì)粒MPHY536207中HBV野生株中的RT區(qū)相置換構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒重組質(zhì)粒分別命名為RT634含LAM耐藥相關(guān)變異及RT6923含ADV耐藥相關(guān)變異。分別將MPHY536207PHY634及RT634轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞轉(zhuǎn)染次日加用不同濃度的LAM藥物作用7天后抽提病毒顆粒HBVDNA通過(guò)REALTIMEPCR及SOUTHERNBLOT檢測(cè)不同LAM濃度作用下HBVDNA的復(fù)制水平。同樣將MPHY536207PHY6923及RT6923轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞檢測(cè)不同濃度ADV作用下HBVDNA的復(fù)制水平。結(jié)果成功構(gòu)建包含B及C基因型HBV野毒株的真核表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞證實(shí)有復(fù)制能力。通過(guò)定點(diǎn)誘變?cè)赗T區(qū)上游引入PSTI酶切位點(diǎn)轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞證實(shí)此誘變位點(diǎn)對(duì)于HBSAG分泌及HBVDNA復(fù)制無(wú)顯著影響。質(zhì)粒MPHY536207轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞后隨著LAM及ADV濃度的升高HBVDNA的水平明顯下降而PHY634與RT634轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞后由于兩者RT區(qū)均包含LAM耐藥相關(guān)位點(diǎn)變異細(xì)胞內(nèi)的HBVDNA并沒(méi)有隨著LAM濃度的升高而下降同樣PHY6923及RT6923轉(zhuǎn)染細(xì)胞后對(duì)ADV的敏感性相一致細(xì)胞內(nèi)HBVDNA的水平?jīng)]有隨著ADV濃度的升高而降低。結(jié)論本研究建立的表型耐藥分析方法通過(guò)完整的RT區(qū)置換來(lái)研究RT區(qū)不同位點(diǎn)變異對(duì)于藥物敏感性的影響無(wú)需采用相對(duì)較難的基于全基因擴(kuò)增、克隆的表型分析技術(shù)同時(shí)該方法還具有簡(jiǎn)便易行、成本較低等優(yōu)點(diǎn)。第二部分阿德福韋耐藥乙型肝炎病毒臨床分離株生物學(xué)特性的研究目的體外研究阿德福韋耐藥相關(guān)變異對(duì)于HBSAG產(chǎn)生及HBV復(fù)制等生物學(xué)特性的影響。方法收集在阿德福韋治療過(guò)程中出現(xiàn)病毒學(xué)突破患者的血清對(duì)HBVRT區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析。對(duì)4例有代表性患者的HBV進(jìn)行全基因擴(kuò)增、測(cè)序、序列分析及克隆。將優(yōu)勢(shì)株的HBV全基因插入PHY106載體構(gòu)建成11拷貝HBV基因組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中HBSAG及HBEAG的水平了解不同ADV耐藥相關(guān)變異類型對(duì)HBSAG分泌的影響。抽提轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)病毒核心顆粒HBVDNA用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)HBVDNA的水平。將RTA181TSW172變異株與RTA181野毒株質(zhì)粒按不同比例混合共轉(zhuǎn)染HUH7細(xì)胞檢測(cè)上清中HBSAG及細(xì)胞內(nèi)病毒核心顆粒HBVDNA的水平。結(jié)果在12例出現(xiàn)病毒學(xué)反跳的患者中10例含有ADV耐藥相關(guān)位點(diǎn)變異以RTA181變異為主其中5例為RTA181T變異4例為RTA181TSRTN236T變異。包含RTA181TSW172變異的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后上清中不能檢測(cè)到HBSAG而其他變異類型的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后上清液中HBSAG和細(xì)胞內(nèi)病毒核心顆粒HBVDNA的水平與野毒株相似含有不同變異的HBV臨床分離株的細(xì)胞內(nèi)核心病毒顆粒HBVDNA水平未見(jiàn)明顯差異將RTA181TSW172變異株及RTA181野毒株的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后隨著RTA181野毒株比例的增加上清中HBSAG的水平也逐漸增高但細(xì)胞內(nèi)核心病毒顆粒HBVDNA水平無(wú)明顯差異。結(jié)論RTA181變異是ADV耐藥相關(guān)性變異的主要類型RTA181T變異較多見(jiàn)。RTA181TSW172變異株引起HBSAG分泌障礙RTA181野毒株可糾正RTA181TSW172變異株的HBSAG分泌障礙。不同類型的ADV耐藥相關(guān)變異對(duì)HBV的復(fù)制能力無(wú)顯著影響。

簡(jiǎn)介：背景急性腎損傷（ACUTEKIDNEYINJURY，AKI）是住院患者中常見(jiàn)的并發(fā)癥，尤其在危重病患者中發(fā)生率更高。了解住院患者中AKI的發(fā)病情況，主要病因，尋找其發(fā)生的危險(xiǎn)因素，對(duì)高危人群進(jìn)行密切觀察，將有助于AKI的早期診斷和干預(yù)，從而改善患者的預(yù)后。同時(shí)尋找高敏感性及特異性，既能區(qū)分AKI病因、早期診斷，又能判斷預(yù)后且無(wú)創(chuàng)傷性的生物標(biāo)志物已成為目前研究的熱點(diǎn)，然而關(guān)于標(biāo)志物對(duì)損傷部位和病因的特異性如何研究尚少。目的（1）了解住院患者中的AKI患者的發(fā)生情況，探討其病因分布、預(yù)后及危險(xiǎn)因素，以幫助臨床醫(yī)師更好地認(rèn)識(shí)和預(yù)防AKI的發(fā)生，對(duì)高危人群進(jìn)行監(jiān)控；（2）探討生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)于住院患者中AKI病因的鑒別及預(yù)后判斷的意義，為臨床的早期干預(yù)提供依據(jù)。方法（1）回顧性分析我院2007年1月至2007年12月期間所有住院AKI患者的病史，應(yīng)用AKIN推薦的AKI診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估這些患者的患病率、病因及分布，運(yùn)用LOGISTIC回歸分析影響AKI分期的危險(xiǎn)因素。（2）觀察住院AKI患者的預(yù)后情況，運(yùn)用LOGISTIC回歸分析影響住院AKI患者預(yù)后和腎臟預(yù)后的危險(xiǎn)因素。（3）前瞻性收集103例住院AKI患者、42例同期住院CKD患者和13例正常健康人的血尿標(biāo)本，分別檢測(cè)血肌酐和CYSC，尿NGAL、NAG、RBP、IL6和IL18水平，觀察這些生物學(xué)標(biāo)志物在鑒別AKI病因中的作用和對(duì)AKI患者預(yù)后判斷的價(jià)值。結(jié)果（1）住院患者中AKI的患病率為241％。男女比例1881，以老年患者居多?？剖曳植家酝饪浦械钠胀饪?、肝移植科和胸外科為主。病因中腎前性AKI占52％，其次為ATN（375％），其中AKII期658％，II期251％，III期91％。合并CKD及蛋白尿（2085）、腎損藥物的應(yīng)用（1438）和腎外臟器衰竭（1327）是AKI患者由I期發(fā)展成II和III期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。（2）住院AKI的患者死亡率為236％，腎臟完全恢復(fù)率657％。患者預(yù)后在腎后性AKI中最好；腎臟預(yù)后在腎前性AKI中最好。年齡（1327）、腎損藥物史（3050）、一周內(nèi)低血壓史（5584）、少尿（4083）、肌酐升高幅度（1712）、腎臟替代治療（3208）是AKI患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。腎外臟器衰竭數(shù)（2277）和腎臟替代治療（2183）是腎臟功能不恢復(fù)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。（3）尿RBP在CRF組中明顯高于AKI組5906936794，75931VS20516（11030，27780），P0003，而尿NGAL在AKI組中明顯高于CRF組34911122，15859VS375179，100，P00001；尿IL6水平在PRE組中顯著低于ATN組（P結(jié)論AKI是住院患者常見(jiàn)的疾病之一，男性和老年人多發(fā)，以腎前性最常見(jiàn)。CKD史、腎損藥物史和腎外臟器衰竭是AKI患者由I期發(fā)展成II和III期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。住院患者中AKI的死亡率較高，患者預(yù)后在腎后性AKI中最好，腎臟預(yù)后在腎前性AKI中最好，患者預(yù)后和腎臟預(yù)后與腎損害的嚴(yán)重程度有關(guān)。年齡、腎損藥物史、一周內(nèi)低血壓史、少尿史、肌酐升高幅度和腎臟替代治療是AKI患者死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；腎外臟器衰竭數(shù)和腎臟替代治療是腎臟功能不恢復(fù)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。尿NGAL、尿RBP和尿IL18分別有助于ATN、慢性腎功能損傷和腎功能損害的鑒別診斷；尿NGAL和血CYSC有助于區(qū)別ATN、AGV和AIN的生物學(xué)標(biāo)志物。尿NGAL和血CYSC可能可以作為預(yù)測(cè)AKI患者預(yù)后和腎臟預(yù)后的指標(biāo)；尿NAG和尿IL18可能可以作為預(yù)測(cè)AKI患者腎臟預(yù)后的指標(biāo)。

簡(jiǎn)介：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文銀杏種子脫水敏感性的生物學(xué)機(jī)理研究姓名顏世超申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)作物遺傳育種指導(dǎo)教師高榮岐20050601山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本試驗(yàn)選用銀杏大粒品種龍眼和小粒品種梅核為材料，對(duì)其在脫水過(guò)程中種子發(fā)芽力和活力的變化、活性氧清除酶活性的變化、激素、特異蛋白以及內(nèi)含物含量的變化進(jìn)行了系統(tǒng)研究，并對(duì)不同水分含量的種子進(jìn)行了解剖、顯微、超微結(jié)構(gòu)觀察，旨在明確銀杏種子的貯藏行為，探討其脫水敏感性的生理機(jī)制。主要研究結(jié)果如下I．銀杏種子脫水過(guò)程中活力的變化隨著水分含量的降低，銀杏種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)迅速下降。當(dāng)含水量在50％時(shí)，龍眼和梅核種子的發(fā)芽率分別為85．1％和90．5％；當(dāng)含水量降低到30％時(shí)，龍眼和梅核種子的發(fā)芽率都降到了10％以下。銀杏種子耐低溫，新鮮種子在4。C條件下儲(chǔ)藏一年，龍眼和梅核種子的發(fā)芽率仍然可以達(dá)到53．2％和63．2％。依據(jù)種子儲(chǔ)藏行為的確定方法，確定銀杏種子屬于溫帶頑拗性RECALCITRANSEED種子。在兩種脫水方式中，凍干機(jī)脫水的速度較快，而氧化鈣脫水的速度較慢。在凍干機(jī)脫水過(guò)程中，只需7天，銀杏水分就會(huì)降至7％以下，而用氧化鈣L1干燥降至相同的水分卻需要55天。無(wú)論在哪種脫水方式下，種子的各項(xiàng)發(fā)芽指標(biāo)都呈下降趨勢(shì)，但是，凍干機(jī)脫水的銀杏種子活力下降趨勢(shì)較平緩。2．銀杏種子脫水過(guò)程中活性氧清除酶活性的變化銀杏種子在脫水過(guò)程中，POD活性呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)含水量降至30％時(shí)，銀杏種子POD活力達(dá)到最高水平。當(dāng)含水量低于30％時(shí)，種子POD活力便急劇下降。胚的POD酶活性要明顯大于胚乳的POD酶活性。無(wú)論在胚還是在胚乳中，CAT活性和SOD活性在脫水過(guò)程中都呈現(xiàn)出降低一升高一降低的變化趨勢(shì)。從品種之間看，大粒種子龍眼CAT、SOD活性和小粒種子梅核CAT、SOD活性變化趨勢(shì)一致。銀杏種子在脫水過(guò)程中，胚和胚乳MDA含量均呈不斷上升的趨勢(shì)，且胚中的MDA含量明顯大于胚乳。大粒種子龍眼和小粒種子梅核的MDA含量變化趨勢(shì)一致。凍干機(jī)脫水的銀杏種子POD、CAT以及SOD活性的變化趨勢(shì)相對(duì)平緩。在脫水前期，氧化鈣脫水的銀杏種子POD、CAT以及SOD活性一般要高于

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC學(xué)位論文密級(jí)編號(hào)_I一IO一_■RESEARCHONIRTBNCL嘔THEKE／MNLSMTRAINIGINTEACHINGOFTHEHINGOTTHEI小L朗PROFESSIONAIBIOLOGY榮建波指導(dǎo)教師姓名龍中兒副教授江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別教育碩士專業(yè)名稱學(xué)科教學(xué)生物論文提交日期2006年9月答辯日期2006年11月26日學(xué)位授予單位和日期江西師范大學(xué)2006年月日答辯委員會(huì)主席姜兵云評(píng)閱人王筱蘭劉夠生二OO六年九月ABSTRACTTHELACKOFHUMANISMHASCAUSEDTHEGLOBALCONCERNTHEHUMANISMWASPUTFORWARDIX，CAUSCOFTHERAPIDECONOMYANDTHECOLLISIONOFHUMANANDSCIENCETHATISCLOSERELATEDTOEDUCATIONTHEESSENTIAL／TYOFHUMANISMISTHECORETOPURSUETHEGREATVALUEOFTRUTH，GOODNESSANDBEAUTYTHATISTHETERMINALAIMTOLETMANDEVELOPFREEANDA11AROUNDTHEPROFESSIONALEDUCATIONISTHEIMPORTANTCOMPONENTPARTINOURCOURTTRYTEACHINGSYSTEMITISTHESIGNIFICANTFOUNDATIONOFNATIONALECONOMYTHEEDUCATIONMAKESSTUDENTSMASTERTHEPROFESSIONALBASICTHEORYPROFESSIONALKNOWLEDGEITISAKINDOFEDUCATIONTHATMAKESTHEMPOSSESSTHERUDIMENTARYANDPRELIMINARYSKILLGOINGINFORTHEPROFESSIONALPRACTICETHEBIOLOGICALTEACHINGISONEOFTHEMOSTCOMPONENTSINPROFESSIONALEDUCATIONWHICHTHEREAREDIFFERENTLEVELSOFTARGETSANDAUKINDSOFELEMENTSSUCHASKNOWLEDGE，EXPERIENCE，ATTITUDEANDSKILLSBASEONTHEABOVEWEPUTFORWARDTHETOPICTOTRAINTHEPROFESSIONALTALENTTHATHADHUMANISMTHEREISANATURALRELATIONSHIPBETWEENTHEHUMANANDSCIENCE，ANDALOTOFFACTORSOFHUMANISTICEDUCATIONARECONTAINEDINTHEBIOLOGYAFTERANINVESTIGATIONWEFINDOUTSOMEPROBLEMCOMINGFROMTHESTUDENTSHUMANISMTHATSHOULDDIRECTLYAFFECTTHEPROFESSIONALEDUCATIONTHISARTICLEDEMONSTRATESTHATTHETRAININGSTUDENT’SHUMANISMINBIOLOGICALTEACHINGISWORKABLEANDNECESSARYTHROUGHTHETHEORYANDTHEPRACTICETHEREARESOMEPATHSANDMEASURESFORTRAININGOFSTUDENTLSHUMANISMTHEFOLLOWINGARETHEMAINPATHTHATWEADOPTEDENHANCINGINTHECLASSROOM，INFILTRATINGOUTTHECLASSROOM，ANDCONSTRUCTINGOUTTHECAMPUSECOLOGICALCULTURETHEFOLLOWINGALETHEMAINMEASURESTHATWEADOPTEDTOIMPROVETHEIDEARECOGNIZINGTOENHANCETHEBIOLOGICALHISTORYEDUCATING，TOCARRYOUTTHEPATRIOTISMTEACHINGTOAROUSETHEINTERESLTOINITIATETHEDEMOCRATICTEACHINGFORM，TEFORMTHESYSTEMOFTEACHINGAPPRAISALACCORDINGTOTHERESPONSEOFTHESTUDENT，WECOMBINETHEREFORMSOFTHETEACHINGCONTENTANDMETHODWITHTHEREFORMSOFTHETEACHINGWAYTOIMPROVETHETEACHINGPROCESSINTHEBIOLOGICALTEACHINGANDWEHAVEATTAINEDGOODTEACHINGEFFECTSITISNECESSARYTOCONTINUESTUDYINGTHATWECANREALLYTRAINTHETALENTEDPERSONSHAVINGHUMANISMKEYWORDSHUMANISM；PROFESSIONALEDUCATION；BIOLOGICALTEACHING；EDUCATION

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多重組腺病毒介導(dǎo)的Sox9基因轉(zhuǎn)染終板軟骨細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多基于制備環(huán)境的家蠶絲膠蛋白分子形態(tài)構(gòu)象與生物學(xué)性能研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的將不同濃度的柚皮苷以層層自組裝的方法構(gòu)建純鈦表面仿生涂層，研究組裝了柚皮苷仿生涂層的純鈦片對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠前骨細(xì)胞MC3T3E1增殖和分化的影響，探索柚皮苷濃度以及培養(yǎng)時(shí)間對(duì)MC3T3E1細(xì)胞的作用。方法1、用金相砂紙分別按320目、800目、1200目、2000目逐級(jí)仔細(xì)打磨直徑10MM、厚度1MM的圓形純鈦片，打磨完成的鈦片表面光滑呈亮白色。按去離子水→無(wú)水乙醇→丙酮→去離子水的順序依次超聲清洗鈦片各15分鐘，高溫高壓消毒。用冷卻至室溫的混合酸溶液（等體積的98％H2SO4與30％H2O2混合所得）對(duì)鈦片酸蝕1H，以大量的去離子水反復(fù)沖洗鈦片至鈦片表面呈中性，烘干后置于培養(yǎng)皿中，保鮮膜封存待用。2、將柚皮苷溶解于透明質(zhì)酸溶液中，配置成不同濃度柚皮苷溶液104MOLL組105MOLL組106MOLL組和107MOLL組，本實(shí)驗(yàn)還設(shè)有未加藥的涂層組（簡(jiǎn)稱未加藥組）以及未制備涂層的酸蝕鈦片組（簡(jiǎn)稱空白組）。3、將MC3T3E1細(xì)胞分別接種在各濃度柚皮苷組、未加藥組及空白組培養(yǎng)24H、48H和72H后，采用CCK8法，檢測(cè)各組在相應(yīng)的時(shí)間檢測(cè)點(diǎn)450NM波長(zhǎng)時(shí)的吸光度值，評(píng)價(jià)柚皮苷涂層對(duì)MC3T3E1增殖的影響。4、將MC3T3E1細(xì)胞分別接種在各濃度柚皮苷組、未加藥組及空白組培養(yǎng)96H后，裂解細(xì)胞，采用堿性磷酸酶ALP試劑盒測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的ALP活性，評(píng)價(jià)不同濃度柚皮苷涂層對(duì)MC3T3E1細(xì)胞分化的影響。5、將MC3T3E1細(xì)胞分別接種在各濃度柚皮苷組、未加藥組及空白組培養(yǎng)96H后，提取總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，檢測(cè)MC3T3E1細(xì)胞生長(zhǎng)于各實(shí)驗(yàn)組鈦片后OCMRNA，RUNX2MRNA及COLLA1MRNA的表達(dá)。結(jié)果1、各濃度柚皮苷涂層組在24H，48H和72H對(duì)MC3T3E1細(xì)胞促增殖的作用強(qiáng)于未加藥組和空白組P＜001，且隨著時(shí)間增加，促增殖作用越明顯，相同時(shí)間檢測(cè)點(diǎn)下在106MOLL時(shí)作用效果最好。2、各濃度柚皮苷涂層組在96H對(duì)MC3T3E1細(xì)胞ALP活性檢測(cè)結(jié)果均高于于未加藥組和空白組，其中在濃度104MOLL、106MOLL時(shí)作用效果較好，但不同濃度之間對(duì)細(xì)胞的作用差異不大。3、各濃度柚皮苷涂層組在96H對(duì)MC3T3E1細(xì)胞RUNX2MRNA及COLLA1MRNA表達(dá)的作用均強(qiáng)于未加藥組和空白組，其中106MOLL濃度下的柚皮苷對(duì)上述兩種基因表達(dá)的上調(diào)能力顯著P＜005，各組對(duì)OCMRNA的表達(dá)上在此時(shí)間點(diǎn)差別不大。結(jié)論通過(guò)層層自組裝技術(shù)，可在鈦片表面成功構(gòu)建柚皮苷仿生涂層。體外細(xì)胞培養(yǎng)的結(jié)果顯示各濃度下的柚皮苷對(duì)MC3T3E1細(xì)胞增殖、分化的作用均強(qiáng)于未加藥組和空白組，且在106MOLL時(shí)作用效果較好。提示柚皮苷可被加載于涂層中，且一定濃度下的柚皮苷可以促進(jìn)種植體的骨整合作用。

簡(jiǎn)介：我醫(yī)學(xué)碩士論文SURVIVIN表達(dá)與直腸癌生物學(xué)特征關(guān)系THERELATIONSHIPBETWEENEXPRESSIONOFSURVIVINBIOLOGICALACTERISTICSOFRETALCANCER趙明外科學(xué)延邊大學(xué)學(xué)校代碼10184分類號(hào)分類號(hào)密級(jí)UDC學(xué)號(hào)2012010585延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文SURVIVIN表達(dá)與直腸癌生物學(xué)特征關(guān)系研究生姓名趙明培養(yǎng)單位延邊大學(xué)臨床學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱李革副教授學(xué)科專業(yè)外科學(xué)研究方向胃腸外科論文提交日期2015年6月1日

簡(jiǎn)介：目的骨植入體植入失敗是目前臨床亟待解決的問(wèn)題。前期研究顯示鋅鈣摩爾比為05的鋅修飾硅酸鈣CA2ZNSI2O7陶瓷涂層比硅酸鈣CASIO3陶瓷涂層具有更好的促前成骨細(xì)胞粘附、增殖及分化的作用，并能與宿主骨界面形成有效的整合，揭示經(jīng)過(guò)ZN離子修飾的CASIO3陶瓷涂層對(duì)前成骨細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)產(chǎn)生重要作用。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS作為體內(nèi)成骨細(xì)胞的主要分化來(lái)源，探索出對(duì)于BMSCS具有最理想生物學(xué)活性鋅鈣摩爾比的CAAZNSI2O7陶瓷涂層，并研究其浸提液對(duì)BMSCS的生物學(xué)影響及作用機(jī)制顯得尤為重要，為進(jìn)一步探討其作為骨植入體涂層運(yùn)用于大體實(shí)驗(yàn)以及骨科和牙科臨床奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1BMSCS的提取、純化和鑒定。使用全骨髓貼壁法提取SD大鼠BMSCS，培養(yǎng)至第三代后，使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD29、CD90、CD45、CD31陽(yáng)性率，進(jìn)行成骨成脂誘導(dǎo)分化后，分別行茜素紅和油紅O染色后觀察分化情況，使用免疫熒光染色法進(jìn)行VIMENTIN染色后觀察染色情況。2構(gòu)建并優(yōu)化CA2ZNSI2O7陶瓷涂層。采用溶膠凝膠法并調(diào)節(jié)鋅鈣離子的摩爾比，構(gòu)建鋅鈣摩爾比分別為01、03、05的CA2ZNSI2O7陶瓷粉體，然后使用大氣等離子噴涂系統(tǒng)APS進(jìn)行噴涂，在特定參數(shù)下獲得CA2ZNSI2O7陶瓷涂層，檢測(cè)涂層表面形貌、化學(xué)穩(wěn)定性及與鈦基底材料的結(jié)合強(qiáng)度等。3觀察不同鋅鈣摩爾比的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層對(duì)BMSC的生物學(xué)影響。檢測(cè)涂層浸提液中的鈣CA、硅SI、鋅ZN離子濃度。通過(guò)CCK8試劑盒檢測(cè)、倒置顯微鏡觀察BMSC在涂層材料表面及其浸提液中培養(yǎng)后的粘附、增殖情況通過(guò)ELISA方法檢測(cè)BMSCS在涂層材料表面及其浸提液中添加成骨誘導(dǎo)劑培養(yǎng)后ALP、BGP、COLⅠ的生成情況，茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成情況，ALP染色觀察ALP分泌情況。探索出促BMSCS生物學(xué)活性最優(yōu)的鋅鈣摩爾比CA2ZNSI2O7陶瓷。4TGFΒ1及IGF1所介導(dǎo)的TGFΒSMAD、MAPKERK及PKC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究。使用最適鋅鈣摩爾比的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層作為實(shí)驗(yàn)組，BMSCS在含成骨誘導(dǎo)劑的各組浸提液中培養(yǎng)后，采用QRTPCR方法檢測(cè)成骨標(biāo)記基因ALP、BGP、COLⅠ，TGFΒSMAD信號(hào)通路中TGFΒ1、SMAD2、SMAD3，以及MAPKERK、PKC信號(hào)通路中的IGFⅠ、ERK1、REK2、PKCΔ等關(guān)鍵基因MRNA的表達(dá)情況。探索TGFΒSMAD及MAPK及PKC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在CA2ZNSI2O7陶瓷涂層對(duì)BMSCS生物學(xué)影響的作用。結(jié)果（一）使用全骨髓貼壁法成功傳代培養(yǎng)出了數(shù)量較多、細(xì)胞純度較高的SD大鼠BMSCS，具有良好的分化潛能。（二）成功制備了鋅鈣摩爾比為01、03、05的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層，各組涂層的表面形貌均較為粗糙，與鈦基的結(jié)合強(qiáng)度均明顯強(qiáng)于CASIO3陶瓷涂層，三組之間未見(jiàn)明顯區(qū)別各組材料在DMEMF12培養(yǎng)液中浸泡1D后，CASIO3涂層釋放CA、SI離子濃度最高，而ZN離子濃度同普通培養(yǎng)基一致，CA2ZNSI2O7陶瓷涂層CA、SI離子濃度隨著鋅鈣摩爾比的增加而減少，同時(shí)ZN離子濃度隨之增加。（三）BMSCS在三組CA2ZNSI2O7陶瓷涂層表面及浸提液中粘附和增殖情況均顯著優(yōu)于未涂層鈦合金金屬片及CASIO3陶瓷涂層，其中鋅鈣摩爾比為03的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層顯著優(yōu)于其余兩組在添加成骨誘導(dǎo)劑的條件下，BMSCS在三組CA2ZNSI2O7陶瓷涂層表面及浸提液中培養(yǎng)后，成骨分化及生成ALP、COLⅠ、BGP以及鈣結(jié)節(jié)形成情況均顯著優(yōu)于未涂層鈦片及CASIO3陶瓷涂層，其中鋅鈣摩爾比為03的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層顯著優(yōu)于其余兩組。（四）BMSCS在各組含成骨誘導(dǎo)劑的浸提液中培養(yǎng)后，ALP、BGP、COLⅠMRNA的表達(dá)量以及TGFΒ1、SMAD2、SMAD3MRNA的表達(dá)量均隨時(shí)間變化而升高，鋅鈣摩爾比為03的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層的表達(dá)量最高，CASIO3組次之。IGFⅠ、ERK1、ERK2、PKCΔMRNA的表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而輕度升高，組間無(wú)明顯差異，21D時(shí)IGF1MRNA的表達(dá)量在鋅鈣摩爾比為03的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層浸提液中顯著增多。結(jié)論不同鋅鈣摩爾比的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層都具有粗糙的表面形貌、豐富的孔隙和生物活性的化學(xué)組分，并可釋放出的生物活性離子，無(wú)論是BMSCS在其表面直接培養(yǎng)，還是使用其浸提液進(jìn)行培養(yǎng)，均表現(xiàn)出了相對(duì)于未涂層純鈦金屬片和CASIO3陶瓷涂層更為優(yōu)秀的促BMSCS粘附、增殖及成骨分化和礦化的能力。其中鋅鈣摩爾比為03的CA2ZNSI2O7陶瓷涂層對(duì)BMSCS的生物學(xué)影響最為積極。因此，該涂層對(duì)BMSCS擁有更加優(yōu)越的生物相容性和生物活性，顯著促進(jìn)其粘附、增殖及成骨分化，所釋放出濃度適宜的ZN離子起了至關(guān)重要的作用，并且化學(xué)穩(wěn)定性好，與鈦基結(jié)合強(qiáng)度較高，再加上優(yōu)秀的抗菌性能，該材料作為新型的骨植入體材料擁有良好的前景。CA2ZNSI2O7陶瓷涂層促進(jìn)BMSCS成骨分化的過(guò)程可能通過(guò)TGFΒSMAD信號(hào)通路傳導(dǎo)，而MAPKERK、PKC信號(hào)通路在BMSCS成骨過(guò)程中未被激活。IGFⅠ在BMSCS成骨分化晚期可能也起了作用。

簡(jiǎn)介：遼寧師范大學(xué)教育碩士研究生學(xué)位論文論文題目普通高中生物學(xué)科實(shí)旅互動(dòng)式教學(xué)的實(shí)踐與探索研究生張洪芬申請(qǐng)人單位遼寧省盤(pán)錦市大洼職業(yè)技術(shù)教育中心指導(dǎo)教師吳志華專業(yè)方向?qū)W科教學(xué)生物年級(jí)04級(jí)遼寧師范大學(xué)研究生學(xué)院2006年12月等逼高中生撕擘并實(shí)麓王葫式羲譬磚類蠢與舞索獲得過(guò)程與掌握。而是看教師講得是否麓彩，即教師的“自我表現(xiàn)’是否優(yōu)秀要切實(shí)政變學(xué)生被動(dòng)發(fā)展的處境，實(shí)現(xiàn)學(xué)生生動(dòng)活浚、主動(dòng)的發(fā)展，藏需要改革當(dāng)前韻澡堂教學(xué)教學(xué)過(guò)隉應(yīng)該是教邪與學(xué)生之閬一種文化知識(shí)，辯學(xué)技術(shù)為媒介的互動(dòng)過(guò)程，師生互動(dòng)可以改變傳統(tǒng)的填鵯式教學(xué)援式，使教師和學(xué)生在瀑堂教學(xué)中處于完全平等的地位師生共同學(xué)習(xí)，共同探索，師生閥零距離的交漉讓學(xué)生在快樂(lè)中獲取知識(shí)許多研究表明，漂堂教學(xué)中師生互動(dòng)，能更好地辱L壤學(xué)生對(duì)薪氟識(shí)的理解，對(duì)原有知識(shí)的梳理，捂建更為臺(tái)理有效的認(rèn)知結(jié)構(gòu)，遙過(guò)學(xué)生全面，多樣的主體實(shí)踐活動(dòng)，促進(jìn)地茸注體精神、實(shí)踐能力和多方面素質(zhì)的整體發(fā)展與此同時(shí)。實(shí)現(xiàn)對(duì)傳績(jī)譚堂教學(xué)過(guò)程豹根本變革。以煥發(fā)出課堂教學(xué)的真正活力一，實(shí)施互動(dòng)教學(xué)的巷要性1時(shí)代背景在班級(jí)課堂里，存在著各種各樣的互動(dòng)行為，師生互動(dòng)行為是其中JE常重要和常見(jiàn)韻種師生課堂互動(dòng)行為有多辮噗型。為了雯潦入絕了懈這些行為構(gòu)規(guī)律。L；L便為提高師生謀堂行為豹有效性提供有參考價(jià)值翦建議，有必要對(duì)豐富多彩的互動(dòng)現(xiàn)象進(jìn)行分類研究。嗣內(nèi)外的教育學(xué)者、心理學(xué)者和社會(huì)學(xué)者已經(jīng)對(duì)此進(jìn)行了不少研究。嗣井艾雪黎等人提出的三種類型；教師中心式、學(xué)生中心式、船諷中心式L乖J比特與抨特等人提出三種類型；權(quán)威式、魁式、放任式國(guó)內(nèi)吳康寧等人根據(jù)教師行為對(duì)象強(qiáng)分為三種類型師個(gè)互動(dòng)、癖班互動(dòng)、篩緞互動(dòng)；根據(jù)師生行為屠￡戰(zhàn)分為三種類型L控糍般從型，控鐒一反控制型、相互磋商型縱觀師生課堂互動(dòng)行為類型己取得的研究成果，奉入認(rèn)為這些研究呈現(xiàn)出多學(xué)科，多危度的特點(diǎn)國(guó)外的艾雪黎運(yùn)用社會(huì)學(xué)的理論進(jìn)行分類研究。JF比特與懷特則從師生關(guān)系的角度，報(bào)據(jù)教師鎮(zhèn)導(dǎo)行為的性質(zhì)進(jìn)行分類驕究國(guó)內(nèi)的吳嶷寧等人飆教育社會(huì)學(xué)危度運(yùn)用實(shí)證研究和理論方法進(jìn)行分類，這些研究為我們認(rèn)識(shí)師生渫堂互動(dòng)的本質(zhì)和規(guī)律。提高互動(dòng)有效性都賄一定的借鑒意義4十一世紀(jì)是生物的世紀(jì)0中學(xué)生物教學(xué)擔(dān)負(fù)著中國(guó)21世紀(jì)科學(xué)發(fā)展的歷史重任。成為開(kāi)拓2L世紹科學(xué)前進(jìn)瓤培養(yǎng)生物學(xué)科準(zhǔn)才的基醴工程，面生鈁科學(xué)作為一門(mén)實(shí)踐性很強(qiáng)的自然科學(xué)，更應(yīng)采用互動(dòng)教學(xué)的形式，促進(jìn)學(xué)生主體牲的充分發(fā)展2、理論根據(jù)班掛拉豹社會(huì)學(xué)習(xí)理論適一理論闡明人類在社會(huì)環(huán)境中進(jìn)行學(xué)習(xí)，從面形成和發(fā)展個(gè)性特點(diǎn)這里的社會(huì)環(huán)境是指那種由人提供的功能性索自澈，社會(huì)學(xué)習(xí)郎是對(duì)這種藕璇的反應(yīng)過(guò)程。這轉(zhuǎn)學(xué)習(xí)涉及強(qiáng)一定社會(huì)蘩傳下人與人之婀熊相互關(guān)系社會(huì)學(xué)習(xí)論強(qiáng)調(diào)入青使用符號(hào)和自愛(ài)調(diào)節(jié)的能力，人不是消極地接受外界辮激，面是麓積極地對(duì)這種刺激怍出選擇組織和轉(zhuǎn)換，據(jù)以謂節(jié)自己的行為社會(huì)學(xué)習(xí)論還特掰強(qiáng)調(diào)人的思憋情感和行為不僅受直接經(jīng)驗(yàn)的影響。而且也受觀察的影響。通過(guò)觀察他人所表現(xiàn)昀行為及其結(jié)果發(fā)生孵靜F謹(jǐn)E學(xué)習(xí)。稱作麓察學(xué)習(xí)蕊察學(xué)習(xí)是社會(huì)學(xué)習(xí)的個(gè)最重要的形式班掛拉的社會(huì)學(xué)習(xí)理論展示給我們的是教師與學(xué)生之聞的行為往來(lái)，在學(xué)生學(xué)習(xí)掌握和譚節(jié)社會(huì)性行為方向2

簡(jiǎn)介：安徽大學(xué)碩士學(xué)位論文自然生態(tài)恢復(fù)過(guò)程中銅尾礦廢棄地微生物學(xué)性質(zhì)及細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)研究姓名詹婧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)環(huán)境科學(xué)指導(dǎo)教師孫慶業(yè)201004自然生態(tài)恢復(fù)過(guò)程中銅尾礦廢棄地微生物學(xué)性質(zhì)及細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)研究II管植物群落的演替，楊山?jīng)_尾礦廢棄地固氮微生物多樣性未表現(xiàn)出明顯的變化趨勢(shì)；相對(duì)于棄置時(shí)間較短的楊山?jīng)_尾礦廢棄地，銅官山老尾礦廢棄地表現(xiàn)出高的固氮微生物多樣性。測(cè)序結(jié)果表明，尾礦廢棄地中自由固氮微生物主要類群包括變形菌門(mén)和藍(lán)藻門(mén)。基于條帶分布和銅尾礦廢棄地理化性質(zhì)的典范對(duì)應(yīng)分析顯示，銅尾礦廢棄地中有機(jī)質(zhì)含量、含水量、PH對(duì)自由固氮微生物多樣性影響顯著（P005）。植物群落通過(guò)改善基質(zhì)PH、提高有機(jī)質(zhì)和水分含量影響尾礦廢棄地中自由固氮微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)。銅尾礦廢棄地上生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)植物白茅（IMPERATACYLINDRICAVARMAJ）、狗牙根（CYNODONDACTYLON）、中華結(jié)縷草（ZOYSIASINICA）、芒（MISCANTHUSSINENSIS）、五節(jié)芒（MISCANTHUSFLIDULUS）和木賊（HIPPOCHAETERAMOSISSIMUM）的根際和非根際NIFH基因多樣性分析表明在楊山?jīng)_銅尾礦廢棄地，優(yōu)勢(shì)植物根際尾礦固氮微生物多樣性低于非根際尾礦；相對(duì)于楊山?jīng)_尾礦廢棄地，銅官山老尾礦廢棄地白茅根際尾礦具有高的固氮微生物多樣性；隨植物定居時(shí)間的增加，楊山?jīng)_尾礦廢棄地白茅和木賊根際尾礦中固氮微生物多樣性提高，而中華結(jié)縷草表現(xiàn)出相反的趨勢(shì)。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，銅尾礦廢棄地根際自由際固氮微生物主要類群包括Α變形菌，Β變形菌和藍(lán)藻。大多數(shù)NIFH基因序列與已知可培養(yǎng)的微生物及藍(lán)藻表現(xiàn)出較低的相似性，說(shuō)明銅尾礦廢棄地的固氮微生物可能代表著新的固氮微生物類群。尾礦廢棄地優(yōu)勢(shì)植物類型、植物群落定居時(shí)間、植物生活型及尾礦的理化性質(zhì)皆影響優(yōu)勢(shì)植物根際自由固氮微生物多樣性。關(guān)鍵詞銅尾礦；微生物學(xué)性質(zhì)；細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)；自由固氮微生物；PCRDGGE

簡(jiǎn)介：小腸粘膜下層（SMALLINTESTINALSUBMUCOSA，SIS）是一種天然的細(xì)胞外基質(zhì)，主要成分是膠原蛋白。SIS經(jīng)加工后制成的修復(fù)材料具有良好的生物相容性、適當(dāng)?shù)慕到庑?、低或無(wú)免疫原性、一定的機(jī)械強(qiáng)度等特性。目前，SIS修復(fù)材料廣泛用于血管、膀胱、腸道、肌腱以及泌尿系統(tǒng)等組織修復(fù)中。本研究所采用的脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片是由豬小腸粘膜下層經(jīng)脫細(xì)胞、凍干、滅菌等工藝制成，臨床上擬通過(guò)長(zhǎng)期植入體內(nèi)修復(fù)疝氣、肛瘺等部位軟組織的損傷。本研究針對(duì)脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片生物學(xué)特性中的降解規(guī)律和免疫毒性兩方面進(jìn)行臨床前研究，為其更安全、有效的應(yīng)用提供理論依據(jù)。（1）為了更加可靠地研究脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片的免疫毒性，本研究利用細(xì)菌脂多糖（LIPOPOLYSACIDE，LPS）優(yōu)化大鼠免疫刺激模型，為其免疫毒性研究設(shè)立免疫刺激組。選取WISTAR大鼠42只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、免疫抑制組、LPS給藥后6H組、LPS給藥后12H組、LPS給藥后24H組和LPS給藥后48H組。對(duì)大鼠進(jìn)行給藥處理后取材并檢測(cè)以下指標(biāo)大鼠體重變化、免疫器官系數(shù)、血液學(xué)參數(shù)、T淋巴細(xì)胞亞群分析、淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子（IL1Β和TNFΑ）含量。結(jié)果顯示，LPS給藥后6H、12H組在免疫器官系數(shù)、血液學(xué)參數(shù)、T淋巴細(xì)胞亞群分析、淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子含量方面均出現(xiàn)一定的免疫刺激現(xiàn)象，與空白對(duì)照組、假手術(shù)組比較存在顯著性差異（P（2）本研究對(duì)脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片的免疫毒性進(jìn)行了探討。選取WISTAR大鼠80只，隨機(jī)分為高劑量組、低劑量組、假手術(shù)對(duì)照組、免疫抑制組和免疫刺激組，依據(jù)考察周期將每組16只大鼠再隨機(jī)分為1、4、8和12周4個(gè)實(shí)驗(yàn)操作小組（N4）。對(duì)大鼠進(jìn)行埋植給藥處理后取材并檢測(cè)以下指標(biāo)大鼠體重變化、免疫器官系數(shù)、血液學(xué)參數(shù)、免疫器官病理學(xué)、NK細(xì)胞殺傷活性、T淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞增殖、補(bǔ)體C3蛋白含量、免疫球蛋白（IGG、IGM）含量、細(xì)胞因子（IL1Β、IL6、TNF?。┖?。結(jié)果顯示，第1、4、8和12周的各時(shí)間點(diǎn)，高劑量組、低劑量組與假手術(shù)對(duì)照組在大鼠體重變化、血液學(xué)參數(shù)、免疫器官系數(shù)分析、免疫器官病理學(xué)分析、T淋巴細(xì)胞亞群分析、淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、免疫球蛋白含量、細(xì)胞因子含量的測(cè)定方面變化趨勢(shì)基本一致，各組數(shù)據(jù)間相比不存在顯著性差異（P005）；高劑量組和低劑量組在NK細(xì)胞殺傷活性和補(bǔ)體C3含量測(cè)定方面與假手術(shù)對(duì)照組有一定差異。免疫刺激組大鼠在血液學(xué)參數(shù)、免疫器官系數(shù)分析、免疫器官病理學(xué)檢查、T淋巴細(xì)胞亞群分析、淋巴細(xì)胞增殖方面出現(xiàn)一定的免疫刺激現(xiàn)象，與高劑量組、低劑量組、假手術(shù)對(duì)照組比較有顯著性差異（P（3）本研究從體外降解和體內(nèi)降解兩方面對(duì)脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片的降解規(guī)律進(jìn)行研究。體外降解包括加速降解和常規(guī)降解兩方面。其中加速降解是在05MGML的Ⅰ型膠原酶中震蕩進(jìn)行，于不同時(shí)間點(diǎn)取出樣品碎片，計(jì)算其降解率。結(jié)果顯示，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，脫細(xì)胞豬小腸粘膜疝修補(bǔ)片在05MGML的Ⅰ型膠原酶中逐漸降解，酶解20H降解率達(dá)到68％左右，此前的降解率均低于相同時(shí)間點(diǎn)下COOK疝修補(bǔ)片的降解率，此后二者降解率接近，至96H降解率均90以上。常規(guī)降解是在001MPBS中靜置進(jìn)行，于不同時(shí)間點(diǎn)取出樣品碎片，計(jì)算其降解率。結(jié)果顯示，脫細(xì)胞豬小腸粘膜疝修補(bǔ)片靜置30D時(shí)幾乎未發(fā)生降解，此后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸降解，至靜置180D時(shí)，降解率達(dá)到90以上。體內(nèi)降解的體內(nèi)埋植實(shí)驗(yàn)跟免疫毒性研究的埋植實(shí)驗(yàn)同步進(jìn)行，分別于大鼠腹部皮下植入脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片后1周、4周、8周和12周對(duì)其進(jìn)行埋植部位大體觀察和組織學(xué)觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，埋植部位大體觀察，隨著植入周期的延長(zhǎng)，第1、4、8周的脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片不斷被結(jié)締組織包裹，并逐漸降解吸收，至植入12周脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片與周?chē)Y(jié)締組織完全融合。組織學(xué)觀察，隨著植入周期的延長(zhǎng)，第1、4、8周的脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片逐漸與周?chē)Y(jié)締組織融合，炎癥細(xì)胞逐漸減少，至植入12周該材料與周?chē)Y(jié)締組織基本融合，局部?jī)H見(jiàn)少量散在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)明顯炎癥病變。大鼠皮下植入脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片12周時(shí)，皮下脫細(xì)胞豬小腸粘膜下層疝修補(bǔ)片基本完全降解。降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，脫細(xì)胞豬小腸粘膜疝修補(bǔ)片具有適當(dāng)?shù)纳锝到庑浴?

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文學(xué)拉代碼10357密級(jí)保密期碾聚集誘導(dǎo)型席夫堿類化學(xué)探針的合成、構(gòu)效關(guān)系及生物學(xué)應(yīng)用探索PREPARATIONSTRUCTUREACTIVITYREIATIONSHJPANDBI0IOGICALAPPICATIONOFCHEMICAIPROBEBASEDONAGGREGATIONINDUCEDEMISSIONPROPERTY學(xué)號(hào)姓名一級(jí)學(xué)科二級(jí)學(xué)科指導(dǎo)教師完成時(shí)間C14201036張?chǎng)斡袡C(jī)化學(xué)周虹屏教授2017年5月謦獲縋婆摘要小分子熒光探因其好的選擇性、高的靈敏度、簡(jiǎn)便快捷等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于化學(xué)科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、藥物和生命科學(xué)等研究領(lǐng)域。目前金屬離子的化學(xué)探針的應(yīng)用仍受到一一些限制，如專一性不夠，易受其它金屬離子的干擾；有的結(jié)構(gòu)復(fù)雜、合成困難；有的膜滲透性能欠佳，應(yīng)用于生物活體的檢測(cè)受限制等。因此，優(yōu)化探針?lè)肿拥慕Y(jié)構(gòu)，尋找選擇性好、靈敏性高、生物相容佳的化學(xué)探針，具有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。本文設(shè)計(jì)、合成了三種新穎的化學(xué)探針，研究了它們的光學(xué)性能，探討了它們?cè)诮饘匐x子識(shí)別以及生物學(xué)中的應(yīng)用1以氮雜冠醚15一C一5為給電子體，通過(guò)CN及苯并乙烯橋連，引入水楊醛合成席夫堿類化合物T1、T2，研究空間結(jié)構(gòu)的微調(diào)對(duì)物質(zhì)光學(xué)性質(zhì)的影響。空腔冠醚以及位阻基團(tuán)的引入，TI、T2展現(xiàn)了不同的銅離子識(shí)別現(xiàn)象，并伴隨著高的選擇性和靈敏性。分子內(nèi)氫鍵增強(qiáng)了T1、T2的剛性，抑制了分子的非輻射躍遷，從而表現(xiàn)出熒光增強(qiáng)的性質(zhì)。掃描電鏡和納米粒度分布測(cè)試結(jié)果表明，均一穩(wěn)定的納米顆粒是熒光增強(qiáng)的主要原因。其中T1呈現(xiàn)好的壓致發(fā)光特性，在外力作用下，發(fā)光顏色發(fā)生明顯改變，其主要緣于分子晶態(tài)與無(wú)定形態(tài)間的轉(zhuǎn)換。2基于三苯胺的槳狀結(jié)構(gòu)合成雙枝化合物T3。通過(guò)熒光光譜分析發(fā)現(xiàn)，T3在乙醇溶液中對(duì)CU2和A13表現(xiàn)出雙識(shí)別的行為，即CU2的加入導(dǎo)致熒光猝滅，A13的加入導(dǎo)致熒光增強(qiáng)且發(fā)射峰藍(lán)移。因T3好的光穩(wěn)定性及低的細(xì)胞毒性，我們嘗試對(duì)細(xì)胞和組織中的CU2和A13進(jìn)行成像。結(jié)果表明，T3不僅能夠定位HELA細(xì)胞中的CU2和AL”，還能對(duì)斑馬魚(yú)和擬南芥組織中的CU2和A13成像。關(guān)鍵字三苯胺衍生物；冠醚衍生物；熒光識(shí)別；紫外識(shí)別；生物顯影

簡(jiǎn)介：山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文中學(xué)生物學(xué)建構(gòu)主義學(xué)習(xí)環(huán)境建設(shè)研究姓名李燕燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)課程與教學(xué)論（生物）指導(dǎo)教師肖正明20070416山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文生物科學(xué)素養(yǎng)為自變量，評(píng)價(jià)的方法主要通過(guò)學(xué)生學(xué)業(yè)成績(jī)的前測(cè)、后測(cè)檢驗(yàn)比較，對(duì)于學(xué)生學(xué)習(xí)態(tài)度、學(xué)習(xí)能力、科學(xué)素養(yǎng)等真實(shí)、緘默、隱性的難以用成績(jī)衡量的因素，則采用闖卷、訪談、學(xué)生成長(zhǎng)檔案袋進(jìn)行評(píng)價(jià)，蒡進(jìn)行資料統(tǒng)計(jì)、數(shù)據(jù)分析并描述差異特征。經(jīng)過(guò)一個(gè)學(xué)期的實(shí)驗(yàn)研究，取得了一系列成功經(jīng)驗(yàn)，如教師教學(xué)觀念轉(zhuǎn)變，師生積極性、主動(dòng)性充分發(fā)揮；注重知識(shí)整合性并轉(zhuǎn)向?qū)W生生活世界，促進(jìn)綜合能力提高；從微觀教學(xué)設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)向?qū)W習(xí)環(huán)境設(shè)計(jì)，促進(jìn)過(guò)程和結(jié)果的實(shí)效結(jié)合；指導(dǎo)與建構(gòu)結(jié)合，激發(fā)興趣、快樂(lè)學(xué)習(xí)，提高學(xué)習(xí)質(zhì)量等。當(dāng)然在取得成功經(jīng)驗(yàn)的同時(shí)也遇到一些困難和問(wèn)題，有實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本身的問(wèn)題，也有不是實(shí)驗(yàn)本身而對(duì)實(shí)驗(yàn)研究產(chǎn)生制約并影響實(shí)驗(yàn)推進(jìn)的問(wèn)題，這些問(wèn)題的解決需要時(shí)問(wèn)、需要空間，也需要理解和支持。在分析取得效果的基礎(chǔ)上又進(jìn)一步提出優(yōu)化學(xué)習(xí)環(huán)境的策略，需要教師立足教學(xué)實(shí)踐，深入理解新課程及建構(gòu)主義教育理念，抓住生物學(xué)學(xué)科特點(diǎn)、利用直觀緘默知識(shí)，開(kāi)展校本教研，開(kāi)發(fā)課程瓷源，拓寬學(xué)生視野，提高情境變式，幫助學(xué)生知識(shí)遷移，實(shí)施發(fā)展性教學(xué)策略，調(diào)整自己的教學(xué)行為，并堅(jiān)持對(duì)自己的教學(xué)行為進(jìn)行反思，真正形成教師、學(xué)生、資源、目標(biāo)之間的和諧互動(dòng)關(guān)系?？傊?，生物學(xué)建構(gòu)主義學(xué)習(xí)環(huán)境建設(shè)是立足于生物新課程改革，努力構(gòu)建符合素質(zhì)教育的、緊密結(jié)合并體現(xiàn)生物學(xué)科特點(diǎn)的生物學(xué)建構(gòu)主義學(xué)習(xí)環(huán)境，以素質(zhì)教育為最高政策理念，以創(chuàng)新能力的培養(yǎng)、學(xué)習(xí)質(zhì)量的提高為追求，以學(xué)會(huì)生活、回歸生活為歸宿，充分發(fā)揮教師的幫助者、支持者的作用，從教學(xué)目標(biāo)的設(shè)計(jì)、課程資源的開(kāi)發(fā)、認(rèn)知工具的選擇與利用、情感態(tài)度價(jià)值觀的滲透與陶冶等方面進(jìn)行全方位的思考與設(shè)計(jì)，實(shí)行建構(gòu)主義本土化、學(xué)科化，真正做到建構(gòu)主義在我國(guó)生物學(xué)教學(xué)實(shí)踐中實(shí)施并取得較為明顯的效果，讓學(xué)生在快樂(lè)、興趣中學(xué)習(xí)生物學(xué)知識(shí)，培養(yǎng)科學(xué)素養(yǎng)從而提高核心競(jìng)爭(zhēng)力。關(guān)鍵詞建構(gòu)主義學(xué)習(xí)環(huán)境生物學(xué)學(xué)習(xí)環(huán)境分類號(hào)G63391U

簡(jiǎn)介：香菇C913菌株是本課題組經(jīng)過(guò)多年篩選獲得的一株具有較強(qiáng)應(yīng)用價(jià)值的真菌。香菇C913菌株菌絲體發(fā)酵液具有較好的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用已經(jīng)被本課題組所證實(shí)。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)生物信息學(xué)分析，初步篩選出一些與細(xì)胞凋亡相關(guān)的目的基因，并對(duì)其進(jìn)行命名。再通過(guò)CDNA末端的快速擴(kuò)增RAPIDAMPLIFICATIONOFCDNAENDS，RACE方法和生物信息學(xué)比對(duì)，獲得基因全長(zhǎng)及相應(yīng)的氨基酸序列。本實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象是香菇C913菌株LATCRIPIN9基因。目的利用生物信息學(xué)方法尋找并確定LATCRIPIN9的基因序列、功能域片段及相應(yīng)的氨基酸序列。對(duì)LATCRIPIN9蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析預(yù)測(cè)，全面獲取LATCRIPIN9基因的詳細(xì)信息。構(gòu)建原核表達(dá)載體PET32ALATCRIPIN9，IPTG誘導(dǎo)使LATCRIPIN9蛋白在大腸桿菌ROSETTAGAMIDE3中表達(dá)，并對(duì)誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。通過(guò)生物信息學(xué)軟件分析，預(yù)測(cè)出LATCRIPIN9蛋白的生物學(xué)活性及相應(yīng)功能。采用不同方法檢測(cè)LATCRIPIN9蛋白的體外抗氧化活性，并進(jìn)一步將香菇C913菌株重組蛋白LATCRIPIN9作用于不同的腫瘤細(xì)胞，對(duì)LATCRIPIN9蛋白在體外抗腫瘤方面的效果進(jìn)行初步研究，本實(shí)驗(yàn)將為深入研究LATCRIPIN9蛋白的生物學(xué)功能及發(fā)掘其應(yīng)用潛力奠定良好的物質(zhì)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。方法①?gòu)南愎紺913菌株中提取其總RNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得CDNA文庫(kù)，根據(jù)反轉(zhuǎn)錄的結(jié)果，利用高通量測(cè)序獲得轉(zhuǎn)錄組MRNA，通過(guò)生物信息學(xué)比對(duì)，獲得目的序列。利用3FULLRACE、5FULLRACE方法獲得目的基因LATCRIPIN9的基因全長(zhǎng)。經(jīng)NCBI、PFAM等數(shù)據(jù)庫(kù)在線比對(duì)分析得到LATCRIPIN9功能域序列，進(jìn)一步通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)分析獲得LATCRIPIN9功能域序列的氨基酸組成、預(yù)測(cè)其理化性質(zhì)及生物學(xué)活性。②將LATCRIPIN9的功能域序列克隆到原核表達(dá)載體PET32A中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒PET32ALATCRIPIN9，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌ECOLIROSETTAGAMIDE3中，對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，利用SDSPAGE及WESTERNBLOTTING方法鑒定表達(dá)產(chǎn)物。采用鎳柱親和層析的方法對(duì)重組LATCRIPIN9蛋白進(jìn)行分離純化，并通過(guò)尿素梯度透析復(fù)性純化后的目的蛋白，BCA法測(cè)定復(fù)性后的蛋白濃度。③圓二色光譜法測(cè)定復(fù)性后的LATCRIPIN9蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)。④LATCRIPIN9蛋白的抗氧化活性測(cè)定分別采用DPPH2，2DIPHENYL1PICRYLHYDRAZYL法、FRAPFERRICREDUCINGANTIOXIDANTPOWER法、ABTS22AZINOBIS3ETHYLBENZTHIAZOLINE6SULPHONATE法等3種方法測(cè)定LATCRIPIN9蛋白的抗氧化活性⑤LATCRIPIN9蛋白的抗腫瘤活性研究將LATCRIPIN9蛋白作用于人肺癌細(xì)胞A549，采用四氮唑藍(lán)比色分析法METHYLTHIAZOLYLTETRAZOLIUM，MTT法測(cè)定LATCRIPIN9蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞A549生長(zhǎng)的抑制效果同時(shí)用MTT法檢測(cè)LATCRIPIN9蛋白對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞、VERO細(xì)胞生長(zhǎng)的影響采用透射電鏡法觀察LATCRIPIN9蛋白作于人喉癌HEP2細(xì)胞及人肺癌A549細(xì)胞后，細(xì)胞相應(yīng)的形態(tài)學(xué)變化用采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LATCRIPIN9蛋白作用于A549細(xì)胞后，細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果①采用RACE方法獲得LATCRIPIN9基因全長(zhǎng)，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得功能域序列。對(duì)LATCRIPIN9功能域序列分析，發(fā)現(xiàn)其為染料脫色過(guò)氧化物酶結(jié)構(gòu)DYP_PEROX。②利用ECI和XHOI兩種限制性內(nèi)切酶，通過(guò)雙酶切的方法確定在原核表達(dá)載體PET32A中成功插入LATCRIPIN9功能域基因序列。利用SDSPAGE及WESTERNBLOTTING方法驗(yàn)證LATCRIPIN9蛋白表達(dá)成功。所得蛋白經(jīng)鎳柱親和層析法純化獲得單一目的蛋白。采用BCA方法測(cè)定目的蛋白的濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)直線方程Y00462X00108，R209986。通過(guò)方程計(jì)算獲得蛋白濃度1671MGML。③3種國(guó)內(nèi)外常用的體外抗氧化活性能力檢測(cè)法DPPH法、FRAP法、ABTS法結(jié)果顯示，目的蛋白LATCRIPIN9具有明顯的抗氧化能力，且抗氧化能力隨著濃度的增加而增強(qiáng)，但與維生素CVC相比，弱于VC。④MTT結(jié)果表明，LATCRIPIN9蛋白對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞及VERO細(xì)胞無(wú)毒性作用，對(duì)人肺癌細(xì)胞A549的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且具有一定的時(shí)間和濃度依賴性，當(dāng)?shù)鞍诐舛葹?00ΜGML，作用12H時(shí)，抑制率達(dá)到最大約為30％，與對(duì)照組比有顯著差異。電鏡結(jié)果可知，LATCRIPIN9蛋白能夠引起人肺癌細(xì)胞A549出現(xiàn)自噬，誘導(dǎo)人喉癌細(xì)胞HEP2凋亡。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明目的蛋白對(duì)人肺癌細(xì)胞A549有殺傷作用，能夠引起細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。結(jié)論①通過(guò)對(duì)香菇C913菌株的轉(zhuǎn)錄組序列進(jìn)行相關(guān)生物信息學(xué)分析，成功篩選出具有過(guò)氧化物酶活性的LATCRIPIN9基因，并通過(guò)RACE方法得到相應(yīng)的基因序列全長(zhǎng)。②采用基因重組技術(shù)成功構(gòu)建重組質(zhì)粒PET32ALATCRIPIN9，采用熱轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化該質(zhì)粒到大腸桿菌表達(dá)宿主ECOLIROSETTAGAMIDE3中，使重組LATCRIPIN9蛋白得到了成功表達(dá)。親和層析法成功對(duì)LATCRIPIN9蛋白進(jìn)行純化，尿素梯度透析法成功復(fù)性LATCRIPIN9蛋白。③體外抗氧化活性研究表明，LATCRIPIN9蛋白具有抗氧化活性，為進(jìn)一步研究其在抗氧化方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。④MTT法初步證明LATCRIPIN9蛋白對(duì)正常雞胚成纖維細(xì)胞、VERO細(xì)胞無(wú)毒性作用，對(duì)人肺癌細(xì)胞A549的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，初步研究表明LATCRIPIN9蛋白對(duì)HEP2細(xì)胞、A549細(xì)胞生長(zhǎng)均具有一定的抑制作用，為進(jìn)一步研究其抗腫瘤方面的具體作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。