簡介：國內(nèi)圖書分類號只9多F國際圖書分類號’年姓西南交通大學研究生學位論文三角葉黃連的生物學特性和生藥學研究專二零一零年十一月十五ET密級公開西南交通大學學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權西南交通大學可以將本論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復印手段保存和匯編本學位論文。本學位論文屬于1保密口，在年解密后適用本授權書；2不保密團，使用本授權書。請在以上方框內(nèi)打“√，’學讎文儲虢務鋒。指刪讎日期占叼口IT‘O。日期≥DFD。FF；D

簡介：密級論文編號中國農(nóng)業(yè)科學院學位論文L型鴨肝炎病毒中國流行株生物學特性相關研究MOLECULARCHARACTERISTICSOFDUCKHEPATITISVIRUS1ISOLATEDINCHINA博士研究生劉曉麗指導教師孔憲剛研究員申請學位類別農(nóng)學博士專業(yè)預防獸醫(yī)學研究方向動物病毒分子生物學及分子免疫學培養(yǎng)單位中國農(nóng)業(yè)科學院研究生院哈爾濱獸醫(yī)研究所提交日期2011年6月中國農(nóng)業(yè)科學院博士學位論文評閱人、答辯委員會簽名表論文題目I型鴨肝炎病毒中國流行株生物學特性相關研究動物病毒分子生物學及分子論文作者劉曉麗專業(yè)預防獸醫(yī)學研究方向免疫學指導教師孔憲剛研究員培養(yǎng)單位研究所、中心哈爾濱獸醫(yī)研究所姓名職稱碩博單位專業(yè)簽名碩導口＼評博導口閱碩導口‘＼博導口人＼碩導口博導口放R1辯碩導口磚廡L主李慶章教授東北農(nóng)業(yè)大學基礎獸醫(yī)學席博導■碩導口鋤移厶翁長江研究員哈爾濱獸醫(yī)研究所預防獸醫(yī)學博導一碩導口／勁于力研究員哈爾濱獸醫(yī)研究所預防獸醫(yī)學。博導一放您弛口碩導口中科院昆明動物研究張華堂研究員博導一所預防獸醫(yī)學辯扈榮良教授碩導口序羞分委博導■軍事醫(yī)學科學院預防獸醫(yī)學華育平教授碩導口鐋口博導■東北林業(yè)大學預防獸醫(yī)學貝碩導口澮炊涂長春教授軍事醫(yī)學科學院預防獸醫(yī)學博導■碩導口一J／／博導口會議記錄秘書王永強論文答辯時間地點2011年6月14同哈爾濱獸醫(yī)研究所學術報告廳

簡介：華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文蛹蟲草的生物學特性及抗衰老功效研究姓名王奇申請學位級別碩士專業(yè)微生物學指導教師梁運祥201009華中農(nóng)業(yè)大學2010屆碩士研究生學位論文ABSTRACTTHISSTUDYFOCUSEDONCORDYCEPSMILITARIS，AFAMOUSTRADITIONALCHINESEEDIBLEANDMEDICINALMUSHROOM，ITHASAVERYHIGHUTILIZATIONVALUEWECOLLECTED4WILDCORDYCEPSMILITARISFROMFUSHUNTHEOPFIONALCULTUREREQUIREMENTSFORCORDYCEPSMILITARISFRUITBODYANDMYCELIUMWEREINVESTIGATEDINORDERTOESTABLISHED觚INTEGRATEDMETHODOFGOODSTRAINSSELECTIONANDUSINGTHESTRAINSELECTEDASTHEPARENTSTRAINSTOCARRYOUTANTIAGINGEFFECTSOFCORDYCEPSMILIMRFIRSTOFALL，THEDIFFERENTSTRAINSWERECULTUREDINDIFFERENTNUTRITIONALEONDITIONSCARBONSOURCE，NITROGENSOURCE，PROPORTIONOFNUTRIENTLIQUIDANDMATERIAL，ETCANDENVIRONMENTALFACTORSTEMPERATURE，HUMIDITYLIGHT，VENTING，ETCTHATWEREISOLATEDFROMWILDCORDYCEPSMILITARIS，ANDTHEDIFFERENTTRAININGMETHODSRICESOLIDMEDIUM，SUBSURFACEFERMENTATION，ETCWEREUSEDFORCORDYCEPSMILIMRCULTIVATION，ANDTHENWEANALYZEDFUNCTIONALCOMPONENTSCORDYCEPICPOLYSACCHARIDE，AMINOACIDCORDYCEPINCORDYCEPICACIDSODETCOFDIFFERENTCORDYCEPSMILITARISSAMPLESWBESTABLISHEDANINTEGRATEDSTRAINSSELECTIONMETHODANDANOPTIMALCULTIVATIONMETHODOFCORDYCEPSMILITARTHERESULTSINDICATED也ATNO1WASTHEGOODSTRAINSWIMHIGHYIELDOFFRUITBODYANDMYCELIUMANDHIGHCONTENTOFFUNCTIONALCOMPONENTSITISTHEOPTIMALCULTURECONDITIONSFORFRUITBODYOFCORDYCEPSMILITARISTHEOPTIMALCARBONSOURCEWASSTARCHANDTHEOPTIMALNITROGENSOURCEWASPEPTONE，THEOPTIMALPROPORTIONOFNUTRIENTLIQUIDANDRICEWAS11THEOPTIMALCULTURETEMPERATUREWASAT22℃一25℃ANDTHEOPTIMALRELATIVEHUMIDITYWASAT65％一70％THEMYCELIUMOFCORDYCEPSMILITARISCOULDWELLGROWIN也EDARKGIVENILLUMINATIONSTIMULATIONAFTERTHEMYCELIUMHADHADENOUGHCULTUREMEDIUM，WHICHWOULDGUIDETHEFRUITBODY’SFORMINGTHEOPTIMALCULTURETEMPERATUREWASAT13℃25℃ANDTHEOPTIMALRELATIVEHUMIDITYWASAT70％75％，VENTING，LIGHTINGANDTEMPERATURESTIMULATIONWOULDPROMOTETHEGROWTHOFFRUITBODYITISTHEOPTIMALCULTURECONDITIONSOFSUBSURFACEFERMENTATIONFORMYCELIUMOFCORDYCEPSMILITARISTHEOPTIMALCARBONWASGLUCOSEANDTHEOPTIMALNITROGENSOURCEWASPEPTONE血EINOCULATIONAMOUNTOFLIQUIDTRAINSWAS5％，THECELLAGEOFLIQUIDTRAINSWAS48HTHEFILLINGLIQUIDOFFERMENTATIONBORICWASLOOMF250ML，INITIALPHWAS7075，THESHAKERRATEWAS150R／MINTHECULTURETEMPERATUREWAS22℃24℃THEFERMENTATIONTIMEWAS76HSELECTED也ENO1STRAINASTHEPARENTSTRAINSTOCULTUREFRUITBODYANDMYCELIUMANDUSEDTHEFRUITBODVANDMYCELIUMTOSTUDYANTIAGINGEFFECTSOFCORDYCEPSMILITARISTHEENDURANCETESTTHEREACTIONSENSITIVITYTESTANDTHEGERMCELLVIABILITYTESTWERECARRIEDOUTWITHMICE，THEOXYGENFREERADICALSREMOVALTESTWASCARRIEDOUTWITHOLDRATS，ANDSTUDIEDTHESCAVENGINGACTIONOFHYDROXYLFLEERADICALOFTHEWILDANDTHECULTIVATEDCORDYCEPSMILITARIS111ERESULTSINDICATEDTHATTHECULTIVATEDCORDYCEPSMILITARISHASOBVIOUSANTIAGINGEFFECTSANDGOODPROSPECTSFORDEVELOPMENTKEYWORDSCORDYCEPSMILITAR；FRUITBODYMYCELIUM；SUBSURFACEFERMENTATION；OXYGENFREERADICAL；ANTIAGINGEFFECT2

簡介：在病毒性疫苗的研究開發(fā)工作中，人二倍體細胞作為病毒抗原的制備基質是整個疫苗研發(fā)及生產(chǎn)質量控制的首要選擇。對作為疫苗制備基質的人二倍體細胞的遺傳穩(wěn)定性及其病毒感染生物學反應特征的相關分析，將為病毒疫苗的研究及開發(fā)包括疫苗安全性的研究提供更為豐富的資料。從細胞生物學的角度看，細胞特定酶學反應特征被認為可以反映細胞的遺傳學特性和生物學性狀?，F(xiàn)有的資料表明，當細胞面臨病毒感染時，其具有天然免疫反應性質的生物學反應事實上是與其自身的生物學性狀相關的。其中細胞所產(chǎn)生的干擾素反應，在病毒疫苗制備技術工藝上又是一個具有重要意義的質量指標，而該指標與細胞增殖過程中的生物學活性狀態(tài)具有直接的相互聯(lián)系。因此，分析細胞酶活性特征與其在病毒感染時的干擾素反應強度，顯然對這類細胞用于疫苗制備時的技術研究具有重要的意義。因此本文采用多種細胞系，多代細胞，通過生化方法檢測細胞內(nèi)乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力變化以鑒定細胞的穩(wěn)定性。實驗結果表明，人胚肺二倍體細胞（KMB17細胞）和新型的人胚肺二倍體細胞（N0細胞）在細胞代次超過30代后，細胞內(nèi)的酶活力會發(fā)生一定的變化，乳酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力上升，超氧化物歧化酶的酶活力下降，表明這兩種細胞在細胞代次超過30代后，細胞的增殖、代謝等能力會下降，細胞穩(wěn)定性較差，不利于用于疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)。VERO細胞和HELA細胞隨著細胞代次增加酶活力無明顯變化，表明這兩種細胞在實驗所采用的細胞代次內(nèi)，細胞的增殖、代謝等能力基本保持穩(wěn)定。本文重點分析了各種酶活性指標的變化與細胞在RNA病毒和DNA病毒感染時所產(chǎn)生的干擾素反應的相互聯(lián)系，以及這些相互聯(lián)系所導致的病毒感染滴度的變化情況。做為在細胞核內(nèi)完成增殖和在細胞質內(nèi)完成增殖的HSV1病毒和EV71病毒感染人胚肺二倍體細胞KMB17、N0時，其引起IFNΑ的相對表達量與細胞的酶活力、細胞的生長狀態(tài)有很大的關系。當人胚肺二倍體細胞培養(yǎng)到第3天時，細胞酶活力處于上升階段，細胞的生長狀態(tài)較好，當細胞培養(yǎng)到第5天時，細胞酶活力處于穩(wěn)定狀態(tài)，細胞的生長狀態(tài)也維持相對穩(wěn)定，兩種病毒感染培養(yǎng)到第5天細胞引起細胞分泌的IFNΑ的相對表達量比感染培養(yǎng)到第3天細胞引起細胞分泌的IFNΑ的相對表達量高，而病毒滴度在感染過程中逐漸上升，但隨著干擾素分泌的增加而其增殖逐漸變低的事實，提示了人二倍體細胞在病毒增殖過程中所具有的容納限度，可能與干擾素的產(chǎn)生濃度相關。當兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天和第5天的HELA細胞時，其引起細胞分泌的IFNΑ的相對表達量與細胞的酶活力關系不大，且比感染其他種類細胞分泌的IFNΑ的相對表達量低，這提示了該細胞作為一種腫瘤細胞的非限制型特征。反之，兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天的VERO細胞引起細胞分泌的IFNΑ的相對表達量比感染培養(yǎng)到第5天細胞引起細胞分泌的IFNΑ的相對表達量高，且病毒滴度前者也高于后者。這一特征有別于人二倍體細胞，似乎提示了VERO細胞的生物學特性，這些通過研究病毒感染后引起細胞分泌的IFNΑ相對表達量的變化與細胞酶活力、細胞生長狀態(tài)之間的關系的工作，雖然這需要進一步的確證和分析，但相關的數(shù)據(jù)將又為疫苗的研究和制備提供相應的實驗依據(jù)。

簡介：DIFFERENCESBETWEENMALEANDE颯Ⅺ基IHYPOMESUSOLIDUSINDIVIDUALSANDITSEARLYBIOLOGYCHARACTERSRESEARCHADISSERTATIONSUBMITTEDTOTHEGRADUATESCH001OFHENANNOMALUNIVERSITYINP叭IALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFIORTHEDEGREEOFMASTEROFSCIENCELIXI口0ZHUSUPEI。、，ISORPROFQIAOZHIGANGMAY20LL摘要＼刪漲由塔崗水庫采回池沼公魚㈣PD掰船螂D塒淞性成熟個體，人工取卵、采精，經(jīng)干法授精獲得受精卵，受精卵經(jīng)人工孵化獲得池沼公魚的仔魚。試驗比較研究了池沼公魚雌、雄成熟個體形態(tài)特點，探討了不同溫度等條件下池沼公魚的胚胎發(fā)育、仔魚生長、攝食等生物學特征，其結果如下1池沼公魚雌、雄個體的生物學特點11池沼公魚個體較小，體長一般在69伽范圍內(nèi)。體呈紡錘形；各鰭無棘，背鰭兩個，第一背鰭鰭條為810枚，第二背鰭為脂鰭；胸鰭腹位；臀鰭鰭條1517枚；體披’銀白色細鱗；側線不完全。雌雄個體在體色、體型、可數(shù)和可量性狀方面差異不顯著。12框架結構1胸鰭至腹鰭長體長雌性3530士O085雄性3766士O145兩者比較，差異顯著尸O05；2腹鰭至臀鰭長體長雌性6408士O243雄性5129士O473兩者比較，差異顯著尸005；3背鰭至尾鰭長體長雌性2549士O049雄性2437士O082兩者比較，差異顯著P005。13豐滿系數(shù)雌性0744；雄性O778。14體長體重相關關系雌性Y86181567X產(chǎn)O878雄性V107271845XRO766式中Y表示體重單位G，X表示體長單位啪。1

簡介：點擊查看更多蛹蟲草多糖的分子結構及生物學活性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：結核病是一種古老的細菌性疫病，是由結核分枝桿菌MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS感染或者長期潛伏引起的嚴重危害人類和動物健康的傳染病。在世界范圍內(nèi)，大約有二十億人潛伏感染了結核分枝桿菌，造成了每年約兩百萬人的死亡，它仍然是引起發(fā)病率和死亡率的主要病原。2012年EUIHONGBYUN等人將結核分枝桿菌的分泌蛋白通過液相色譜法分離并收集，并用不同管數(shù)的蛋白處理DC細胞，發(fā)現(xiàn)RV0315蛋白可以通過激活NFΚB信號通路以及MAPK信號通路顯著性的誘導DC細胞的成熟，是一個新發(fā)現(xiàn)的潛在的免疫性抗原。為了解決結核分枝桿菌的耐藥性以及市場上現(xiàn)有疫苗效果的局限性這一現(xiàn)狀，我們需要探究新的結核疫苗候選分子的一些特性，因此開展了關于RV0315的結構和功能的研究。利用結構生物學平臺我們首次解析了RV0315的三維結構，并對它的功能以及發(fā)揮功能的機制進行了研究和探討。具體研究內(nèi)容如下RV0315屬于Β13葡聚糖酶家族。Β1，3葡聚糖酶屬于糖苷水解酶16家族，他們具有序列和結構的同源性?；谶@個共性，我們首先從NCBI數(shù)據(jù)庫中將目前已知結構和功能的所有Β1，3葡聚糖酶的氨基酸序列導出，并將它們與RV0315一起做了氨基酸的多序列比對，RV0315在序列上展示出與Β1，3葡聚糖酶較高的序列同源性，保守的兩個谷氨酸催化位點以及鈣離子結合位點都是存在的。通過序列比對我們發(fā)現(xiàn)RV0315屬于Β1，3葡聚糖酶家族。GH16家族的Β1，3葡聚糖酶還有一個特點就是結構的同源性也很高，基于Β1，3葡聚糖酶家族的這個共性，我們首先構建了H37RV株RV0315全長的表達質粒PET42BRV0315，利用大腸桿菌表達系統(tǒng)獲得了可溶性表達的蛋白。通過實驗室已有的晶體篩選試劑盒篩選和優(yōu)化得到一個分辨率達17A的晶體，收集數(shù)據(jù)并通過分子置換的方法解析了RV0315的結構。由RV0315的結構可以看出它符合Β1，3葡聚糖酶的結構特征，包括16個Β折疊形成的兩個Β片層，Β片層彎曲形成一個凹面，是一個催化活性中心兩個較短的Α螺旋和一個鈣離子。通過以上從序列和結構上分析，我們發(fā)現(xiàn)RV0315是一個Β1，3葡聚糖酶。RV0315是一個沒有活性的Β1，3葡聚糖酶。細菌產(chǎn)生的Β1，3葡聚糖酶都屬于糖苷水解酶16家族，所有的Β1，3葡聚糖酶都可以水解Β1，3糖苷鍵的糖，例如昆布多糖，少部分也可以水解Β1，31，4糖苷鍵的糖，例如大麥來源的Β葡聚糖。RV0315是一個Β1，3葡聚糖酶，所以我們通過DNS實驗測定了其對昆布多糖以及大麥來源的Β葡聚糖的水解活性。奇怪的是，RV0315既不能降解昆布多糖，同時對大麥來源的Β葡聚糖也沒有可檢測到的水解活性。從以上結果可知，RV0315是一個沒有活性的Β1，3葡聚糖酶。我們將目前已知結構和功能的GH16家族的Β1，3葡聚糖酶做了進化樹分析，結果顯示RV0315與海魚分枝桿菌的Β1，3葡聚糖酶（PDB號4PQ9）形成了一個獨立的進化分支。4PQ9的結構已經(jīng)解析，功能沒有相關的報道，相關文章對該基因的標注是Β1，3葡聚糖酶。我們合成了4PQ9基因并成功獲得了可溶性的蛋白，我們利用同樣的方法檢測了4PQ9的水解活性，結果表明4PQ9也是一個沒有活性的Β1，3葡聚糖酶。我們發(fā)現(xiàn)了GH16家族Β1，3葡聚糖酶中一個獨立的進化分支，這個分支是由兩個沒有活性的Β1，3葡聚糖酶組成。RV0315沒有多糖水解活性的分子機制。我們通過比對RV0315與海洋細菌的Β1，3葡聚糖酶PDB號4BOW的結構來解釋RV0315沒有水解活性的機制。4BOW對昆布多糖有很高的催化活性，同時也可以水解MLG。MLG是一種Β1，31，4葡聚糖，跟大麥來源的Β葡聚糖相似。通過結構比較我們發(fā)現(xiàn)，4BOW中2位以及3位跟多糖結合相關的氨基酸殘基在GH16家族Β1，3葡聚糖酶中都是保守的，但RV0315中都是缺失或者突變的，而1位的跟葡萄糖單位結合的氨基酸在RV0315中也是保守的。所以，目前所知道的RV0315唯一可以結合的分子就是乙二醇。乙二醇分子是在RV0315結構中發(fā)現(xiàn)的，結合的位置跟1位的葡萄糖單位所在的位置類似。從整體結構比較可以看出，RV0315的催化裂開口很大。由結構比較的結果可以看出RV0315由于結合底物相關的氨基酸的缺失或者突變使其催化裂的開口較大，導致RV0315不能結合多糖進而不能水解多糖。我們通過ITC實驗驗證了RV0315確實不能結合昆布多糖，而4BOWE269S可以結合多糖并呈現(xiàn)很好的擬合曲線。一個昆布多糖分子可以結合兩個4BOWE269S分子。RV0315的結構與其發(fā)揮免疫學功能的關系。RV0315雖然是一個沒有活性的Β1，3葡聚糖酶，但其兩個擔當催化作用的谷氨酸位點還是存在的。RV0315可能在長期進化過程中失去水解多糖的功能進而參與發(fā)揮免疫學功能。因為RV0315開口比較大，當結核分枝桿菌入侵機體時可能更容易暴露而受到免疫相關分子的攻擊，因此參與適應性免疫應答。為了驗證我們的推測，我們通過熒光素酶報告實驗來檢測RV0315以及突變體RV0315E176S、RV0315D289A對NFΚB信號通路的激活情況，RV0315以及RV0315D289A可以激活NFΚB信號通路并且呈劑量依賴性。而催化活性位點176位的突變體則不能激活NFΚB信號通路。此外，我們還用不同濃度的RV0315以及突變體蛋白處理DC細胞，檢測它們誘導DC細胞成熟的能力，結果跟熒光素酶報告實驗的結果相同，RV0315和RV0315D289A可以誘導DC細胞成熟，而RV0315E176S則不能誘導DC細胞的成熟。綜上所述，RV0315可能是從GH16家族的Β1，3葡聚糖酶進化而來，這個沒有活性的成員為GH16家族Β1，3葡聚糖酶提供了新的認識。我們研究發(fā)現(xiàn)結核分枝桿菌中沒有活性的Β1，3葡聚糖酶可以驅化TH1細胞免疫應答，176位谷氨酸是其發(fā)揮免疫學功能的關鍵氨基酸，這為結核疫苗的開發(fā)提供了新的依據(jù)。

簡介：安徽大學碩士學位論文新型雙端基硫配合物的結構與性質研究及其在生物學應用中的探索姓名周雯申請學位級別碩士專業(yè)無機化學指導教師田玉鵬吳杰穎201005ABSTRACTIIABSTRACTTHESTRUCTUREOFTERMINALSULFURCOMPLEXLIKEZNS2L,LASTHELIGANDISORIGINAL,FROMITSCOMPOSITIONWECANFINDTHATTHEOXIDATIONSTATEOFSULFURISNOT“2”ASUSUAL,WHICHWE’VEBEENTOLDSINCETHEBEGINNINGOFSTUDYINGCHEMISTRY,BUTIS“1”THERESEARCHABOUTITSSTRUCTUREWILLBEACHALLENGETOTHETRADITIONALOXIDATIONSTATETHEORYMEANWHILE,BECAUSEOFITSGOODFLUORESCENCEPROPERTYASWELLASTHELOWTOXICITY,CAUSEDITTOHAVEAPPLICATIONVALUEINBIOLOGYTHEMAINCONTENTSOFTHETHESISISBASEDONTHETERMINALSULFURCOMPLEXFIRSTOFALL,WEDESIGNEDANDSYNTHESIZEDTRIPYRIDINELIGANDSWITHSTRONGCOORDINATIONANDFUNCTIONALIZATIONABILITY,THEIRSTRUCTURESWERECHARACTERIZEDBYINFRAREDSPECTROSCOPY,NMRSPECTROSCOPYANDMSTHEIROPTICALPROPERTIESWERETESTEDBYUVVISIBLEABSORPTIONSPECTROSCOPY,SINGLEPHOTONFLUORESCENCESPECTROSCOPYANDTWOPHOTONFLUORESCENCESPECTROSCOPY,WHICHLAIDTHEFOUNDATIONFORTHESYNTHESISANDAPPLICATIONOFDOUBLETERMINALSULFURCOMPLEXSECONDLY,WESYNTHESIZEDANDCHARACTERIZEDTHETERMINALSULFURCOMPLEXESWITHTHEUSEOFSOLVOTHERMALMETHODANDTRIEDTOEXPLAINTHEOXIDATIONSTATEOFSTHEIROPTICALPROPERTIESANDAPPLICATIONSINBIOLOGYWERESTUDIEDFOREXAMPLE,THEMODEOFTHEIRINTERACTIONWITHDNA,WHETHERITCANBEUSEDASDNASTRUCTUREPROBEANDBIOLOGICALCELLIMAGINGTHIRD,USINGTWOSULFURSOFTHEDOUBLETERMINALSULFURCOMPLEXASTHEBRIDGES,WEDESIGNEDANDSYNTHESIZEDANEWCLASSOFRUCOMPLEXES,ITSPHOTOPHYSICALPROPERTIESANDTHEMECHANISMOFITSINTERACTIONWITHDNAWERESTUDIEDDFTHEINNOVATIONOFTHISTHESISHASTHEFOLLOWINGFOURPOINTSFIRST,THEORIGINALSYNTHESISMETHODUSETHENANOCRYSTALSOFMETALSALTSSUCHASZNSANDCDSASMATERIALSTOSYNTHESIZETHECOMPLEXESSECOND,NOVELCOMPLEXSTRUCTURESYNTHESISOFORIGINALTERMINALSULFURCOMPLEXESTHIRD,NEWIDEASOFTHESYNTHESISOFRUCOMPLEXESUSETHEABOVETERMINALSULFUR

簡介：桑黃是目前發(fā)現(xiàn)的生物抗癌領域功效較顯著的一種藥用真菌，其有效成分一般是從子實體中提取得到的子實體多糖。由于野生桑黃子實體被過度采摘，使野生資源瀕臨枯竭，加上其人工栽培技術尚不成熟等，遠遠不能滿足醫(yī)藥市場對其的需求。目前雖有人工培育出的子實體，但因技術不成熟，子實體的產(chǎn)量低，質量差，并且尚未能進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本文以開發(fā)利用桑黃這一新興的藥用菌資源，探明其子實體分化發(fā)育條件為目的，首先對8個不同來源桑黃菌株R、H、S6、S7、S8、S、W、S1菌絲體的生物學特性及生長條件進行了研究，在此基礎上對菌株R子實體的分化和發(fā)育生長進行探索研究，主要得出以下研究結果。通過對桑黃菌絲體生物學及培養(yǎng)條件的研究得出，桑黃斜面菌絲體生長較佳的培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200G，葡萄糖20G，硫酸鎂05G，瓊脂15～20G，維生素B110MG，加水定容至1000ML，PH值自然；較佳的生長條件為溫度27℃～28℃，暗室培養(yǎng)。對菌絲體的普通染色顯微觀察結果顯示，菌絲在生長到一定時期出現(xiàn)了橫隔和鎖狀聯(lián)合等特征結構，桑黃菌絲為管狀，有分支。對H和S兩個菌株彈射出的孢子顯微觀察結果顯示，兩個菌株孢子形態(tài)相似，均為卵圓形或橢圓形，有同心環(huán)，表面光滑，一端有一個小凸起，為萌發(fā)孔。吖啶橙對桑黃菌絲進行熒光染色時，染色條件以PH58～60，染色時間以4MIN為宜。由熒光染色結果可以清晰的看到管狀菌絲內(nèi)由綠色至橙紅色、紅色等不同顏色分布，頂端和橫隔處熒光較亮，說明此處DNA和RNA含量較高，這應該與這兩處生長、分裂較為旺盛有關系。對桑黃固體培養(yǎng)菌絲體基質中的羧甲基纖維素酶、漆酶、多酚氧化酶、愈創(chuàng)木酚酶、過氧化物酶等胞外酶的活性進行了測定，結果顯示在同一生長時期，每種酶酶活性不同，且同一種酶隨生長時期的變化，酶活性也發(fā)生變化，表明了桑黃菌絲體對纖維素及木質素兩種營養(yǎng)物質的利用情況存在差異。采用DNS法測定還原糖含量，選用苯酚硫酸法測定總糖含量。在整個固體培養(yǎng)過程中，總糖含量變化不是很大；還原糖含量變化出現(xiàn)兩個高峰期，分別在第17D和第25D。通過對桑黃固體培養(yǎng)過程的研究，得出桑黃固體菌絲體生長較佳的培養(yǎng)基配方為棉籽殼78％，麩皮20％，石膏15％，硫酸鎂02％，磷酸二氫鉀03％，料水比115；較佳的生長條件為溫度27℃～28℃，喑室培養(yǎng)。桑黃菌株R子實體較佳的分化及生長條件為晝夜溫差培養(yǎng)，空氣相對濕度90％～95％，及時通風換氣，每天早晚各通風一次，每次通風20MIN，自然散射光照。綜合驗證試驗結果表明在此條件下，菌絲生長旺盛，菌絲密，形成的原基數(shù)量較多；形成的子實體顏色鮮亮均一，質量好，畸形率低，71～85天即可成熟采摘。單株干重產(chǎn)量在25G～32G之間，平均干重約為285G袋，生物學產(chǎn)量約為891％。較單因素試驗中產(chǎn)量高。

簡介：東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學博B學位論文里德聚類分析可以看出，紫色和紅色首先聚在一起，然后和紅白相間的聚在一起，最后與白色一串紅聚在一起，此結果和表面紋飾的分析結果大致相同。證明花粉在遺傳上具有較高的相關性?？梢宰鳛榉诸惖幕局笜?。10對四種花色一串紅進行RAPD聚類圖分析，把4種花色一串紅劃分為兩大類，其聚類結果與孢粉學形態(tài)特征分類大致相同，因此，RAPD和孢粉學結合起來可作為一串紅親緣關系鑒定的一種有效手段。關鍵詞一串紅SAVIASPENDENSKERGAWL；生殖生物學孢粉學RAPDVII

簡介：分類號河南農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文論文題目英文題目密級ISOLATIONANDIDENTIEI￡蘭豎QNQ里PORCINEPARVOVIRUSA墜嬰王墜至豎S羔墮ITSB10LOGICALCHARA￡基RS衛(wèi)￡S學位申請人題』蟲導師王刖迭專業(yè)亟隨獸醫(yī)堂研究方向動物籩鎏痘蕉痘扭理壁隨圭論文提交日期學位授予日期定一一鑒一L一蠱一金一的一一掛宜猛丑南一掛河一堂壹塑病一生一羞緗一㈤糊必本論文受到下述項目資助國家高技術研究與發(fā)展計劃863項目NO2007AAL00606

簡介：密級論文編號中國農(nóng)業(yè)科學院學位論文日本血吸蟲日本血吸蟲SJC1QBP基因基因的克隆表達克隆表達及生物學功能研究及生物學功能研究CLONINGEXPRESSIONBIOLOGICALFUNCTIONSTUDYOFSCHISTOSOMAJAPONICUMC1QBP碩士研究生賈秉光賈秉光指導教師師傅志強傅志強研究員研究員申請學位類別獸醫(yī)碩士申請學位類別獸醫(yī)碩士專業(yè)領域名稱專業(yè)領域名稱獸醫(yī)獸醫(yī)培養(yǎng)單位位上海獸醫(yī)上海獸醫(yī)研究所研究所研究生院研究生院20120166年5月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學院或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時間年月日關于論文使用授權的聲明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學院有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即中國農(nóng)業(yè)科學院有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名時間年月日導師簽名時間年月日

簡介：結核病作為全球性的健康問題，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升態(tài)勢。分枝桿菌MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的最為重要的傳染性病原體之一，它能夠在宿主巨噬細胞中持續(xù)存活，每年引起八百萬人感染，其中有三百萬病人由于得不到合理的治療而死亡。此外，在過去40年以來，一直沒有開發(fā)出治療效果比異煙肼更優(yōu)的藥物。而多耐藥菌株MUTIDRUGRESISTANT，MDR的出現(xiàn)和廣泛傳播，以及與艾滋病的共同作用，使得結核病的疫情進一步惡化。開發(fā)更有效、更快速的抗結核新藥，徹底攻克結核病已勢在必行。結核桿菌的基因組含4000多個基因，其中有250個基因編碼脂肪酸代謝相關的酶，和大腸桿菌相比多了4倍有余。結核桿菌的細胞壁以肽聚糖為基本架構，共價結合阿拉伯半乳糖及分支菌酸。分支菌酸是自然界中最大的脂肪酸，它和結核桿菌的毒力、結核桿菌逃逸免疫系統(tǒng)攻擊的能力息息相關。另外，細胞壁所含的脂類約占細胞壁干重的60％等等，這些事實均說明了脂肪酸代謝對結核桿菌的重要性。丙二酰COAACP轉化酶MALONYCOAACPTRANSACYLASE，MCAT是脂肪酸代謝中的一個關鍵酶，催化MALONYLCOA形成MALONYLACP，后者進入脂肪酸碳鏈延長循環(huán)，每次增加2個碳原子。ACPACYLCARRIERPROTEIN是FASII系統(tǒng)中的小且酸性的蛋白，它在脂肪酸代謝中起著重要作用，與大分子脂肪酸的合成及結核細胞壁的裝配緊密相關。ACP與MCAT都是很好的抗結核藥物靶位的候選對象。本論文共克隆、表達、純化了結核桿菌的兩個MCAT和三個可能的ACP蛋白，并檢測了這些蛋白的一些生理生化功能及特性。在酶活測定中，我們了解到FABD和FABD2的性能相近，幾種二價陽離子對酶活的影響不大；RVL344轉錄的蛋白確實具有載酰功能，而RV0033可能在別的通路中發(fā)揮作用。RTPCR試驗闡明了兩個MCAT蛋白在結核桿菌侵入巨噬細胞后的轉錄情況，其中FABD的表達上調，而FABD2表達量減少，證實了結核桿菌兩個MCAT蛋白在結核病急性及持續(xù)感染中的重要性。通過WESTERN檢測，耐藥菌株感染的病人血清和敏感株病人血清中都具有ACPL344的抗原，說明了ACPL344的重要性及它作為結核診斷的輔助指標的可能。此外，我們還通過RVL344基因的定點突變試驗，驗證了ACPL344蛋白中一些序列的重要性與保守性。圓二色譜的測定，使我們得到了幾種蛋白的二級結構。為了獲得這些蛋白的三維結構，設計出活性小分子化合物，我們還與清華大學結構生物學實驗室合作，對這些蛋白進行了晶體生長的嘗試性實驗。最終得到兩個MCAT的晶體，其中FABD的分辨率在2A，而FABD2晶體的分辨率只有6A。最后，我們解析出FABD蛋白的晶體結構。雖然未能得到ACPL344的晶體結構，我們?nèi)杂猛茨＝ǖ姆椒?，得到了該蛋白模擬的三維結構，為設計有活性的小分子化合物打下良好基礎。

簡介：目的我們描述并且比較兩種不同方法獲得微血管內(nèi)皮細胞BRAINMICROVULARENDOTHELIALCELLS，BMECS的方法其目的是為了展現(xiàn)出不同方法獲得微血管內(nèi)皮細胞的生物學特性，以及探討這兩種方法在細胞生成上是否存在不同。材料和方法一、腦微血管內(nèi)皮細胞的原代提取和培養(yǎng)一種方法用機械和酶分解的方法處理腦組織，主要涉及密度離心和免疫磁珠純化等步驟，另一種方法包括機械分離，兩次酶消化，20％BSA和PERCOLL離心，加入完全培養(yǎng)基高糖DMEM、20％PDS、4UGML嘌呤霉素（僅應用2天）、100UGML肝素、4NGMLBFGF、10UGML內(nèi)皮細胞生長支持物、2MML一谷氨酰胺、100UML青霉素、100UGML鏈霉素以及025UGML兩性霉素B。12小時后首次換液以去除未貼壁的細胞及血管段放入37℃，5％CO2孵箱，每隔兩天換液一次。二、蛋白免疫印跡分析用刮刀將BMECS混成，溶于勻漿，溶于PBS以1000R離心5MIN。棄上清后加入裂解液，細胞溶液放置于冰上10MIN，震蕩1MIN后，15000G離心5MIN。收集上清，采用BCA試劑盒測試濃度。上樣后，跑膠，轉膜，脫脂奶粉室溫封閉2小時。TBST洗膜3次10MIN次，一抗孵育過夜，第二天辣根過氧化物酶孵育后上機發(fā)光。三、免疫熒光當BMECS長滿后，去除培養(yǎng)基，溶于1XPBS沖洗3次。預冷100％乙醇被用作兔抗大鼠血管第八因子抗體固定30分鐘，4％多聚甲醛用于固定兔抗大鼠CLAUDIN5固定劑，室溫下固定30MIN。PBS沖洗3次后，01％TRITONX100細胞膜打孔5MIN，PBS清洗后加入5％BSA室溫封閉30MIN。一抗用1％BSA封閉后在4℃下孵育過夜。熒光二抗（FITC異硫氰酸熒光素山羊抗兔IGG，TRITC四乙基若丹明異硫氰酸鹽山羊抗兔IGG）用1％BSA包含DAPI苯基吲哚藍色熒光5ΜGML稀釋并且樣品在37℃避光孵育半小時。四、體外血腦屏障的建立及通透性通過MILLICELLERS（電阻系統(tǒng)）得到的3天的初級電鍍來評估TEER。當BMECS聚集時，1ΜM熒光素鈉的DMEM加入到TRANSWELL系統(tǒng)的上面。計根據(jù)下層小室熒光鈉的吸光度，計算出單層BMECS的通透性。五、細胞內(nèi)鈣離子測定將細胞放入有含有FLUO3AM10ΜMOLML的DMEM中避光30分鐘，孵育后用ACSF沖洗掉過多的FLUO3AM。BK刺激后細胞內(nèi)CA2變化采用在共聚焦顯微鏡下在激發(fā)波長為488NM，發(fā)射波長為505NM的數(shù)值下進行測量，F(xiàn)0為細胞靜息狀態(tài)下的熒光變化，△F為變化后的數(shù)值與靜息狀態(tài)下的數(shù)值的比值，整個細胞的鈣離子變化為％△FF0。結果最終的的細胞通過內(nèi)皮的特殊抗原VONWILLEBRFACT和CLAUDINE5，跨內(nèi)皮電阻TRANSENDOTHELIALELECTRICALRESISTANCE，TEER，熒光蛋白滲透性和細胞內(nèi)CA2變化的測量來測定鑒定。最后我們從原代細胞中獲得了兩種生物學特性的細胞并且經(jīng)過鑒定均為微血管內(nèi)皮細胞，這兩種內(nèi)皮細胞在形態(tài)學、生態(tài)學特性、跨內(nèi)皮電阻、應用緩激肽后的反應和內(nèi)皮細胞的屏障作用均有所差異。結論緩激肽105M觸發(fā)原代腦微血管內(nèi)皮細胞鈣離子波，細胞外鈣離子是鈣離子峰的前提和必要條件此鈣離子波屬于鈣觸發(fā)鈣離子釋放機制。我們也發(fā)現(xiàn)兩種方法獲得的BEMCS在細胞形態(tài)、TEER、和應用BK后的反應上存在不同，可能是由于細胞的異質性。

簡介：第一部分目的比較潰瘍性結腸炎患者與無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65表達差異，探討其臨床意義。方法募集12名無器質性腸道疾病志愿者（男女各6名，平均年齡4613±1205歲）與16名潰瘍性結腸炎患者（男性患者10名，女性患者6名，平均年齡5042±1043歲），電子結腸鏡下取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。實時定量PCR法檢測其基因表達，免疫熒光染色檢測NFΚBP65蛋白表達強度，T檢驗分析兩組之間的差異。結果無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為053±024、210％±064％，潰瘍性結腸炎患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為519±337、1522％±316％，兩組之間差異具有統(tǒng)計學意義（P結論本文在前人基礎上再次證實NFΚBP65參與潰瘍性結腸炎的發(fā)病機制，以此為切入點進行深入研究可能為該病的診斷與治療帶來突破。第二部分目的比較潰瘍性結腸炎患者與結直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65表達差異，探討其臨床意義。方法12名無器質性腸道疾病志愿者、16名潰瘍性結腸炎患者及18名結直腸腺癌患者被納入實驗，電子結腸鏡或手術取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。逆轉錄聚核酶鏈反應法（RTPCR）檢測各組腸黏膜NFΚBP65MRNA的表達，免疫組化法檢測各組腸黏膜NFΚBP65蛋白表達強度，單因素方差分析三組之間的差異。結果無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為010±003、206％±070％，潰瘍性結腸炎患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為096±011、3616％±699％，結直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達量分別為042±077、954％±277％，三組之間差異具有統(tǒng)計學意義（P結論盡管炎癥與腫瘤存在某種聯(lián)系已在學界達成共識，課題組也觀察到結直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65的表達較無器質性腸道疾病志愿者增加，但其表達強度并非之前文獻報道的那么高，課題組認為抑制NFΚBP65的表達可能是治療潰瘍性結腸炎的較好思路，但不認為抑制NFΚBP65的表達能從根本上治療結直腸癌。第三部分目的比較分化程度不同的大腸癌患者與無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜血管緊張素Ⅱ（ANGIOTENSINⅡ，ANGⅡ）及其Ⅰ型受體（AT1R）表達差異，初步探討ANGIIAT1R信號通路與大腸癌之間的關系。方法腸鏡室募集大腸癌患者24名（病理學檢查證實其中9名為大腸高分化腺癌患者，9名為大腸中分化腺癌患者，6名為大腸低分化腺癌患者）及6名無器質性腸道疾病志愿者，電子結腸鏡下取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。免疫組化法檢測各組腸黏膜ANGIOTENSINⅡ及AT1R蛋白表達強度，單因素方差分析各組之間的差異。結果大腸腺癌患者腸黏膜ANGⅡ和AT1R的表達較無器質性腸道疾病志愿者腸黏膜ANGⅡ和AT1R表達明顯增強（P005）；中、低分化組較高分化組AT1R表達增加（P結論ANGIIAT1R信號通路參與大腸癌的發(fā)病過程，可能成為大腸癌治療的新靶點。第四部分目的探討難治性肛瘺的中西醫(yī)結合治療方法并初步總結其療效。方法病例納入標準為同意接受本中西醫(yī)結合治療方法的難治性低位肛瘺患者（外口離肛緣2CM以上的患者），剔除以下病例一些能利用肛瘺切開術輕易治愈的單純性肛瘺患者、直腸陰道瘺患者、直腸膀胱瘺患者、炎癥性腸病患者、肛門先天異?；颊?、有肛門失禁病史患者及有手術禁忌癥的患者。手術主要器械為瘺管銑刀，術后主要方藥為拔毒生肌散與黃連膏，治療簡要操作步驟如下肛周常規(guī)消毒→麻醉滿意→鋪無菌巾→肛管內(nèi)碘伏棉球消毒→擴肛并確認病情→探針由外口探入從內(nèi)口穿出→在與內(nèi)口對應的距肛緣15CM處作一與瘺管走行方向一致的梭形切口作為新外口→沿探針切開新外口與內(nèi)口之間的皮膚、皮下組織及瘺管→組織剪修整所切的皮肉組織呈“V”狀敞開→銑刀桿循探針由外口探入從開窗處穿出→退出探針→銑刀頭安裝在肛內(nèi)由開窗處穿出的銑刀桿上→位于外口之銑刀桿尾部連接微型電機→微型電機接通電源的同時術者持電機緩緩拉出轉動的銑刀→適當撐擴殘余瘺道→再次將探針從外口探入開窗處探出→利用探針將引流條引入殘存瘺道→每日雙氧水替硝唑生理鹽水沖洗傷口→早期傷口引流物渾濁階段，用蘸有拔毒生肌散的凡士林紗條引流；后期傷口引流物清稀階段，用蘸有黃連膏的凡士林紗條引流→適時拔除引流條。結果2009年8月至2009年11月間，課題組運用本中西醫(yī)結合療法治療8例低位單純性肛瘺患者及6例低位復雜性肛瘺患者（男12名，女2名，平均年齡355±1287歲），隨訪半年結果顯示1例未堅持換藥的患者術后1月復發(fā)，其他13例患者均痊愈；平均住院日為7天，患者傷口愈合時間為4143±610天；無1例患者出現(xiàn)術中術后嚴重并發(fā)癥。結論本中西醫(yī)結合療法之手術部分一方面清除了感染的肛腺并作一“V”型切口至肛緣，最大限度的保證術后不復發(fā)；另一方面機械化的隧道式切除瘺管壁肉芽組織而非全程切開瘺道，操作簡單、高效、微創(chuàng)；術后換藥階段融入辨證換藥理念，早期利用蘸有提膿祛腐方藥的凡士林紗條引流，后期用蘸有清熱解毒、消腫止痛方藥的凡士林紗條引流，確保腐去新生。早期臨床試驗結果顯示本中西醫(yī)結合療法是治療難治性肛瘺的一個較佳選擇，其療效好、創(chuàng)傷小，值得大力探索并加以推廣。