簡(jiǎn)介：國內(nèi)圖書分類號(hào)只9多F國際圖書分類號(hào)’年姓西南交通大學(xué)研究生學(xué)位論文三角葉黃連的生物學(xué)特性和生藥學(xué)研究專二零一零年十一月十五ET密級(jí)公開西南交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)西南交通大學(xué)可以將本論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于1保密口，在年解密后適用本授權(quán)書；2不保密團(tuán)，使用本授權(quán)書。請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√，’學(xué)讎文儲(chǔ)虢務(wù)鋒。指刪讎日期占叼口IT‘O。日期≥DFD。FF；D

簡(jiǎn)介：密級(jí)論文編號(hào)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文L型鴨肝炎病毒中國流行株生物學(xué)特性相關(guān)研究MOLECULARCHARACTERISTICSOFDUCKHEPATITISVIRUS1ISOLATEDINCHINA博士研究生劉曉麗指導(dǎo)教師孔憲剛研究員申請(qǐng)學(xué)位類別農(nóng)學(xué)博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向動(dòng)物病毒分子生物學(xué)及分子免疫學(xué)培養(yǎng)單位中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院哈爾濱獸醫(yī)研究所提交日期2011年6月中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表論文題目I型鴨肝炎病毒中國流行株生物學(xué)特性相關(guān)研究動(dòng)物病毒分子生物學(xué)及分子論文作者劉曉麗專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向免疫學(xué)指導(dǎo)教師孔憲剛研究員培養(yǎng)單位研究所、中心哈爾濱獸醫(yī)研究所姓名職稱碩博單位專業(yè)簽名碩導(dǎo)口＼評(píng)博導(dǎo)口閱碩導(dǎo)口‘＼博導(dǎo)口人＼碩導(dǎo)口博導(dǎo)口放R1辯碩導(dǎo)口磚廡L主李慶章教授東北農(nóng)業(yè)大學(xué)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)席博導(dǎo)■碩導(dǎo)口鋤移厶翁長(zhǎng)江研究員哈爾濱獸醫(yī)研究所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)一碩導(dǎo)口／勁于力研究員哈爾濱獸醫(yī)研究所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)。博導(dǎo)一放您弛口碩導(dǎo)口中科院昆明動(dòng)物研究張華堂研究員博導(dǎo)一所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)辯扈榮良教授碩導(dǎo)口序羞分委博導(dǎo)■軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)華育平教授碩導(dǎo)口鐋口博導(dǎo)■東北林業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)貝碩導(dǎo)口澮炊涂長(zhǎng)春教授軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)■碩導(dǎo)口一J／／博導(dǎo)口會(huì)議記錄秘書王永強(qiáng)論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2011年6月14同哈爾濱獸醫(yī)研究所學(xué)術(shù)報(bào)告廳

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文蛹蟲草的生物學(xué)特性及抗衰老功效研究姓名王奇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師梁運(yùn)祥201009華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2010屆碩士研究生學(xué)位論文ABSTRACTTHISSTUDYFOCUSEDONCORDYCEPSMILITARIS，AFAMOUSTRADITIONALCHINESEEDIBLEANDMEDICINALMUSHROOM，ITHASAVERYHIGHUTILIZATIONVALUEWECOLLECTED4WILDCORDYCEPSMILITARISFROMFUSHUNTHEOPFIONALCULTUREREQUIREMENTSFORCORDYCEPSMILITARISFRUITBODYANDMYCELIUMWEREINVESTIGATEDINORDERTOESTABLISHED觚INTEGRATEDMETHODOFGOODSTRAINSSELECTIONANDUSINGTHESTRAINSELECTEDASTHEPARENTSTRAINSTOCARRYOUTANTIAGINGEFFECTSOFCORDYCEPSMILIMRFIRSTOFALL，THEDIFFERENTSTRAINSWERECULTUREDINDIFFERENTNUTRITIONALEONDITIONSCARBONSOURCE，NITROGENSOURCE，PROPORTIONOFNUTRIENTLIQUIDANDMATERIAL，ETCANDENVIRONMENTALFACTORSTEMPERATURE，HUMIDITYLIGHT，VENTING，ETCTHATWEREISOLATEDFROMWILDCORDYCEPSMILITARIS，ANDTHEDIFFERENTTRAININGMETHODSRICESOLIDMEDIUM，SUBSURFACEFERMENTATION，ETCWEREUSEDFORCORDYCEPSMILIMRCULTIVATION，ANDTHENWEANALYZEDFUNCTIONALCOMPONENTSCORDYCEPICPOLYSACCHARIDE，AMINOACIDCORDYCEPINCORDYCEPICACIDSODETCOFDIFFERENTCORDYCEPSMILITARISSAMPLESWBESTABLISHEDANINTEGRATEDSTRAINSSELECTIONMETHODANDANOPTIMALCULTIVATIONMETHODOFCORDYCEPSMILITARTHERESULTSINDICATED也ATNO1WASTHEGOODSTRAINSWIMHIGHYIELDOFFRUITBODYANDMYCELIUMANDHIGHCONTENTOFFUNCTIONALCOMPONENTSITISTHEOPTIMALCULTURECONDITIONSFORFRUITBODYOFCORDYCEPSMILITARISTHEOPTIMALCARBONSOURCEWASSTARCHANDTHEOPTIMALNITROGENSOURCEWASPEPTONE，THEOPTIMALPROPORTIONOFNUTRIENTLIQUIDANDRICEWAS11THEOPTIMALCULTURETEMPERATUREWASAT22℃一25℃ANDTHEOPTIMALRELATIVEHUMIDITYWASAT65％一70％THEMYCELIUMOFCORDYCEPSMILITARISCOULDWELLGROWIN也EDARKGIVENILLUMINATIONSTIMULATIONAFTERTHEMYCELIUMHADHADENOUGHCULTUREMEDIUM，WHICHWOULDGUIDETHEFRUITBODY’SFORMINGTHEOPTIMALCULTURETEMPERATUREWASAT13℃25℃ANDTHEOPTIMALRELATIVEHUMIDITYWASAT70％75％，VENTING，LIGHTINGANDTEMPERATURESTIMULATIONWOULDPROMOTETHEGROWTHOFFRUITBODYITISTHEOPTIMALCULTURECONDITIONSOFSUBSURFACEFERMENTATIONFORMYCELIUMOFCORDYCEPSMILITARISTHEOPTIMALCARBONWASGLUCOSEANDTHEOPTIMALNITROGENSOURCEWASPEPTONE血EINOCULATIONAMOUNTOFLIQUIDTRAINSWAS5％，THECELLAGEOFLIQUIDTRAINSWAS48HTHEFILLINGLIQUIDOFFERMENTATIONBORICWASLOOMF250ML，INITIALPHWAS7075，THESHAKERRATEWAS150R／MINTHECULTURETEMPERATUREWAS22℃24℃THEFERMENTATIONTIMEWAS76HSELECTED也ENO1STRAINASTHEPARENTSTRAINSTOCULTUREFRUITBODYANDMYCELIUMANDUSEDTHEFRUITBODVANDMYCELIUMTOSTUDYANTIAGINGEFFECTSOFCORDYCEPSMILITARISTHEENDURANCETESTTHEREACTIONSENSITIVITYTESTANDTHEGERMCELLVIABILITYTESTWERECARRIEDOUTWITHMICE，THEOXYGENFREERADICALSREMOVALTESTWASCARRIEDOUTWITHOLDRATS，ANDSTUDIEDTHESCAVENGINGACTIONOFHYDROXYLFLEERADICALOFTHEWILDANDTHECULTIVATEDCORDYCEPSMILITARIS111ERESULTSINDICATEDTHATTHECULTIVATEDCORDYCEPSMILITARISHASOBVIOUSANTIAGINGEFFECTSANDGOODPROSPECTSFORDEVELOPMENTKEYWORDSCORDYCEPSMILITAR；FRUITBODYMYCELIUM；SUBSURFACEFERMENTATION；OXYGENFREERADICAL；ANTIAGINGEFFECT2

簡(jiǎn)介：在病毒性疫苗的研究開發(fā)工作中，人二倍體細(xì)胞作為病毒抗原的制備基質(zhì)是整個(gè)疫苗研發(fā)及生產(chǎn)質(zhì)量控制的首要選擇。對(duì)作為疫苗制備基質(zhì)的人二倍體細(xì)胞的遺傳穩(wěn)定性及其病毒感染生物學(xué)反應(yīng)特征的相關(guān)分析，將為病毒疫苗的研究及開發(fā)包括疫苗安全性的研究提供更為豐富的資料。從細(xì)胞生物學(xué)的角度看，細(xì)胞特定酶學(xué)反應(yīng)特征被認(rèn)為可以反映細(xì)胞的遺傳學(xué)特性和生物學(xué)性狀?，F(xiàn)有的資料表明，當(dāng)細(xì)胞面臨病毒感染時(shí)，其具有天然免疫反應(yīng)性質(zhì)的生物學(xué)反應(yīng)事實(shí)上是與其自身的生物學(xué)性狀相關(guān)的。其中細(xì)胞所產(chǎn)生的干擾素反應(yīng)，在病毒疫苗制備技術(shù)工藝上又是一個(gè)具有重要意義的質(zhì)量指標(biāo)，而該指標(biāo)與細(xì)胞增殖過程中的生物學(xué)活性狀態(tài)具有直接的相互聯(lián)系。因此，分析細(xì)胞酶活性特征與其在病毒感染時(shí)的干擾素反應(yīng)強(qiáng)度，顯然對(duì)這類細(xì)胞用于疫苗制備時(shí)的技術(shù)研究具有重要的意義。因此本文采用多種細(xì)胞系，多代細(xì)胞，通過生化方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力變化以鑒定細(xì)胞的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，人胚肺二倍體細(xì)胞（KMB17細(xì)胞）和新型的人胚肺二倍體細(xì)胞（N0細(xì)胞）在細(xì)胞代次超過30代后，細(xì)胞內(nèi)的酶活力會(huì)發(fā)生一定的變化，乳酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力上升，超氧化物歧化酶的酶活力下降，表明這兩種細(xì)胞在細(xì)胞代次超過30代后，細(xì)胞的增殖、代謝等能力會(huì)下降，細(xì)胞穩(wěn)定性較差，不利于用于疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)。VERO細(xì)胞和HELA細(xì)胞隨著細(xì)胞代次增加酶活力無明顯變化，表明這兩種細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)所采用的細(xì)胞代次內(nèi)，細(xì)胞的增殖、代謝等能力基本保持穩(wěn)定。本文重點(diǎn)分析了各種酶活性指標(biāo)的變化與細(xì)胞在RNA病毒和DNA病毒感染時(shí)所產(chǎn)生的干擾素反應(yīng)的相互聯(lián)系，以及這些相互聯(lián)系所導(dǎo)致的病毒感染滴度的變化情況。做為在細(xì)胞核內(nèi)完成增殖和在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)完成增殖的HSV1病毒和EV71病毒感染人胚肺二倍體細(xì)胞KMB17、N0時(shí)，其引起IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量與細(xì)胞的酶活力、細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)有很大的關(guān)系。當(dāng)人胚肺二倍體細(xì)胞培養(yǎng)到第3天時(shí)，細(xì)胞酶活力處于上升階段，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)較好，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)到第5天時(shí)，細(xì)胞酶活力處于穩(wěn)定狀態(tài)，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也維持相對(duì)穩(wěn)定，兩種病毒感染培養(yǎng)到第5天細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量比感染培養(yǎng)到第3天細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量高，而病毒滴度在感染過程中逐漸上升，但隨著干擾素分泌的增加而其增殖逐漸變低的事實(shí)，提示了人二倍體細(xì)胞在病毒增殖過程中所具有的容納限度，可能與干擾素的產(chǎn)生濃度相關(guān)。當(dāng)兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天和第5天的HELA細(xì)胞時(shí)，其引起細(xì)胞分泌的IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量與細(xì)胞的酶活力關(guān)系不大，且比感染其他種類細(xì)胞分泌的IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量低，這提示了該細(xì)胞作為一種腫瘤細(xì)胞的非限制型特征。反之，兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天的VERO細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量比感染培養(yǎng)到第5天細(xì)胞引起細(xì)胞分泌的IFNΑ的相對(duì)表達(dá)量高，且病毒滴度前者也高于后者。這一特征有別于人二倍體細(xì)胞，似乎提示了VERO細(xì)胞的生物學(xué)特性，這些通過研究病毒感染后引起細(xì)胞分泌的IFNΑ相對(duì)表達(dá)量的變化與細(xì)胞酶活力、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)之間的關(guān)系的工作，雖然這需要進(jìn)一步的確證和分析，但相關(guān)的數(shù)據(jù)將又為疫苗的研究和制備提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：DIFFERENCESBETWEENMALEANDE颯Ⅺ基IHYPOMESUSOLIDUSINDIVIDUALSANDITSEARLYBIOLOGYCHARACTERSRESEARCHADISSERTATIONSUBMITTEDTOTHEGRADUATESCH001OFHENANNOMALUNIVERSITYINP叭IALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFIORTHEDEGREEOFMASTEROFSCIENCELIXI口0ZHUSUPEI。、，ISORPROFQIAOZHIGANGMAY20LL摘要＼刪漲由塔崗水庫采回池沼公魚㈣PD掰船螂D塒淞性成熟個(gè)體，人工取卵、采精，經(jīng)干法授精獲得受精卵，受精卵經(jīng)人工孵化獲得池沼公魚的仔魚。試驗(yàn)比較研究了池沼公魚雌、雄成熟個(gè)體形態(tài)特點(diǎn)，探討了不同溫度等條件下池沼公魚的胚胎發(fā)育、仔魚生長(zhǎng)、攝食等生物學(xué)特征，其結(jié)果如下1池沼公魚雌、雄個(gè)體的生物學(xué)特點(diǎn)11池沼公魚個(gè)體較小，體長(zhǎng)一般在69伽范圍內(nèi)。體呈紡錘形；各鰭無棘，背鰭兩個(gè)，第一背鰭鰭條為810枚，第二背鰭為脂鰭；胸鰭腹位；臀鰭鰭條1517枚；體披’銀白色細(xì)鱗；側(cè)線不完全。雌雄個(gè)體在體色、體型、可數(shù)和可量性狀方面差異不顯著。12框架結(jié)構(gòu)1胸鰭至腹鰭長(zhǎng)體長(zhǎng)雌性3530士O085雄性3766士O145兩者比較，差異顯著尸O05；2腹鰭至臀鰭長(zhǎng)體長(zhǎng)雌性6408士O243雄性5129士O473兩者比較，差異顯著尸005；3背鰭至尾鰭長(zhǎng)體長(zhǎng)雌性2549士O049雄性2437士O082兩者比較，差異顯著P005。13豐滿系數(shù)雌性0744；雄性O(shè)778。14體長(zhǎng)體重相關(guān)關(guān)系雌性Y86181567X產(chǎn)O878雄性V107271845XRO766式中Y表示體重單位G，X表示體長(zhǎng)單位啪。1

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簡(jiǎn)介：結(jié)核病是一種古老的細(xì)菌性疫病，是由結(jié)核分枝桿菌MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS感染或者長(zhǎng)期潛伏引起的嚴(yán)重危害人類和動(dòng)物健康的傳染病。在世界范圍內(nèi)，大約有二十億人潛伏感染了結(jié)核分枝桿菌，造成了每年約兩百萬人的死亡，它仍然是引起發(fā)病率和死亡率的主要病原。2012年EUIHONGBYUN等人將結(jié)核分枝桿菌的分泌蛋白通過液相色譜法分離并收集，并用不同管數(shù)的蛋白處理DC細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)RV0315蛋白可以通過激活NFΚB信號(hào)通路以及MAPK信號(hào)通路顯著性的誘導(dǎo)DC細(xì)胞的成熟，是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的潛在的免疫性抗原。為了解決結(jié)核分枝桿菌的耐藥性以及市場(chǎng)上現(xiàn)有疫苗效果的局限性這一現(xiàn)狀，我們需要探究新的結(jié)核疫苗候選分子的一些特性，因此開展了關(guān)于RV0315的結(jié)構(gòu)和功能的研究。利用結(jié)構(gòu)生物學(xué)平臺(tái)我們首次解析了RV0315的三維結(jié)構(gòu)，并對(duì)它的功能以及發(fā)揮功能的機(jī)制進(jìn)行了研究和探討。具體研究?jī)?nèi)容如下RV0315屬于Β13葡聚糖酶家族。Β1，3葡聚糖酶屬于糖苷水解酶16家族，他們具有序列和結(jié)構(gòu)的同源性?；谶@個(gè)共性，我們首先從NCBI數(shù)據(jù)庫中將目前已知結(jié)構(gòu)和功能的所有Β1，3葡聚糖酶的氨基酸序列導(dǎo)出，并將它們與RV0315一起做了氨基酸的多序列比對(duì)，RV0315在序列上展示出與Β1，3葡聚糖酶較高的序列同源性，保守的兩個(gè)谷氨酸催化位點(diǎn)以及鈣離子結(jié)合位點(diǎn)都是存在的。通過序列比對(duì)我們發(fā)現(xiàn)RV0315屬于Β1，3葡聚糖酶家族。GH16家族的Β1，3葡聚糖酶還有一個(gè)特點(diǎn)就是結(jié)構(gòu)的同源性也很高，基于Β1，3葡聚糖酶家族的這個(gè)共性，我們首先構(gòu)建了H37RV株RV0315全長(zhǎng)的表達(dá)質(zhì)粒PET42BRV0315，利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)獲得了可溶性表達(dá)的蛋白。通過實(shí)驗(yàn)室已有的晶體篩選試劑盒篩選和優(yōu)化得到一個(gè)分辨率達(dá)17A的晶體，收集數(shù)據(jù)并通過分子置換的方法解析了RV0315的結(jié)構(gòu)。由RV0315的結(jié)構(gòu)可以看出它符合Β1，3葡聚糖酶的結(jié)構(gòu)特征，包括16個(gè)Β折疊形成的兩個(gè)Β片層，Β片層彎曲形成一個(gè)凹面，是一個(gè)催化活性中心兩個(gè)較短的Α螺旋和一個(gè)鈣離子。通過以上從序列和結(jié)構(gòu)上分析，我們發(fā)現(xiàn)RV0315是一個(gè)Β1，3葡聚糖酶。RV0315是一個(gè)沒有活性的Β1，3葡聚糖酶。細(xì)菌產(chǎn)生的Β1，3葡聚糖酶都屬于糖苷水解酶16家族，所有的Β1，3葡聚糖酶都可以水解Β1，3糖苷鍵的糖，例如昆布多糖，少部分也可以水解Β1，31，4糖苷鍵的糖，例如大麥來源的Β葡聚糖。RV0315是一個(gè)Β1，3葡聚糖酶，所以我們通過DNS實(shí)驗(yàn)測(cè)定了其對(duì)昆布多糖以及大麥來源的Β葡聚糖的水解活性。奇怪的是，RV0315既不能降解昆布多糖，同時(shí)對(duì)大麥來源的Β葡聚糖也沒有可檢測(cè)到的水解活性。從以上結(jié)果可知，RV0315是一個(gè)沒有活性的Β1，3葡聚糖酶。我們將目前已知結(jié)構(gòu)和功能的GH16家族的Β1，3葡聚糖酶做了進(jìn)化樹分析，結(jié)果顯示RV0315與海魚分枝桿菌的Β1，3葡聚糖酶（PDB號(hào)4PQ9）形成了一個(gè)獨(dú)立的進(jìn)化分支。4PQ9的結(jié)構(gòu)已經(jīng)解析，功能沒有相關(guān)的報(bào)道，相關(guān)文章對(duì)該基因的標(biāo)注是Β1，3葡聚糖酶。我們合成了4PQ9基因并成功獲得了可溶性的蛋白，我們利用同樣的方法檢測(cè)了4PQ9的水解活性，結(jié)果表明4PQ9也是一個(gè)沒有活性的Β1，3葡聚糖酶。我們發(fā)現(xiàn)了GH16家族Β1，3葡聚糖酶中一個(gè)獨(dú)立的進(jìn)化分支，這個(gè)分支是由兩個(gè)沒有活性的Β1，3葡聚糖酶組成。RV0315沒有多糖水解活性的分子機(jī)制。我們通過比對(duì)RV0315與海洋細(xì)菌的Β1，3葡聚糖酶PDB號(hào)4BOW的結(jié)構(gòu)來解釋RV0315沒有水解活性的機(jī)制。4BOW對(duì)昆布多糖有很高的催化活性，同時(shí)也可以水解MLG。MLG是一種Β1，31，4葡聚糖，跟大麥來源的Β葡聚糖相似。通過結(jié)構(gòu)比較我們發(fā)現(xiàn)，4BOW中2位以及3位跟多糖結(jié)合相關(guān)的氨基酸殘基在GH16家族Β1，3葡聚糖酶中都是保守的，但RV0315中都是缺失或者突變的，而1位的跟葡萄糖單位結(jié)合的氨基酸在RV0315中也是保守的。所以，目前所知道的RV0315唯一可以結(jié)合的分子就是乙二醇。乙二醇分子是在RV0315結(jié)構(gòu)中發(fā)現(xiàn)的，結(jié)合的位置跟1位的葡萄糖單位所在的位置類似。從整體結(jié)構(gòu)比較可以看出，RV0315的催化裂開口很大。由結(jié)構(gòu)比較的結(jié)果可以看出RV0315由于結(jié)合底物相關(guān)的氨基酸的缺失或者突變使其催化裂的開口較大，導(dǎo)致RV0315不能結(jié)合多糖進(jìn)而不能水解多糖。我們通過ITC實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了RV0315確實(shí)不能結(jié)合昆布多糖，而4BOWE269S可以結(jié)合多糖并呈現(xiàn)很好的擬合曲線。一個(gè)昆布多糖分子可以結(jié)合兩個(gè)4BOWE269S分子。RV0315的結(jié)構(gòu)與其發(fā)揮免疫學(xué)功能的關(guān)系。RV0315雖然是一個(gè)沒有活性的Β1，3葡聚糖酶，但其兩個(gè)擔(dān)當(dāng)催化作用的谷氨酸位點(diǎn)還是存在的。RV0315可能在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中失去水解多糖的功能進(jìn)而參與發(fā)揮免疫學(xué)功能。因?yàn)镽V0315開口比較大，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌入侵機(jī)體時(shí)可能更容易暴露而受到免疫相關(guān)分子的攻擊，因此參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答。為了驗(yàn)證我們的推測(cè)，我們通過熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)RV0315以及突變體RV0315E176S、RV0315D289A對(duì)NFΚB信號(hào)通路的激活情況，RV0315以及RV0315D289A可以激活NFΚB信號(hào)通路并且呈劑量依賴性。而催化活性位點(diǎn)176位的突變體則不能激活NFΚB信號(hào)通路。此外，我們還用不同濃度的RV0315以及突變體蛋白處理DC細(xì)胞，檢測(cè)它們誘導(dǎo)DC細(xì)胞成熟的能力，結(jié)果跟熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相同，RV0315和RV0315D289A可以誘導(dǎo)DC細(xì)胞成熟，而RV0315E176S則不能誘導(dǎo)DC細(xì)胞的成熟。綜上所述，RV0315可能是從GH16家族的Β1，3葡聚糖酶進(jìn)化而來，這個(gè)沒有活性的成員為GH16家族Β1，3葡聚糖酶提供了新的認(rèn)識(shí)。我們研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌中沒有活性的Β1，3葡聚糖酶可以驅(qū)化TH1細(xì)胞免疫應(yīng)答，176位谷氨酸是其發(fā)揮免疫學(xué)功能的關(guān)鍵氨基酸，這為結(jié)核疫苗的開發(fā)提供了新的依據(jù)。

簡(jiǎn)介：安徽大學(xué)碩士學(xué)位論文新型雙端基硫配合物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)研究及其在生物學(xué)應(yīng)用中的探索姓名周雯申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)無機(jī)化學(xué)指導(dǎo)教師田玉鵬吳杰穎201005ABSTRACTIIABSTRACTTHESTRUCTUREOFTERMINALSULFURCOMPLEXLIKEZNS2L,LASTHELIGANDISORIGINAL,FROMITSCOMPOSITIONWECANFINDTHATTHEOXIDATIONSTATEOFSULFURISNOT“2”ASUSUAL,WHICHWE’VEBEENTOLDSINCETHEBEGINNINGOFSTUDYINGCHEMISTRY,BUTIS“1”THERESEARCHABOUTITSSTRUCTUREWILLBEACHALLENGETOTHETRADITIONALOXIDATIONSTATETHEORYMEANWHILE,BECAUSEOFITSGOODFLUORESCENCEPROPERTYASWELLASTHELOWTOXICITY,CAUSEDITTOHAVEAPPLICATIONVALUEINBIOLOGYTHEMAINCONTENTSOFTHETHESISISBASEDONTHETERMINALSULFURCOMPLEXFIRSTOFALL,WEDESIGNEDANDSYNTHESIZEDTRIPYRIDINELIGANDSWITHSTRONGCOORDINATIONANDFUNCTIONALIZATIONABILITY,THEIRSTRUCTURESWERECHARACTERIZEDBYINFRAREDSPECTROSCOPY,NMRSPECTROSCOPYANDMSTHEIROPTICALPROPERTIESWERETESTEDBYUVVISIBLEABSORPTIONSPECTROSCOPY,SINGLEPHOTONFLUORESCENCESPECTROSCOPYANDTWOPHOTONFLUORESCENCESPECTROSCOPY,WHICHLAIDTHEFOUNDATIONFORTHESYNTHESISANDAPPLICATIONOFDOUBLETERMINALSULFURCOMPLEXSECONDLY,WESYNTHESIZEDANDCHARACTERIZEDTHETERMINALSULFURCOMPLEXESWITHTHEUSEOFSOLVOTHERMALMETHODANDTRIEDTOEXPLAINTHEOXIDATIONSTATEOFSTHEIROPTICALPROPERTIESANDAPPLICATIONSINBIOLOGYWERESTUDIEDFOREXAMPLE,THEMODEOFTHEIRINTERACTIONWITHDNA,WHETHERITCANBEUSEDASDNASTRUCTUREPROBEANDBIOLOGICALCELLIMAGINGTHIRD,USINGTWOSULFURSOFTHEDOUBLETERMINALSULFURCOMPLEXASTHEBRIDGES,WEDESIGNEDANDSYNTHESIZEDANEWCLASSOFRUCOMPLEXES,ITSPHOTOPHYSICALPROPERTIESANDTHEMECHANISMOFITSINTERACTIONWITHDNAWERESTUDIEDDFTHEINNOVATIONOFTHISTHESISHASTHEFOLLOWINGFOURPOINTSFIRST,THEORIGINALSYNTHESISMETHODUSETHENANOCRYSTALSOFMETALSALTSSUCHASZNSANDCDSASMATERIALSTOSYNTHESIZETHECOMPLEXESSECOND,NOVELCOMPLEXSTRUCTURESYNTHESISOFORIGINALTERMINALSULFURCOMPLEXESTHIRD,NEWIDEASOFTHESYNTHESISOFRUCOMPLEXESUSETHEABOVETERMINALSULFUR

簡(jiǎn)介：桑黃是目前發(fā)現(xiàn)的生物抗癌領(lǐng)域功效較顯著的一種藥用真菌，其有效成分一般是從子實(shí)體中提取得到的子實(shí)體多糖。由于野生桑黃子實(shí)體被過度采摘，使野生資源瀕臨枯竭，加上其人工栽培技術(shù)尚不成熟等，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足醫(yī)藥市場(chǎng)對(duì)其的需求。目前雖有人工培育出的子實(shí)體，但因技術(shù)不成熟，子實(shí)體的產(chǎn)量低，質(zhì)量差，并且尚未能進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本文以開發(fā)利用桑黃這一新興的藥用菌資源，探明其子實(shí)體分化發(fā)育條件為目的，首先對(duì)8個(gè)不同來源桑黃菌株R、H、S6、S7、S8、S、W、S1菌絲體的生物學(xué)特性及生長(zhǎng)條件進(jìn)行了研究，在此基礎(chǔ)上對(duì)菌株R子實(shí)體的分化和發(fā)育生長(zhǎng)進(jìn)行探索研究，主要得出以下研究結(jié)果。通過對(duì)桑黃菌絲體生物學(xué)及培養(yǎng)條件的研究得出，桑黃斜面菌絲體生長(zhǎng)較佳的培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200G，葡萄糖20G，硫酸鎂05G，瓊脂15～20G，維生素B110MG，加水定容至1000ML，PH值自然；較佳的生長(zhǎng)條件為溫度27℃～28℃，暗室培養(yǎng)。對(duì)菌絲體的普通染色顯微觀察結(jié)果顯示，菌絲在生長(zhǎng)到一定時(shí)期出現(xiàn)了橫隔和鎖狀聯(lián)合等特征結(jié)構(gòu)，桑黃菌絲為管狀，有分支。對(duì)H和S兩個(gè)菌株彈射出的孢子顯微觀察結(jié)果顯示，兩個(gè)菌株孢子形態(tài)相似，均為卵圓形或橢圓形，有同心環(huán)，表面光滑，一端有一個(gè)小凸起，為萌發(fā)孔。吖啶橙對(duì)桑黃菌絲進(jìn)行熒光染色時(shí)，染色條件以PH58～60，染色時(shí)間以4MIN為宜。由熒光染色結(jié)果可以清晰的看到管狀菌絲內(nèi)由綠色至橙紅色、紅色等不同顏色分布，頂端和橫隔處熒光較亮，說明此處DNA和RNA含量較高，這應(yīng)該與這兩處生長(zhǎng)、分裂較為旺盛有關(guān)系。對(duì)桑黃固體培養(yǎng)菌絲體基質(zhì)中的羧甲基纖維素酶、漆酶、多酚氧化酶、愈創(chuàng)木酚酶、過氧化物酶等胞外酶的活性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示在同一生長(zhǎng)時(shí)期，每種酶酶活性不同，且同一種酶隨生長(zhǎng)時(shí)期的變化，酶活性也發(fā)生變化，表明了桑黃菌絲體對(duì)纖維素及木質(zhì)素兩種營養(yǎng)物質(zhì)的利用情況存在差異。采用DNS法測(cè)定還原糖含量，選用苯酚硫酸法測(cè)定總糖含量。在整個(gè)固體培養(yǎng)過程中，總糖含量變化不是很大；還原糖含量變化出現(xiàn)兩個(gè)高峰期，分別在第17D和第25D。通過對(duì)桑黃固體培養(yǎng)過程的研究，得出桑黃固體菌絲體生長(zhǎng)較佳的培養(yǎng)基配方為棉籽殼78％，麩皮20％，石膏15％，硫酸鎂02％，磷酸二氫鉀03％，料水比115；較佳的生長(zhǎng)條件為溫度27℃～28℃，喑室培養(yǎng)。桑黃菌株R子實(shí)體較佳的分化及生長(zhǎng)條件為晝夜溫差培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度90％～95％，及時(shí)通風(fēng)換氣，每天早晚各通風(fēng)一次，每次通風(fēng)20MIN，自然散射光照。綜合驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明在此條件下，菌絲生長(zhǎng)旺盛，菌絲密，形成的原基數(shù)量較多；形成的子實(shí)體顏色鮮亮均一，質(zhì)量好，畸形率低，71～85天即可成熟采摘。單株干重產(chǎn)量在25G～32G之間，平均干重約為285G袋，生物學(xué)產(chǎn)量約為891％。較單因素試驗(yàn)中產(chǎn)量高。

簡(jiǎn)介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)博B學(xué)位論文里德聚類分析可以看出，紫色和紅色首先聚在一起，然后和紅白相間的聚在一起，最后與白色一串紅聚在一起，此結(jié)果和表面紋飾的分析結(jié)果大致相同。證明花粉在遺傳上具有較高的相關(guān)性?？梢宰鳛榉诸惖幕局笜?biāo)。10對(duì)四種花色一串紅進(jìn)行RAPD聚類圖分析，把4種花色一串紅劃分為兩大類，其聚類結(jié)果與孢粉學(xué)形態(tài)特征分類大致相同，因此，RAPD和孢粉學(xué)結(jié)合起來可作為一串紅親緣關(guān)系鑒定的一種有效手段。關(guān)鍵詞一串紅SAVIASPENDENSKERGAWL；生殖生物學(xué)孢粉學(xué)RAPDVII

簡(jiǎn)介：分類號(hào)河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目英文題目密級(jí)ISOLATIONANDIDENTIEI￡蘭豎QNQ里PORCINEPARVOVIRUSA墜嬰王墜至豎S羔墮ITSB10LOGICALCHARA￡基RS衛(wèi)￡S學(xué)位申請(qǐng)人題』蟲導(dǎo)師王刖迭專業(yè)亟隨獸醫(yī)堂研究方向動(dòng)物籩鎏痘蕉痘扭理壁隨圭論文提交日期學(xué)位授予日期定一一鑒一L一蠱一金一的一一掛宜猛丑南一掛河一堂壹塑病一生一羞緗一㈤糊必本論文受到下述項(xiàng)目資助國家高技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃863項(xiàng)目NO2007AAL00606

簡(jiǎn)介：密級(jí)論文編號(hào)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文日本血吸蟲日本血吸蟲SJC1QBP基因基因的克隆表達(dá)克隆表達(dá)及生物學(xué)功能研究及生物學(xué)功能研究CLONINGEXPRESSIONBIOLOGICALFUNCTIONSTUDYOFSCHISTOSOMAJAPONICUMC1QBP碩士研究生賈秉光賈秉光指導(dǎo)教師師傅志強(qiáng)傅志強(qiáng)研究員研究員申請(qǐng)學(xué)位類別獸醫(yī)碩士申請(qǐng)學(xué)位類別獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱專業(yè)領(lǐng)域名稱獸醫(yī)獸醫(yī)培養(yǎng)單位位上海獸醫(yī)上海獸醫(yī)研究所研究所研究生院研究生院20120166年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時(shí)間年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名時(shí)間年月日導(dǎo)師簽名時(shí)間年月日

簡(jiǎn)介：結(jié)核病作為全球性的健康問題，其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升態(tài)勢(shì)。分枝桿菌MYCOBACTERIUMTUBERCULOSIS是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的最為重要的傳染性病原體之一，它能夠在宿主巨噬細(xì)胞中持續(xù)存活，每年引起八百萬人感染，其中有三百萬病人由于得不到合理的治療而死亡。此外，在過去40年以來，一直沒有開發(fā)出治療效果比異煙肼更優(yōu)的藥物。而多耐藥菌株MUTIDRUGRESISTANT，MDR的出現(xiàn)和廣泛傳播，以及與艾滋病的共同作用，使得結(jié)核病的疫情進(jìn)一步惡化。開發(fā)更有效、更快速的抗結(jié)核新藥，徹底攻克結(jié)核病已勢(shì)在必行。結(jié)核桿菌的基因組含4000多個(gè)基因，其中有250個(gè)基因編碼脂肪酸代謝相關(guān)的酶，和大腸桿菌相比多了4倍有余。結(jié)核桿菌的細(xì)胞壁以肽聚糖為基本架構(gòu)，共價(jià)結(jié)合阿拉伯半乳糖及分支菌酸。分支菌酸是自然界中最大的脂肪酸，它和結(jié)核桿菌的毒力、結(jié)核桿菌逃逸免疫系統(tǒng)攻擊的能力息息相關(guān)。另外，細(xì)胞壁所含的脂類約占細(xì)胞壁干重的60％等等，這些事實(shí)均說明了脂肪酸代謝對(duì)結(jié)核桿菌的重要性。丙二酰COAACP轉(zhuǎn)化酶MALONYCOAACPTRANSACYLASE，MCAT是脂肪酸代謝中的一個(gè)關(guān)鍵酶，催化MALONYLCOA形成MALONYLACP，后者進(jìn)入脂肪酸碳鏈延長(zhǎng)循環(huán)，每次增加2個(gè)碳原子。ACPACYLCARRIERPROTEIN是FASII系統(tǒng)中的小且酸性的蛋白，它在脂肪酸代謝中起著重要作用，與大分子脂肪酸的合成及結(jié)核細(xì)胞壁的裝配緊密相關(guān)。ACP與MCAT都是很好的抗結(jié)核藥物靶位的候選對(duì)象。本論文共克隆、表達(dá)、純化了結(jié)核桿菌的兩個(gè)MCAT和三個(gè)可能的ACP蛋白，并檢測(cè)了這些蛋白的一些生理生化功能及特性。在酶活測(cè)定中，我們了解到FABD和FABD2的性能相近，幾種二價(jià)陽離子對(duì)酶活的影響不大；RVL344轉(zhuǎn)錄的蛋白確實(shí)具有載酰功能，而RV0033可能在別的通路中發(fā)揮作用。RTPCR試驗(yàn)闡明了兩個(gè)MCAT蛋白在結(jié)核桿菌侵入巨噬細(xì)胞后的轉(zhuǎn)錄情況，其中FABD的表達(dá)上調(diào)，而FABD2表達(dá)量減少，證實(shí)了結(jié)核桿菌兩個(gè)MCAT蛋白在結(jié)核病急性及持續(xù)感染中的重要性。通過WESTERN檢測(cè)，耐藥菌株感染的病人血清和敏感株病人血清中都具有ACPL344的抗原，說明了ACPL344的重要性及它作為結(jié)核診斷的輔助指標(biāo)的可能。此外，我們還通過RVL344基因的定點(diǎn)突變?cè)囼?yàn)，驗(yàn)證了ACPL344蛋白中一些序列的重要性與保守性。圓二色譜的測(cè)定，使我們得到了幾種蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)。為了獲得這些蛋白的三維結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)出活性小分子化合物，我們還與清華大學(xué)結(jié)構(gòu)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室合作，對(duì)這些蛋白進(jìn)行了晶體生長(zhǎng)的嘗試性實(shí)驗(yàn)。最終得到兩個(gè)MCAT的晶體，其中FABD的分辨率在2A，而FABD2晶體的分辨率只有6A。最后，我們解析出FABD蛋白的晶體結(jié)構(gòu)。雖然未能得到ACPL344的晶體結(jié)構(gòu)，我們?nèi)杂猛茨＝ǖ姆椒?，得到了該蛋白模擬的三維結(jié)構(gòu)，為設(shè)計(jì)有活性的小分子化合物打下良好基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的我們描述并且比較兩種不同方法獲得微血管內(nèi)皮細(xì)胞BRAINMICROVULARENDOTHELIALCELLS，BMECS的方法其目的是為了展現(xiàn)出不同方法獲得微血管內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性，以及探討這兩種方法在細(xì)胞生成上是否存在不同。材料和方法一、腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代提取和培養(yǎng)一種方法用機(jī)械和酶分解的方法處理腦組織，主要涉及密度離心和免疫磁珠純化等步驟，另一種方法包括機(jī)械分離，兩次酶消化，20％BSA和PERCOLL離心，加入完全培養(yǎng)基高糖DMEM、20％PDS、4UGML嘌呤霉素（僅應(yīng)用2天）、100UGML肝素、4NGMLBFGF、10UGML內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)支持物、2MML一谷氨酰胺、100UML青霉素、100UGML鏈霉素以及025UGML兩性霉素B。12小時(shí)后首次換液以去除未貼壁的細(xì)胞及血管段放入37℃，5％CO2孵箱，每隔兩天換液一次。二、蛋白免疫印跡分析用刮刀將BMECS混成，溶于勻漿，溶于PBS以1000R離心5MIN。棄上清后加入裂解液，細(xì)胞溶液放置于冰上10MIN，震蕩1MIN后，15000G離心5MIN。收集上清，采用BCA試劑盒測(cè)試濃度。上樣后，跑膠，轉(zhuǎn)膜，脫脂奶粉室溫封閉2小時(shí)。TBST洗膜3次10MIN次，一抗孵育過夜，第二天辣根過氧化物酶孵育后上機(jī)發(fā)光。三、免疫熒光當(dāng)BMECS長(zhǎng)滿后，去除培養(yǎng)基，溶于1XPBS沖洗3次。預(yù)冷100％乙醇被用作兔抗大鼠血管第八因子抗體固定30分鐘，4％多聚甲醛用于固定兔抗大鼠CLAUDIN5固定劑，室溫下固定30MIN。PBS沖洗3次后，01％TRITONX100細(xì)胞膜打孔5MIN，PBS清洗后加入5％BSA室溫封閉30MIN。一抗用1％BSA封閉后在4℃下孵育過夜。熒光二抗（FITC異硫氰酸熒光素山羊抗兔IGG，TRITC四乙基若丹明異硫氰酸鹽山羊抗兔IGG）用1％BSA包含DAPI苯基吲哚藍(lán)色熒光5ΜGML稀釋并且樣品在37℃避光孵育半小時(shí)。四、體外血腦屏障的建立及通透性通過MILLICELLERS（電阻系統(tǒng)）得到的3天的初級(jí)電鍍來評(píng)估TEER。當(dāng)BMECS聚集時(shí)，1ΜM熒光素鈉的DMEM加入到TRANSWELL系統(tǒng)的上面。計(jì)根據(jù)下層小室熒光鈉的吸光度，計(jì)算出單層BMECS的通透性。五、細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定將細(xì)胞放入有含有FLUO3AM10ΜMOLML的DMEM中避光30分鐘，孵育后用ACSF沖洗掉過多的FLUO3AM。BK刺激后細(xì)胞內(nèi)CA2變化采用在共聚焦顯微鏡下在激發(fā)波長(zhǎng)為488NM，發(fā)射波長(zhǎng)為505NM的數(shù)值下進(jìn)行測(cè)量，F(xiàn)0為細(xì)胞靜息狀態(tài)下的熒光變化，△F為變化后的數(shù)值與靜息狀態(tài)下的數(shù)值的比值，整個(gè)細(xì)胞的鈣離子變化為％△FF0。結(jié)果最終的的細(xì)胞通過內(nèi)皮的特殊抗原VONWILLEBRFACT和CLAUDINE5，跨內(nèi)皮電阻TRANSENDOTHELIALELECTRICALRESISTANCE，TEER，熒光蛋白滲透性和細(xì)胞內(nèi)CA2變化的測(cè)量來測(cè)定鑒定。最后我們從原代細(xì)胞中獲得了兩種生物學(xué)特性的細(xì)胞并且經(jīng)過鑒定均為微血管內(nèi)皮細(xì)胞，這兩種內(nèi)皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)、生態(tài)學(xué)特性、跨內(nèi)皮電阻、應(yīng)用緩激肽后的反應(yīng)和內(nèi)皮細(xì)胞的屏障作用均有所差異。結(jié)論緩激肽105M觸發(fā)原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣離子波，細(xì)胞外鈣離子是鈣離子峰的前提和必要條件此鈣離子波屬于鈣觸發(fā)鈣離子釋放機(jī)制。我們也發(fā)現(xiàn)兩種方法獲得的BEMCS在細(xì)胞形態(tài)、TEER、和應(yīng)用BK后的反應(yīng)上存在不同，可能是由于細(xì)胞的異質(zhì)性。

簡(jiǎn)介：第一部分目的比較潰瘍性結(jié)腸炎患者與無器質(zhì)性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65表達(dá)差異，探討其臨床意義。方法募集12名無器質(zhì)性腸道疾病志愿者（男女各6名，平均年齡4613±1205歲）與16名潰瘍性結(jié)腸炎患者（男性患者10名，女性患者6名，平均年齡5042±1043歲），電子結(jié)腸鏡下取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)其基因表達(dá)，免疫熒光染色檢測(cè)NFΚBP65蛋白表達(dá)強(qiáng)度，T檢驗(yàn)分析兩組之間的差異。結(jié)果無器質(zhì)性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達(dá)量分別為053±024、210％±064％，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達(dá)量分別為519±337、1522％±316％，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P結(jié)論本文在前人基礎(chǔ)上再次證實(shí)NFΚBP65參與潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制，以此為切入點(diǎn)進(jìn)行深入研究可能為該病的診斷與治療帶來突破。第二部分目的比較潰瘍性結(jié)腸炎患者與結(jié)直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65表達(dá)差異，探討其臨床意義。方法12名無器質(zhì)性腸道疾病志愿者、16名潰瘍性結(jié)腸炎患者及18名結(jié)直腸腺癌患者被納入實(shí)驗(yàn)，電子結(jié)腸鏡或手術(shù)取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。逆轉(zhuǎn)錄聚核酶鏈反應(yīng)法（RTPCR）檢測(cè)各組腸黏膜NFΚBP65MRNA的表達(dá)，免疫組化法檢測(cè)各組腸黏膜NFΚBP65蛋白表達(dá)強(qiáng)度，單因素方差分析三組之間的差異。結(jié)果無器質(zhì)性腸道疾病志愿者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達(dá)量分別為010±003、206％±070％，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達(dá)量分別為096±011、3616％±699％，結(jié)直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65基因與蛋白表達(dá)量分別為042±077、954％±277％，三組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P結(jié)論盡管炎癥與腫瘤存在某種聯(lián)系已在學(xué)界達(dá)成共識(shí)，課題組也觀察到結(jié)直腸癌患者腸黏膜NFΚBP65的表達(dá)較無器質(zhì)性腸道疾病志愿者增加，但其表達(dá)強(qiáng)度并非之前文獻(xiàn)報(bào)道的那么高，課題組認(rèn)為抑制NFΚBP65的表達(dá)可能是治療潰瘍性結(jié)腸炎的較好思路，但不認(rèn)為抑制NFΚBP65的表達(dá)能從根本上治療結(jié)直腸癌。第三部分目的比較分化程度不同的大腸癌患者與無器質(zhì)性腸道疾病志愿者腸黏膜血管緊張素Ⅱ（ANGIOTENSINⅡ，ANGⅡ）及其Ⅰ型受體（AT1R）表達(dá)差異，初步探討ANGIIAT1R信號(hào)通路與大腸癌之間的關(guān)系。方法腸鏡室募集大腸癌患者24名（病理學(xué)檢查證實(shí)其中9名為大腸高分化腺癌患者，9名為大腸中分化腺癌患者，6名為大腸低分化腺癌患者）及6名無器質(zhì)性腸道疾病志愿者，電子結(jié)腸鏡下取活檢獲得新鮮的腸黏膜組織。免疫組化法檢測(cè)各組腸黏膜ANGIOTENSINⅡ及AT1R蛋白表達(dá)強(qiáng)度，單因素方差分析各組之間的差異。結(jié)果大腸腺癌患者腸黏膜ANGⅡ和AT1R的表達(dá)較無器質(zhì)性腸道疾病志愿者腸黏膜ANGⅡ和AT1R表達(dá)明顯增強(qiáng)（P005）；中、低分化組較高分化組AT1R表達(dá)增加（P結(jié)論ANGIIAT1R信號(hào)通路參與大腸癌的發(fā)病過程，可能成為大腸癌治療的新靶點(diǎn)。第四部分目的探討難治性肛瘺的中西醫(yī)結(jié)合治療方法并初步總結(jié)其療效。方法病例納入標(biāo)準(zhǔn)為同意接受本中西醫(yī)結(jié)合治療方法的難治性低位肛瘺患者（外口離肛緣2CM以上的患者），剔除以下病例一些能利用肛瘺切開術(shù)輕易治愈的單純性肛瘺患者、直腸陰道瘺患者、直腸膀胱瘺患者、炎癥性腸病患者、肛門先天異?；颊摺⒂懈亻T失禁病史患者及有手術(shù)禁忌癥的患者。手術(shù)主要器械為瘺管銑刀，術(shù)后主要方藥為拔毒生肌散與黃連膏，治療簡(jiǎn)要操作步驟如下肛周常規(guī)消毒→麻醉滿意→鋪無菌巾→肛管內(nèi)碘伏棉球消毒→擴(kuò)肛并確認(rèn)病情→探針由外口探入從內(nèi)口穿出→在與內(nèi)口對(duì)應(yīng)的距肛緣15CM處作一與瘺管走行方向一致的梭形切口作為新外口→沿探針切開新外口與內(nèi)口之間的皮膚、皮下組織及瘺管→組織剪修整所切的皮肉組織呈“V”狀敞開→銑刀桿循探針由外口探入從開窗處穿出→退出探針→銑刀頭安裝在肛內(nèi)由開窗處穿出的銑刀桿上→位于外口之銑刀桿尾部連接微型電機(jī)→微型電機(jī)接通電源的同時(shí)術(shù)者持電機(jī)緩緩拉出轉(zhuǎn)動(dòng)的銑刀→適當(dāng)撐擴(kuò)殘余瘺道→再次將探針從外口探入開窗處探出→利用探針將引流條引入殘存瘺道→每日雙氧水替硝唑生理鹽水沖洗傷口→早期傷口引流物渾濁階段，用蘸有拔毒生肌散的凡士林紗條引流；后期傷口引流物清稀階段，用蘸有黃連膏的凡士林紗條引流→適時(shí)拔除引流條。結(jié)果2009年8月至2009年11月間，課題組運(yùn)用本中西醫(yī)結(jié)合療法治療8例低位單純性肛瘺患者及6例低位復(fù)雜性肛瘺患者（男12名，女2名，平均年齡355±1287歲），隨訪半年結(jié)果顯示1例未堅(jiān)持換藥的患者術(shù)后1月復(fù)發(fā)，其他13例患者均痊愈；平均住院日為7天，患者傷口愈合時(shí)間為4143±610天；無1例患者出現(xiàn)術(shù)中術(shù)后嚴(yán)重并發(fā)癥。結(jié)論本中西醫(yī)結(jié)合療法之手術(shù)部分一方面清除了感染的肛腺并作一“V”型切口至肛緣，最大限度的保證術(shù)后不復(fù)發(fā)；另一方面機(jī)械化的隧道式切除瘺管壁肉芽組織而非全程切開瘺道，操作簡(jiǎn)單、高效、微創(chuàng)；術(shù)后換藥階段融入辨證換藥理念，早期利用蘸有提膿祛腐方藥的凡士林紗條引流，后期用蘸有清熱解毒、消腫止痛方藥的凡士林紗條引流，確保腐去新生。早期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示本中西醫(yī)結(jié)合療法是治療難治性肛瘺的一個(gè)較佳選擇，其療效好、創(chuàng)傷小，值得大力探索并加以推廣。