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簡介：點擊查看更多沙柳材霉菌的生物學特性及化學防治的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：“ABCDEFGHIG11J1J

簡介：新課改理念下教學有效性要以學生的進步和發(fā)展為宗旨。教學有效性的實現(xiàn)以學生學習方式的轉(zhuǎn)變?yōu)闂l件，促進學生有效學習。本文在前人研究的基礎上，以生物學課堂教學中的教學資源利用問題為切入點，對提高生物學課堂教學有效性進行研究。本文內(nèi)容主要有五個方面問題的提出和意義有效教學理論；研究內(nèi)容、方法與過程；生物學課堂有效教學的實踐研究；結(jié)果與分析。首先，對生物學課堂教學現(xiàn)狀進行分析，結(jié)合新課程改革要求提出當前的生物學課堂呼喚有效教學；對生物學教學資源利用現(xiàn)狀的調(diào)查分析，提出通過教學資源的優(yōu)化重組提高課堂教學有效性的必要性。其次，采用文獻研究法，對理論部分進行研究，通過查閱大量文獻，回顧有效教學思想，綜述有效教學國內(nèi)外的研究現(xiàn)狀、有效教學的基本原則、標準以及有效教學研究的理論基礎。再次，本課題核心部分是生物學課堂有效教學的實踐研究。在教學過程中，針對生物課堂有效教學進行了實踐研究，通過在對照班和實驗班的教學，通過問卷調(diào)查和考試成績，證明運用重組、優(yōu)化的生物學教學資源進行教學對提高學生的學業(yè)成績、激發(fā)學生的學習動機、學習興趣、學習態(tài)度均有效。最后，對整個研究過程進行理性地反思，指出本研究的局限和不足，并對后續(xù)研究進行了展望。

簡介：STRUCTUREELUCIDATION，BIOSYNTHETICPATHⅥ，AYANDBIOLOGICALFUNCTIONOFTHELOCILLOMYCIN，SURFACTIN，BACILLOMYCINANDFENGYCINPRODUCEDBYTHEBACILLUSSUBTILISBS916BV_CHUPINGLUOSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDOCTORDEGREEOFSCIENCECOLLEGEOFPLANTPROTECTIONNANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYNANJING，210095，PRCHINANOVEMBER，2014目錄摘要～目錄IABSTRACTV上篇文獻綜述第一章枯草芽胞桿菌在植物病害防治中的應用11枯草芽胞桿菌防治植物病害研究進展一111枯草芽胞桿菌概述。1L2枯草芽胞桿菌防治植物病害的現(xiàn)狀113存在的問題展望22枯草芽胞桿菌防治植物病害的機理。321定殖能力營養(yǎng)與空間競爭作用322抗菌次生代謝產(chǎn)物抑菌作用523細胞壁降解一溶菌作用624誘導抗性作用73枯草芽胞桿菌分泌抗菌代謝產(chǎn)物一931核糖體合成途徑合成的羊毛硫抗生素932非核糖體合成途徑合成的脂肽類抗生素L033其它途徑合成的抗菌代謝產(chǎn)物L1第二章枯草芽胞桿菌源脂肽類抗生素的研究進展131脂肽類抗生素的種類1311表面活性素家簇的結(jié)構(gòu)1312伊枯草素家簇的結(jié)構(gòu)14L3泛革素家簇的結(jié)構(gòu)152脂肽類抗生素生物合成及其調(diào)控途徑1621脂肽類抗生素的線性的非核糖體合成機制16211表面活性素非核糖體合成機制17212伊枯草素家簇的非核糖體合成機制18213泛革素的非核糖體合成機制1922多肽類抗生素的非線性合成機制20

簡介：分類號密級UDC單位代碼10435碩士專業(yè)學位論文黃瓜靶斑病生物學特性及抗藥性監(jiān)測BIOLOGICALACTERISTICSFUNGICIDERESISTANCEOFCYNESPACASSIICOLA研究生姓名楊潔指導教師鄭長英教授學位種類農(nóng)業(yè)推廣碩士專業(yè)領域植物保護中國青島二〇一六年六月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得青島農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名時間年月日關于論文使用授權的說明本人完全了解青島農(nóng)業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。同意青島農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容。保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議保密的學位論文在解密后應遵守此協(xié)議研究生簽名時間年月日導師簽名時間年月日

簡介：分類號密級UDC編號學位論文MIRNA331在大腸癌中生物學功能研究在大腸癌中生物學功能研究THEBIOLOGICALFUNCTIONALSTUDIESOFMIRNA331INCOLECTALCANCER胡明高胡明高指導教師姓名指導教師姓名余昌俊教授安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院普外科申請學位級別申請學位級別碩士專業(yè)名專業(yè)名稱外科學（普外）提交論文日期2017年3月論文答辯日期2017年5月學位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學答辯委員會主席于慶生教授評閱人陳曉鵬教授宋軍教授2017年05月

簡介：第一部分DCSIGN與TOLLIP的相互作用研究DCSIGNDENDRITIECELLSPECIFICICAM3GRABBINGNONINTEGRIN是C型凝集素受體超家族的成員它主要在樹突狀細胞DENDRITICCELLDC表面表達。DCSIGN是Ⅱ型跨膜受體分為胞漿尾部、跨膜區(qū)以及胞外段三部分。DCSIGN能夠通過其胞外段的碳水化合物識別結(jié)構(gòu)域CARBOHYDRATERECOGNITIONDOMAINCRD以鈣離子依賴的方式去識別一些病原體表面或組織表面特異性的糖結(jié)構(gòu)比如HIV1、結(jié)核桿菌表面的高甘露糖結(jié)構(gòu)結(jié)腸癌細胞表面的LEWIXY。DCSIGN可以介導DC多方面的功能比如參與DC的遷移介導DC與T細胞的粘附和對T細胞的激活捕獲病原體和抗原呈遞等。但是DCSIGN分子也存在不利于人體的一面。目前的研究發(fā)現(xiàn)DCSIGN可以促進一些病原體或腫瘤逃避機體的免疫監(jiān)視。比如DCSIGN捕獲HIV1以后可將其內(nèi)化至細胞中的一個非溶酶體區(qū)域保護HIV1免受降解并通過反式作用的方式促進HIV1對CD4T細胞的感染在識別結(jié)核桿菌細胞壁成分以后DCSIGN所產(chǎn)生的信號可以抑制DC的成熟干擾TOLL樣受體信號促進免疫抑制因子IL10的表達DCSIGN與CEAEARCINOEMBRYONICANTIGEN表面的LEWISXY抗原結(jié)合以后可以誘導2型T輔助細胞反應有利于腫瘤免疫逃避。DCSIGN與病原體或腫瘤免疫逃避的關系和機制的研究將為人們治療相關疾病提供新的思路。目前對于DCSIGN的研究主要集中在其胞外段對病原體的識別方面而DCSIGN胞漿段的相關研究還很少。為此本實驗室以DCSIGN的胞漿段為誘餌在人的胸腺CDNA文庫中進行酵母雙雜交并篩選到TOLLIPTOLLINTERACTINGPROTEIN這一基因。TOLLIP是IL1TOLL樣受體信號通路中的信號分子對于調(diào)節(jié)炎癥反應發(fā)揮一定的作用。TOLLIP在蛋白質(zhì)運輸方面也發(fā)揮作用比如介導內(nèi)化后的IL1受體向溶酶體的轉(zhuǎn)運。通過GSTPULLDOWN免疫共沉淀熒光共定位等方法我們證實了TOLLIP和DCSIGN胞漿段相互作用的存在并且TOLLIP的C2結(jié)構(gòu)域即57164位氨基酸殘基對于該相互作用是必需的。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)當DCSIGN內(nèi)化進入細胞漿以后與TOLLIP存在著點狀共定位。并且在表達57164位氨基酸缺失的突變型TOLLIP的細胞中DCSIGN內(nèi)化進入胞漿形成點狀結(jié)構(gòu)的水平受到明顯的抑制。此外用DCSIGN特異性的抗體激活DCSIGN信號通路以后TOLLIP可以被酪氨酸磷酸化。我們的研究結(jié)果提示TOLLIP可能參與DCSIGN內(nèi)化后在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運同時也可能作為DCSIGN信號通路中的潛在效應分子。對于DCSIGN與TOLLIP相互作用的研究的深入將為進一步闡明DCSIGN介導病原體或腫瘤免疫逃避的分子機制提供新的線索。第二部分靈芝孢子粉多糖成分GSG的生物學活性探討靈芝是GANODERMALUCIDUM擔子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌赤芝和紫芝的總稱有扶正固本等功效被本經(jīng)列為上品。靈芝孢子SPESOFGANODERMALUCIDUM是由靈芝發(fā)育后期釋放出來的擔孢子。近年來隨著孢子粉采集和破壁技術的提高對靈芝孢子粉有了進一步的認識。藥理試驗表明靈芝孢子粉比靈芝子實體具有更強更全面的作用它是靈芝的精華部分具有抑制腫瘤細胞生長調(diào)節(jié)、提高人體免疫力降低膽固醇提高肌體耐缺氧能力等功能。靈芝孢子化學成分有蛋白質(zhì)、氨基酸類、多糖類和維生素類等多種成分。目前研究認為靈芝多糖類化合物是靈芝中主要的活性成分之一國內(nèi)外已有報道指出從孢子粉中可提取出具免疫調(diào)節(jié)活性的多糖。中國科學院上海有機所通過水提、乙醇分級沉淀的方法并通過采用DEAECELLULOSE和SEPHADEXG50色譜柱分離純化從靈芝破壁孢子粉中得到單一級的多糖組分GSGGLUCIDUMSPESGLUCAN。經(jīng)過紅外、NMR以及GCMS的分析該多糖被鑒定為是以Β1→3GLCP構(gòu)成主鏈且GLC殘基在6O處有分枝側(cè)鏈由Β1→6GLEP、Β1→4GLCP組成由Α1→GLCP構(gòu)成側(cè)鏈末端。通過HPGPCHIGHPERFMANCEGELPERMEATIONCHROMATOGRAPHY分析GSG的分子量為5000～11000DA。因此GSG是可溶性低分子量的Β葡聚糖。我們在體外研究中發(fā)現(xiàn)GSG能夠刺激小鼠腹腔巨噬細胞的活化引起活性氧REACTIVEOXYGENSPECIESROS的產(chǎn)生以及細胞因子TNFΑ和IL6的分泌。并且GSG刺激細胞因子的分泌是依賴于MAPKMITOGENACTIVATEDPROTEINKINASE信號通路的包括ERK、P38和JNK信號。通過表面胞質(zhì)團能量共振以及流式細胞儀檢測技術我們證實GSG能夠被C型凝集素受體DECTIN1所識別。進一步研究發(fā)現(xiàn)GSG能夠部分通過DECTIN1行使其免疫激活效應。在體內(nèi)GSG具有抗腫瘤活性以及增強CONA所誘發(fā)的小鼠脾臟細胞增殖反應的功能。我們的實驗證實了從靈芝孢子中提取的Β葡聚糖GSG在體內(nèi)和體外均具有生物學活性并且GSG分子量低、水溶性好跟一些大分子量的葡聚糖比如香菇多糖相比更有利于人體吸收降低抗原性。因此GSG具有很大的開發(fā)潛力。DECTIN1可能在介導GSG的免疫激活效應方面發(fā)揮重要作用這一研究結(jié)果將為人們探尋靈芝抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的機制提供新的思路和線索。

簡介：目的越來越多的生物制劑作為一種新的治療選擇進入了藥物市場，并且已證實生物制劑具有治療價值。生物制劑多數(shù)為蛋白或者多肽類物質(zhì)。這些具有生物學活性的大分子，其任何構(gòu)象發(fā)生變化都會導致生物學活性的喪失。在選擇系統(tǒng)給藥途徑時，生物制劑不可避免地受到酶的降解、肝臟代謝，以及一系列的不良反應如肝腎損傷、胃腸道反應等。但是，諸多的實驗已經(jīng)驗證乙醇脂質(zhì)體可以促進生物活性大分子的經(jīng)皮或者透皮吸收，乙醇脂質(zhì)體的這種特性可以有效的減少生物制劑系統(tǒng)給藥的缺點。本次實驗的目的為制備一種生物制劑的乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，觀察它的局部滲透途徑，以及生物制劑乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的生物學活性。我們選擇鼠表皮生長因子MEGF這個生物制劑，EGF已被證實可以作為毛囊生長期的生物學開關，可以將毛囊維持在生長期。方法MEGF乙醇脂質(zhì)體含有質(zhì)量分數(shù)為30％的乙醇、5％的DPPC、以及不同濃度的MEGF。在透射電鏡TEM和原子力顯微鏡AFM下觀察MEGF乙醇脂質(zhì)體的形態(tài)特征，使用高效液相色譜法HPLC測定該脂質(zhì)體的包封率。選擇不同的時間間隔，將制備完畢的MEGF乙醇脂質(zhì)體局部外用于C57BL6小鼠的皮膚，皮膚活檢法取新鮮的小鼠皮膚組織，制作皮膚冰凍切片，免疫熒光染色。然后在激光共聚焦顯微鏡下CLSM觀察MEGF乙醇脂質(zhì)體的局部滲透途徑。將MEGF乙醇脂質(zhì)體外用C57BL6小鼠的皮膚，每日2次，持續(xù)14天，觀察小鼠皮膚的顏色變化，記錄小鼠背部皮色變黑的只數(shù)，使用FISHER’S確切概率法，運用SPSS130版軟件進行統(tǒng)計。將各組小鼠皮膚組織使用蘇木精伊紅HE染色，觀察小鼠皮膚組織毛囊形態(tài)的變化。結(jié)果在TEM和AFM下觀察到MEGF乙醇脂質(zhì)體的粒徑均勻分布于40±10NM，包封率為38％。大部分激光共聚焦的圖像顯示MEGF乙醇脂質(zhì)體主要通過毛囊皮脂腺途徑局部滲透，部分通過角質(zhì)細胞間磷脂途徑滲透。包封于乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)內(nèi)的MEGF可以滲透到達毛囊皮脂腺單位的每一個部位，包括皮脂腺、漏斗部、膨出部、毛母質(zhì)以及毛乳頭部位。在體內(nèi)條件下，MEGF乙醇脂質(zhì)體可以使C57BL6小鼠的毛囊從休止期進入生長期。結(jié)論我們建立了有效的MEGF的乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)。MEGF被包封于乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)后仍然保持著其生物學活性。毛囊皮脂腺系統(tǒng)是生物制劑乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的快速和主要的局部滲透途徑。乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)還可以透過角質(zhì)細胞間磷脂途徑滲透。這些發(fā)現(xiàn)表明，對于皮膚和毛囊的疾病，生物制劑的乙醇脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)途徑具有良好的治療前景。

簡介：分類號S4334單位代碼10389密級學號1130203014福建農(nóng)林大學碩士學位論文福建農(nóng)林大學碩士學位論文光周期光周期、營養(yǎng)、營養(yǎng)源和植物揮發(fā)物對小菜蛾植物揮發(fā)物對小菜蛾成蟲成蟲生物學生物學的影響的影響學科門類農(nóng)學一級學科名稱植物保護二級學科名稱農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治研究方向昆蟲生態(tài)與害蟲綜合治理研究生姓名徐瑞斌指導教師楊廣教授魏輝研究員完成時間二○一六年四月獨創(chuàng)性聲明獨創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位（畢業(yè)）論文，是本人在指導教師的指導下獨立完成的研究成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標注和致謝中已作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同對本研究做出貢獻的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意，如被查有侵犯他人知識產(chǎn)權的行為，由本人承擔應有的責任。學位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名日期論文使用授權的說明論文使用授權的說明本人完全了解福建農(nóng)林大學有關保留、使用學位（畢業(yè)）論文的規(guī)定，即學校有權送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。保密，在年后解密可適用本授權書。□不保密，本論文屬于不保密?！鯇W位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名日期指導教師親筆簽名日期

簡介：CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES／NOCODE10224NO1103117DISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREESTUDYONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTIC，MYCELIALCOMPATIBILITYGROUPANDGENETICDIVERSITYOFSCLEROTINIASCLEROTIORUMINHEILONGJIANGPROVINCECANDIDATELIYICHUSUPERVISORPROFZHANGJUNHUADEGREECATEGORYMASTEROFAGRARINGENIEURCOLLEGENORTHEASTAGRICULTURALUNIVERSITYFIRSTLEVELDISCIPLINEPLANTPROTECTIONSECONDLEVELDISCIPLINEPLANTPATHOLOGYHARBINCHINAJUNE2014東北農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學碩士學位論文312菌落生長速度的測定27313菌核形成位置的觀察30314菌核大小形狀的測量31315菌核數(shù)量和重量的測量33316溫度對菌株的影響35317光照對菌株的影響39318PH值對菌株的影響4232黑龍江省不同地區(qū)大豆菌核病菌菌絲融臺群分析一4433黑龍江省大豆菌核病病菌SSR遺傳多樣性分析46331SSR引物篩選46332菌株SSR擴增結(jié)果47333菌株的聚類分析484討論5041菌株間形態(tài)學差異性分析5142菌株生長條件差異性分析5243菌絲親和群遺傳差異性研究5244SSR分子標記技術的遺傳差異性分析535結(jié)論54致謝一54參考文獻55攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文63

簡介：河北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文不同白僵菌菌株的生物學特性比較及HFW05菌株田間種群動態(tài)姓名魏靈燕申請學位級別碩士專業(yè)微生物與生化藥學指導教師朱寶成；馮書亮20120601STUDYOFBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFDIFFERENTBEAUVEDABASSIANASTRAINSANDPOPULATION由MAMICSATNATURALENVIRONMENTOFHFW05STRAINCANDIDATEWEILINGYANMAJORMICROBIOLOGYANDBIOCHEMICALPHARMACYADVISORSPROZHUBAOEHLMGRESFENGSHULIANGABSTRACTPRESENTLYBEAUVERIABASSIANABALSAMOVTFILLEMINISONEOFTHEMOSTWIDELYAPPLIEDENTOMOPATHOGENICFUNGIATHOMEANDABROAD，TOEFFECTIVELYCONTROLPESTITCOULDINFECTMORETHAN700INSECTSSPECIESOF149FAMILIESIN15ORDERSINTHISPAPERBIOLOGICALCHARACTERISTICS，GERMINATEDSPORESCHARACTERISTICS，INTERSRECIESRELATIONANDESTERASEISOENZYMECHARACTERISTICOFBEAUVERIABASSIANASAMPLESISOLATEDFROM15DIFFERENTHOSTSPECIESWERESTUDIED；RANDOMAMPLIFIERPOLYMORPHICDNARAPDWASAPPLIEDINTHESTUDYOFGENETICDIVERSITYBEAUVERIABASSIANAHFW05COLONIZATIONONPHYLLOPLANEOFTOMATO，CABBAGEANDOUCUMBERANDSOIL；ANDTHEHFW05STRAINSINFLUENCEONBACTERIUMANDACTINOMYCETESOFNATIVEENVIRONMENTWEREALSOSTUDIEDTOEXPLICITLYSHOWBIOLOGICALCHARACTERISTICANDTAXONOMICSTATUS，F(xiàn)IFTEENBEAUVERIASTRAINS，WEREASSAYEDONN’SNUELEOTIDESSEQUENCE，GROWTHRATEOFCOLONY，SPORULATION，SPOREGERMINATIONRATE，LENGTHOFGERMTUBEANDRATIOOFSINGLETUBESPORESWEREALSOLOOKEDATRESULTSSHOWEDTHATTHEYWEREBEAUVERIABASSIANATHEREWASNOSIGNIFICANTDIFFERENCEINCOLONYGROWTHRATESNERATIOOFSINGLEGERMTUBESPORESOFTHESESTRAINSWAS11919603％啊KAVERAGELENGTHOFSINGLEGERMTUBEANDDOUBLEGERMTUBEWERE6282143PROAND10341990INN，RESPECTIVELYTHESPOREGERMINATIONRATEWAS2209％8632％NOSIGNIFICANTCORRELATIONWASOBSERVEDBETWEENTHEMICROGERMINATEDSPORESCHARACTERISTICSANDMACROCULTIVATECHARACTERISTICSP；O341THEREWASSIGNIFICANTLYCORRELATIONBETWEENTHESPOREGERMINATIONRATEANDTHERATIOOFSINGLEGERMTUBEGERMINATIONSPORES，ANDTHEGROWTHRATEOFCOLONYWASFOUNDTOBESIGNIFICANTLYCORRELATED、析TLLAVERAGELENGTHOFLONGERGERMTUBEINTHISSTUDYTHEESTERASEISOZYMEZYMOGRAMANDRAPDTECHNOLOGYFORGENETICANALYSISWASUSEDTOSTUDYTHEGENETICDIVERSITYOFTHE15STRAINSBASEDONESTERASEISOZYMEZYMOGRAM，CLUSTERINGANALYSISSHOWEDTHATTHEGENETICSIMILARITYCOEFFICIENTSAMONGDIFFERENTSTRAINSRANGEDFROM0125TO1000，THEEXAMINEDISOLATESWERECLUSTEREDINTO10GROUPSATASIMILARITYCOEFFICIENTLEVELOF07RAPDFINGERPRINTQUALITYFORTYSEVEN10NTPRIMERSWERESELECTEDFROM160EXAMINEDRAPDPRIMERS，WHICHPRODUCEDCLEARFINGERPRINTSBYPCRAMPLIFICATIONINTOTAL，497DNAFRAGMENTSWEREAMPLIFIEDRANGING

簡介：甘肅農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文草莓根腐病病原菌鑒定及生物學特性的研究姓名曹奎榮申請學位級別碩士專業(yè)植物病理學指導教師朱建蘭20060601“肅農(nóng)業(yè)人學FIJJ學位論文STUDIESONPATHOGENIDENTIFICATIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFSTRAWBERRYROOTROTSUMMARYRECENTLYSTRAWBERRYROOTROT，AKINDOFSOILBRONEDISEASE，BECAMEMOREANDMORESERIOUSINTHESTRAWBERRYPLANTINGAREASINTHISPAPERPATHOGENOFSTRAWBERRYROOTROTWASIDENTIFIEDANDBIOLOGICALCHARACTERISTICS，PATHOGENICITY，CHEMICALCONTROL，ENZYMEACTIVITYWERESTUDIEDTHEPATHOGENOFSTRAWBERRYROOTROTWASISOLATEDFROMDISEASETISSUESTHENINOCULATEDTHEHEALTHYPLANTINTWOMEANSANDFOUNDTHEPLANTHADTHESAMESYMPTOMWITHTHESPECIEMENWHICHHADGATHEREDFROMFIELDTHENISOLATEDFROMTHEPLANTAGAIN，THEFUNGIWERETHESAMEPATHOGENWHICHHADBEENISOLATEDFROMSPECIEMENTHERESULTSSHOWEDTHEPATHOGENICFUNGIHADSTRONGPATHOGENICITYTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFTWOFUNGIWERESTUDIEDINTHELABORATORYTHERANGEOFGROWTHTEMPERATUREOFFUSARIUMOXYSPORUM，RHIZOCTONIASOLANIKUHNWERE035’C，535。CRESPECTIVELYANDTHEOPTIMUMWAS30CTHEOPTIMUMPHOFTWOFUNGIWAS626AND535，RESPECTIVELYLIGHT，DIFFERENTCONTENTOFNITROGENANDCARBONINTHEMEDIUMAFFECTEDONTHEGROWTHOFTHETWOFUNGITHERESULTSINDICATEDTHATA11FUNGICIDESHADCONTROLEFFECTBUTMETALAXYLANDMANCOZEBWEREBERERTHANDEXON、CHLOROTHALONIL、IPRODIONEANDPROMPAMOCARBONFUSARIUMOXYSPORUMTHIZOCTONIASOLANIKUHN，DEXON、MANCOZEB、METALAXYLANDIPRODIONEWEREBETTERTHANCHLOROTHALONILANDPROMPAMOCARBTHEREFORE，METALAXYLANDMANCOZEBWERETHEBESTFUNGICIDESTOCONTROLSTRAWBERRYROOTROTSTRAWBERRYVARIETIESWITHDIFFERENTRESISTANCEWEREINOCULATEDBYFUSARIUMOXYSPORUMANDRHIZOCTONIASOLANIKUHNTHEACTIVITIESOFPEROXIDASEPOD，POLYPHENOLOXIDASEPPO，PHENYLALMFINEAMMONIALYASEPAL，CATALASECATANDSUPEROXIDEDISMUTASESODWEREMENSURATEDBEFOREANDAFTERINOCULATIONTHERESULTSSHOWEDTHATTHEREWERENELATIONSHIPSBETWEENDISEASERESISTANCEANDTHEENZYMEACTIVITIESBEFOREINOCULATION；HOWEVERVARIATIONSOFENZYMEACTIVITIESOFPOD，PPO，PAL，CATANDSODWERECLOSELYRELATEDTODISEASERESISTANCEOFSTRAWBERRYAFTERINOCULATIONINRESISTANTVARIETY，THEMAXIMUMVALUEOFSODCONTENTWASAPPEAREDIN8DAFTERINOCULATIONTHEMAXIMUMVALUEII

簡介：引言外傷后細菌性致死性肉芽腫FATALBACTERIAGRANULOMAAFTERTRAUMA，F(xiàn)BGT是由高天文教授發(fā)現(xiàn)并命名的一種新疾病，該病在面部外傷愈合后發(fā)生，預后極差，患者死亡時均有腦部受累癥狀。以往國內(nèi)多位專家曾先后診治過近20例，進行了認真的普通細菌分離、厭氧菌分離、真菌培養(yǎng)等研究，均未獲陽性結(jié)果；曾診為“結(jié)節(jié)病、真菌感染”，給予糖皮質(zhì)激素、抗生素、抗結(jié)核、抗真菌等治療，效果不佳，患者全部在發(fā)病后的1到4年內(nèi)死亡。在總結(jié)、分析前人分離、培養(yǎng)該病病原失敗的基礎上，采取嚴格厭氧、運送培養(yǎng)基及增菌肉湯等改進措施后，本課題組其他成員終于成功地從4例FBGT患者的皮損組織中分離培養(yǎng)出病原菌，初步研究表明該菌為革蘭陽性桿菌，但具體種屬不明。由于病原菌種屬、患者的致死機理等不明，盡管采取各種積極的治療措施，除我們所救治的6例患者中有1例獲救外，至今尚無救治成功的病例。FBGT的發(fā)病機制、致死機理的闡明已成為救治患者的關鍵。目的1分別采取PCR擴增FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA、測序結(jié)果BLAST比對及患者分離菌與PACNES標準株DNA雜交方法明確病原菌的種屬；采用細菌16SRRNAPCR的方法，檢測2例行尸檢患者病例2和3的病變腦組織是否存在細菌，闡明患者死亡原因，測序結(jié)果與皮損分離菌序列比對，明確腦內(nèi)細菌是否與各自患者皮損分離菌為同一細菌，進一步證實從患者皮損分離的細菌就是FBGT的病原菌。2通過PCR擴增病例2的IFNΓ相關分子IAM，包括IFNΓR1、R2、STAT1、IL12Β、IL12RΒ1、Β2和STAT4的所有外顯子，測序結(jié)果與多個數(shù)據(jù)庫的野生型序列比較，尋找可能引起相應的IAM分子功能缺陷的多態(tài)性位點，初步明確FBGT的發(fā)病機制。方法1FBGT患者皮損分離病原菌分子生物學鑒定及死亡原因分析14例FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA鑒定1提取皮損分離菌的基因組DNA；2利用細菌通用引物擴增皮損分離菌的16SRRNA；3測序結(jié)果通過BLAST與已知細菌的16SRRNA序列進行同源性比對，明確FBGT患者皮損分離菌的具體種屬。2皮損分離病原菌與PACNES標準株DNA雜交1DNA結(jié)合采用共價法結(jié)合DNA到微孔板法進行DNADNA雜交，每個樣品4個平行重復；2標記DNAPHOTOACTIVATABLEBIOTINPAB標記探針DNA；3雜交4測定雜交率50℃雜交12小時，分別用2SSC01％TWEEN2050℃和室溫洗3次15分鐘，堿性磷酸酶法FLUOSTAROPTIMABMD測定雜交率360NM激發(fā)和460NM輻射。32例死亡患者病變腦組織細菌16SRRNA檢測、死亡原因分析1提取2例行尸檢患者病例2和3的病變腦組織基因組DNA；2病變腦組織細菌16SRRNAPCR檢測，明確患者死亡原因；3測序結(jié)果分別進行BLAST比對，初步明確病變腦組織內(nèi)細菌的種屬，并與各自患者皮損分離菌的16SRRNA序列進行比較，明確病變腦組織內(nèi)的細菌與皮損分離菌是否為同一細菌，進一步證實皮損分離菌就是FBGT的病原菌。2IAM基因外顯子擴增、功能缺陷多態(tài)性位點確定在本課題第一部分已明確PACNES就是FBGT的致病菌的基礎上，通過綜合分析FBGT患者的表型，結(jié)合PACNES毒力低，為胞內(nèi)寄生菌等特點，充分借鑒他人研究成果，提出了IAM基因多態(tài)性是FBGT發(fā)病的重要機制的假說。進行了以下工作1設計IAM相關分子基因所有外顯子包含5和3端的片區(qū)的引物，并對引物進行BLAST比對，確保特異擴增；2PCR擴增，直接測序，測序結(jié)果與多個基因多態(tài)性數(shù)據(jù)庫EGPGSWASHINGTONEDU、GENECARD等的野生型序列比較，找出多態(tài)性位點；3針對此多態(tài)性位點重新設計引物，無關正常對照10人的相應外顯子PCR擴增，直接測序，證實正常人不存在此多態(tài)性位點；4通過PCR單酶切分析進一步證實病例2的多態(tài)性位點，并明確等位基因型；5綜合分析所發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點對相應基因的結(jié)構(gòu)三維構(gòu)像等、表達和功能可能的影響，進而確認能引起相應分子功能缺陷的多態(tài)性位點，初步明確FBGT的發(fā)病機制。結(jié)果1FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA鑒定、病變腦組織細菌16SRRNA檢測和死亡原因分析14例FBGT患者皮損分離病原菌16SRRNA基因序列經(jīng)BLAST比對后與已知PACNESAB0972151GI26006299的同源性達99％，皮損分離病原菌為PACNES22例尸檢患者病變腦組織內(nèi)均可檢測到細菌16SRRNA片段，患者死于細菌引起的腦感染；PCR測序結(jié)果與相應患者皮損分離菌的16SRRNA序列完全一致，腦內(nèi)細菌與皮損分離菌為同一細菌。2IAM基因外顯子擴增、功能缺陷多態(tài)性位點確定1通過PCR測序與數(shù)據(jù)庫比對，發(fā)現(xiàn)IAM重要成員IL12RΒ1基因第五外顯子存在一個錯義突變271G→A，可引起所編碼氨基酸的改變91T→A，未發(fā)現(xiàn)其他IAM分子基因外顯子存在無義或錯義突變；2檢索多個多態(tài)性數(shù)據(jù)庫EGPGSWASHINGTONEDU、GENECARD等，未發(fā)現(xiàn)與IL12RΒ1基因第五外顯子錯義突變271G→A一致的多態(tài)性位點；310名正常對照IL12RΒ1基因第五外顯子在相應多態(tài)性位點均為野生型271GG；4PCRNAEI單酶切分析進一步證實病例2的IL12RΒ1基因第五外顯子突變?yōu)闉榧兒闲湾e義突變271AA5IL12RΒ1的錯義突變271G→A位于配體識別的關鍵區(qū)域，該突變可引起所編碼氨基酸的理化性質(zhì)改變疏親水性，進而引起IL12RΒ1三維構(gòu)像改變，綜合分析證實此錯義突變271G→A可引起IL12RΒ1與配體結(jié)合能力下降，導致IL12RΒ1功能缺陷。結(jié)論1本研究在以往研究的基礎上，通過分子生物學方法明確了PACNES為新疾病FBGT的病原，患者的死亡原因為PACNES所致的腦感染。2依據(jù)FBGT的臨床特點，通過廣泛查閱相關文獻，提出IAM基因多態(tài)性引起相應分子功能的缺陷是FBGT發(fā)病機制的假說；以此為基礎，檢測了病例2的IAM基因的所有外顯子，發(fā)現(xiàn)IAM的重要成員IL12RΒ1第5外顯子存在1個錯義突變271G→A，綜合分析發(fā)現(xiàn)該突變可引起編碼氨基酸疏水性改變，突變氨基酸位于配體結(jié)合的關鍵區(qū)域，可引起IL12RΒ1與配體結(jié)合能力下降，導致IL12RΒ1功能缺陷，進而導致IAM的核心分子IFNΓ表達障礙，通過對1例患者的深入研究，證實了提出的FBGT發(fā)病機制假說。