簡介：隨著工業(yè)發(fā)展的進(jìn)程，煤與石油等非再生能源的不斷消耗，廢氣中的二氧化碳造成的環(huán)境影響也越來越大，其處理方法受到各國的關(guān)注。在生物科學(xué)的迅速發(fā)展中，有研究發(fā)現(xiàn)某些生物具有固定二氧化碳的生化反應(yīng)，探究如何在溫和的條件下對(duì)二氧化碳進(jìn)行生物固定則成為了研究熱點(diǎn)。常溫下，不需要添加任何輔助因子以及ATP，芳香羧酸脫羧酶（主要催化苯酚類衍生物）就能夠轉(zhuǎn)化芳香類羧酸成為芳香烴與二氧化碳，同時(shí)這個(gè)反應(yīng)也是可逆的。為了推進(jìn)生物法在固定二氧化碳中的應(yīng)用，本文針對(duì)兩種不同來源的苯甲酸脫羧酶進(jìn)行了結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。本文工作根據(jù)前人從數(shù)據(jù)庫挖掘基因所獲得的芳香羧酸脫羧酶基因，設(shè)計(jì)引物，成功構(gòu)建克隆PET22BAODHBDASPERGILLUSYZAE米曲霉菌，二羥基苯甲酸脫羧酶與PET22BTMSAD（TRICHOSPONMONILIIFME毛孢子菌屬，水楊酸脫羧酶），導(dǎo)入ROSETTADE3大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)純化，并獲取大量蛋白。在結(jié)晶實(shí)驗(yàn)中分別獲得了7個(gè)不同的結(jié)晶條件，通過重復(fù)優(yōu)化池液組分，在上海光源BL17U1和BL19U1線站分別獲得了衍射分辨率達(dá)到176A與204A的晶體數(shù)據(jù)，從而解析了AODHBD與TMSAD的晶體結(jié)構(gòu)。在獲得了二者的結(jié)構(gòu)后，開展了其與底物復(fù)合物的結(jié)構(gòu)研究。由于AODHBD需要通過ZN2結(jié)合底物從而進(jìn)行反應(yīng)，在誘導(dǎo)與純化時(shí)補(bǔ)加ZN2，初步篩選得到8個(gè)可結(jié)晶條件，重復(fù)優(yōu)化后獲得了高質(zhì)量的晶體，同時(shí)通過浸泡小分子的方法嘗試解析蛋白與底物復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)。與已報(bào)道根瘤菌RHIZOBIUMSPSTRAINMTP10005的RSDHBD不同，AODHBD的活性位點(diǎn)處分別是W23、F27、A63、H167、F193、H222、D291、F296，其中F27作為關(guān)鍵氨基酸對(duì)于羧化與脫羧反應(yīng)可能具有重大影響，于是設(shè)計(jì)了F27W、F27I、F27A的突變體，準(zhǔn)備采用野生型作為對(duì)照組進(jìn)行酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。

簡介：目的1應(yīng)用SELDITOFMS技術(shù)檢測(cè)人巨細(xì)胞病毒HCMV感染導(dǎo)致臨床個(gè)體致肝炎綜合征血清學(xué)和HCMV感染相關(guān)細(xì)胞的神經(jīng)瘤細(xì)胞內(nèi)、外液蛋白質(zhì)組學(xué)差異表達(dá)，建立與HCMV致病相關(guān)的蛋白標(biāo)志物篩選方法；2建立可調(diào)控的針對(duì)HCMV即刻早期基因的細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，并檢測(cè)即刻早期基因?qū)?xì)胞抗凋亡的影響，以此探討可能的機(jī)理。材料和方法1取臨床HCMV引起的先天性嬰兒肝炎綜合征CONGENITALHUMANCYTOMEGALOVIRUSHEPATITIS患兒20例作為實(shí)驗(yàn)組，三個(gè)對(duì)照組25例血清標(biāo)本肝功能情況檢測(cè)、CMV特異性IGM抗體及尿CMV基因定量檢測(cè)，分離并制備蛋白，與WCX2蛋白質(zhì)芯片相互作用，利用SEIDITOFMS技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)液中分子量在500020000DA范圍內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況，繪制出蛋白飛行質(zhì)譜，在BIOMARKERWIZARD軟件的輔助下，分析差異蛋白。根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量和等電點(diǎn)，在SWISS蛋白數(shù)據(jù)庫中對(duì)差異蛋白進(jìn)行初步鑒定。2選擇人星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞和人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SHSY5Y，按細(xì)胞數(shù)量之比為101的比例將兩種細(xì)胞混合培養(yǎng)，感染HCMVAD169株。病毒感染神經(jīng)瘤細(xì)胞6H后，RTPCR的方法檢測(cè)HCMVIE基因的表達(dá)水平。流式細(xì)胞儀檢測(cè)，觀察HCMV感染對(duì)神經(jīng)瘤細(xì)胞凋亡的影響；體外培養(yǎng)U251，細(xì)胞，細(xì)胞感染病毒后不同時(shí)間段收獲細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)收獲正常細(xì)胞為對(duì)照組，使用基于SELDI技術(shù)的時(shí)間飛行質(zhì)譜儀和WCX2芯片，檢測(cè)各組之間細(xì)胞內(nèi)、外液蛋白表達(dá)譜的差異。將各組蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行比較，并將相關(guān)蛋白峰在SWISS蛋白數(shù)據(jù)庫中檢索，尋找與病毒的感染及發(fā)病相關(guān)的蛋白分子。3利用已有質(zhì)粒PIE72，設(shè)計(jì)人巨細(xì)胞病毒HCMV即刻早期基因IE1的特異性引物，進(jìn)行IE1基因的擴(kuò)增、提純、鑒定，構(gòu)建重組的可調(diào)控真核表達(dá)載體PTRE2HYGIE1，純化質(zhì)粒。4常規(guī)培養(yǎng)TETONHELA細(xì)胞，以陽離子高效轉(zhuǎn)染試劑HIFECTINⅡ轉(zhuǎn)染細(xì)胞。首先在培養(yǎng)的HELA細(xì)胞中轉(zhuǎn)染增強(qiáng)型綠色熒光蛋白ENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP報(bào)道基因，在普通熒光顯微鏡下觀察顯示綠色熒光的HELA細(xì)胞，確定轉(zhuǎn)染效率；在轉(zhuǎn)染EGFP基因的基礎(chǔ)上，體外常規(guī)培養(yǎng)TETONHELA細(xì)胞，轉(zhuǎn)染PTRE2HYGIE1重組質(zhì)粒，經(jīng)G418和潮霉素雙重篩選，RTPCR和WESTERNBLOT和免疫組織化學(xué)方法鑒定IE1的表達(dá)。5終濃度為100NGML的腫瘤壞死因子A作用于HELA細(xì)胞，建立HELA細(xì)胞的凋亡曲線；不同終濃度的DOXCYCLINE01ΜGML、1ΜGML和10ΜGML作用轉(zhuǎn)染PTRE2HYGIE1的HELA細(xì)胞，誘導(dǎo)IE1表達(dá)，RTPCR方法檢測(cè)IE1基因的產(chǎn)生，WESTERNBLOT檢測(cè)IE1蛋白的產(chǎn)生水平，MTT法檢測(cè)HELA細(xì)胞的細(xì)胞增值率。結(jié)果1HCMV引起的先天性嬰兒肝炎綜合征組與各對(duì)照組比較，血清中有4個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平發(fā)生明顯變化，在SWISS蛋白數(shù)據(jù)庫中檢索到分子量為58116DA、79356DA和88993DA的蛋白峰分別與Β防御素8、巨噬細(xì)胞源性趨化因子和血小板堿性蛋白在分子量和等電點(diǎn)上非常接近。2HCMV感染的兩個(gè)組與無HCMV感染的兩組嬰兒比較，血清中共有5個(gè)蛋自質(zhì)表達(dá)水平發(fā)生明顯變化，其中56390DA、59096DA、77765DA和158332DA的蛋白峰分別與促胸腺生成素、Β淀粉樣前體蛋白A4、血小板因子4和白細(xì)胞介素25在分子量和等電點(diǎn)上非常接近。3HCMV隱性感染組與其他組比較，血清中有2個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平發(fā)生明顯變化，57107DA的蛋自峰與Β防御素31非常接近。4兩個(gè)先天性嬰兒肝炎綜合征組與肝功能正常的另兩組嬰兒比較，血清中有4個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平發(fā)生明顯變化，其中75676DA、137441DA、150928DA、159316DA的蛋白峰分別與巨噬細(xì)胞炎性蛋白4、前白蛋白、肝再生增強(qiáng)因子和結(jié)合珠蛋白非常接近。5RTPCR的方法檢測(cè)HCMVIE基因的表達(dá)用于證實(shí)HCMV感染，成功建立了神經(jīng)瘤細(xì)胞的HCMV感染模型。病毒感染1天后細(xì)胞無明顯變化，感染3天后細(xì)胞在G1峰左側(cè)出現(xiàn)一個(gè)亞二倍體細(xì)胞群的峰亞G1峰，即凋亡峰，感染5天后細(xì)胞凋亡峰明顯。6病毒感染后細(xì)胞發(fā)生凋亡，且隨病毒感染時(shí)間的延長，細(xì)胞凋亡明顯增加。感染后3天和6天的細(xì)胞凋亡率分別為41％和426％。與正常對(duì)照組比較，分子量為26316DA、12027DA和135363DA的蛋白峰在病毒感染后表達(dá)持續(xù)上調(diào)，HCMV感染后4H略有增高，病毒感染后48H明顯升高。通過在SWISS數(shù)據(jù)庫中檢索發(fā)現(xiàn)其蛋白峰的分子量和等電點(diǎn)分別與CASPASE1、TNFA、Β淀粉樣前體蛋白非常接近。7構(gòu)建的真核表達(dá)載體PTRE2HYGIE1序列測(cè)定正確。DOX調(diào)控的重組表達(dá)載體PTRE2HYGIE1體外轉(zhuǎn)染HELA細(xì)胞后，經(jīng)G418和潮霉素B雙重篩選，獲得一株穩(wěn)定表達(dá)IE1的HELA細(xì)胞株。梯度濃度的DOXCYCLINE01ΜGML、1ΜGML和10ΜGML作用PTRE2HYGIE1HELA細(xì)胞48H，RTPCR檢測(cè)DOX誘導(dǎo)表達(dá)的MRNA比值IE1ΒACTIN分別為0733，0917和1768，WESTERNBLOT檢測(cè)IE1蛋白，IE1ΒACTIN分別為132，583和707。8終濃度為100ΜGML的TNFA和25ΜGML的ACTD聯(lián)合作用于轉(zhuǎn)染IE1質(zhì)粒的HELA細(xì)胞后，MTT檢測(cè)HELA細(xì)胞增值率顯示轉(zhuǎn)染IE1的細(xì)胞在8H之內(nèi)細(xì)胞活性大于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組，CASPACE檢測(cè)CASPASE3表達(dá)量分別為06±0029、16±0041和185±0065，而未轉(zhuǎn)染IE1的HELA細(xì)胞CASPASE3表達(dá)量分別為085±0061、26±0058和45±0065。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組比值差異有顯著意義P001，從而證明轉(zhuǎn)染后的IE1HELA細(xì)胞具有顯著抗凋亡功能，細(xì)胞學(xué)觀察也證實(shí)這一點(diǎn)。結(jié)論1建立了HCMV感染引起的先天性嬰兒肝炎綜合征人群的血清蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)庫和HCMV感染神經(jīng)瘤細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)、外液差異蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)庫，并發(fā)現(xiàn)了HCMV臨床個(gè)體及細(xì)胞學(xué)改變的有意義的蛋白質(zhì)組學(xué)指標(biāo)。2HCMV感染過程持續(xù)增高的細(xì)胞蛋自因子，可能與HCMV感染所產(chǎn)生的細(xì)胞凋亡有關(guān)。3可調(diào)控表達(dá)外源基因的TETON質(zhì)粒，可以在DOX誘導(dǎo)下，表達(dá)與DOX劑量依賴的外源插入基因編碼蛋白HCMVIE1，可抑制細(xì)胞凋亡。

簡介：骨缺損、骨不連的修復(fù)，一直是骨科領(lǐng)域的棘手問題，人們采用許多修復(fù)辦法如自體骨移植、同種異體骨移植、異種骨移植、金屬材料、陶瓷及人工合成的高分子材料等來修復(fù)骨缺損，但是它們都有各自的缺陷。如供體來源有限、免疫排異反應(yīng)、難以降解、有毒及其它副反應(yīng)。近年來設(shè)計(jì)仿生骨基質(zhì)材料，為解決骨缺損及骨不連修復(fù)提供了全新的修復(fù)辦法，并己滲入到骨科各個(gè)領(lǐng)域，成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。仿生骨基質(zhì)材料就是設(shè)計(jì)一種具有和天然骨基質(zhì)類似的結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)仿生和功能功能仿生的骨基質(zhì)材料。這種仿生骨基質(zhì)材料應(yīng)在體內(nèi)除了應(yīng)有良好的生物活性和降解性，具有促進(jìn)或加速骨組織修復(fù)的效能是當(dāng)前生物材料研究的重點(diǎn)。本文基于自然骨的組元和微觀結(jié)構(gòu)，通過微觀結(jié)構(gòu)仿生與化學(xué)組元優(yōu)化相結(jié)合，將納米磷酸三鈣TCP顆粒與骨膠原微纖維復(fù)合成為類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維，從而可有效地利用TCP良好的生物降解特性、形貌變化特性、載體功能和膠原良好的細(xì)胞組織相容性以及兩者的協(xié)同效應(yīng)，期望構(gòu)造出一種具有獨(dú)特微納結(jié)構(gòu)的新型骨修復(fù)再生材料，并通過體內(nèi)、外系列實(shí)驗(yàn)研究觀察其理化性能、生物相容性及其誘導(dǎo)、傳導(dǎo)成骨的能力，為骨組織高效重建創(chuàng)建良好的的初始平臺(tái)。為此，本論文首先開展對(duì)復(fù)合材料的制備及其理化性能的系統(tǒng)研究和表征，然后進(jìn)行了對(duì)類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維基復(fù)合材料的體外細(xì)胞相容性和生物活性研究，最后開展了類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維基復(fù)合材料對(duì)兔股骨骨缺損修復(fù)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究，初步評(píng)價(jià)了它的骨修復(fù)能力。主要的研究內(nèi)容如下1經(jīng)過酸性介質(zhì)對(duì)膠原處理形成膠原微纖維，分別加入納米TCP顆粒，在濕化學(xué)條件下制成類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維基多孔BTCPCOL復(fù)合材料，應(yīng)用掃描電鏡觀察復(fù)合材料的顯微形貌、孔徑，測(cè)量孔隙率，并浸泡于PBS緩沖液中觀察BTCPCOL復(fù)合材料的形貌變化。結(jié)果顯示酸性條件下，類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維構(gòu)成的孔壁成網(wǎng)狀；最佳酸性條件為PH2；復(fù)合材料的孔徑在100ΜM左右，孔隙率為90％以上。經(jīng)過體外緩沖溶液的浸泡，復(fù)合材料表面行成花瓣簇狀形狀的HA，形成有利于成骨細(xì)胞生長的表面結(jié)構(gòu)。2采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，把成骨樣細(xì)胞MG63和類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維基多孔BTCPCOL復(fù)合材料復(fù)合培養(yǎng)，以TCP和MG63分別做陽性和陰性對(duì)照，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的粘附和增殖變化ALP活性測(cè)定觀察材料對(duì)細(xì)胞分化的影響；掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞在材料中的生長和形態(tài)改變；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR和半定量分析檢測(cè)材料對(duì)細(xì)胞內(nèi)骨特異基因表達(dá)的影響以及利用流式細(xì)胞儀FCM觀察分析復(fù)合材料對(duì)細(xì)胞周期的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①細(xì)胞在種植到材料表面后隨時(shí)間延長而黏附的細(xì)胞數(shù)量增加，納米ΒTCPCOL組高于單純TCP組P005。②細(xì)胞接種5天時(shí)，納米相TCPCOL表面的細(xì)胞增殖數(shù)明顯高于單純TCP組P005。③從復(fù)合培養(yǎng)的第5天起，納米相TCPCOL組細(xì)胞分泌的ALP開始增加明顯，且高于單純TCP組，與空白對(duì)照組的增加無明顯差異。④形態(tài)學(xué)上SEM可以看到復(fù)合材料表面細(xì)胞呈扁平梭形，分布均勻、延展性好，隨著時(shí)間延長并可見到細(xì)胞基質(zhì)分泌沉積；激光共聚焦顯微鏡顯示細(xì)胞核分裂活躍。⑤RTPCR及半定量分析證實(shí)，TCPCOL與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)后，成骨樣細(xì)胞內(nèi)骨鈣素和I型膠原的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組P005。⑥細(xì)胞周期分析顯示，TCPCOL提高了MG63細(xì)胞的細(xì)胞周期的S期細(xì)胞數(shù)百分比，由正常的35618％增加到了59480％，表明增加了DNA的合成。3選用健康新西蘭大白兔24只48側(cè)股骨髁做成圓柱狀骨缺損模型，將TCPCOL復(fù)合材料植入骨缺損處，設(shè)不植入任何材料的骨缺損做空白對(duì)照。術(shù)后2、4、8、12周進(jìn)行X線攝片檢查，并取材做組織形態(tài)學(xué)、掃描電鏡觀察；并對(duì)股骨缺損局部骨密度進(jìn)行測(cè)定，初步評(píng)價(jià)復(fù)合材料的骨修復(fù)能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①X線顯示，2周時(shí)骨缺損區(qū)密度逐漸增高，材料未發(fā)生大量降解；4周時(shí)植入?yún)^(qū)域材料的輪廓變得模糊，植入?yún)^(qū)域的亮度開始下降，材料的密度開始逐漸降低；8周時(shí)缺損區(qū)邊緣模糊，密度繼續(xù)降低，植入體與宿主骨部分橋接，骨透射性進(jìn)一步降低，骨組織向材料內(nèi)部延伸，材料大部分被降解替代；12周時(shí)，材料形狀消失，密度與正常組織大致相當(dāng)，材料與骨組織融合在一起，骨缺損基本被修復(fù)。而12周時(shí)，對(duì)照組缺損區(qū)有少量的骨癡和硬化，骨修復(fù)征象不明顯。②組織切片可見，材料植入2周時(shí)，缺損內(nèi)見大量成骨細(xì)胞、纖維組織和新生微血管長入；4周時(shí)，植入?yún)^(qū)有大量小梁骨組織及類骨質(zhì)形成；8周時(shí)，支架材料大部分吸收，類骨質(zhì)不斷增多，形成大量骨島；12周時(shí)，新骨大面積生成，新骨組織漸連接成片，可見哈佛氏系統(tǒng)對(duì)照組在12周時(shí)，圓形缺損形態(tài)完整，未見到有明顯的骨組織形成。③骨密度檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組在4周以后骨礦化的速度較對(duì)照組明顯增高，在12周時(shí)，接近正常小梁骨的密度P005。經(jīng)過上述研究，仿生TCPCOL復(fù)合材料具有和骨組織相類似的三維多孔結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)出良好的生物相容性和生物活性，在骨缺損修復(fù)的過程中對(duì)骨的再生有明顯的影響，能夠加速骨組織的修復(fù)，具有良好的骨傳導(dǎo)性。因此，類骨結(jié)構(gòu)膠原纖維基多孔TCPCOL復(fù)合材料可以成作一種新而有效的骨修復(fù)材料。

簡介：稀土熒光材料因?yàn)槠涮赜械陌l(fā)光性能在生物標(biāo)記方面有良好的潛在應(yīng)用價(jià)值，得到了許多研究者的極大關(guān)注。在眾多的稀土熒光材料當(dāng)中Y2O3EU3是一種廣泛使用的紅色發(fā)光材料，它具有高亮度、窄譜、顏色純正和發(fā)光穩(wěn)定的特點(diǎn)，為了得到Y(jié)2O3EU3材料，研究人員開發(fā)了許多制備方法，有溶膠凝膠法，水熱法，溶劑熱法，沉淀法和自組裝法等等。本文采用溶膠凝膠法制備Y2O3EU3熒光粉，通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)探究EU3摻雜量、溫度、反應(yīng)時(shí)間、煅燒條件、分散劑的選擇及濃度等對(duì)Y2O3EU3材料的粒度和發(fā)光性能等的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在常溫反應(yīng)30MIN、采用PEG2000作為分散劑且濃度為4％、800℃燒成的條件下制備的粉體能夠達(dá)到納米級(jí)別，而且具有較好的熒光性能。（銪摻雜量為5、10和15的情況下發(fā)光強(qiáng)度差不多，銪相對(duì)而言成本較高，所以選擇對(duì)摻雜量為5的材料進(jìn)行探究）以摻雜鑭系稀土氧化銪的氧化釔為研究對(duì)象，探究了在溶膠凝膠合成條件下，控制晶體在納米尺度上的形貌變化的外界因素和動(dòng)力學(xué)因素。利用動(dòng)力學(xué)控制的制備過程，將經(jīng)過氨水調(diào)節(jié)PH的Y2O3、EU2O3的硝酸鹽溶液經(jīng)過絡(luò)合、聚合、水浴蒸發(fā)、干燥和煅燒成功合成了納米級(jí)Y095EU0052O3粉體。隨后將納米粉體進(jìn)行二氧化硅包覆和表面氨基化處理，得到能夠與生物分子相連的結(jié)構(gòu)。從材料的熒光光譜圖分析，在467NM和534NM可見光的激發(fā)下Y095EU0052O3粉在614NM處出現(xiàn)發(fā)射峰，發(fā)紅光，氨基化之后發(fā)射峰形態(tài)不變，強(qiáng)度稍微降低，說明氨基化對(duì)材料的發(fā)光性能沒有實(shí)質(zhì)性影響，這是材料進(jìn)行生物學(xué)應(yīng)用的前提條件。本論文通過對(duì)比氨基化前、后的Y095EU0052O3性能變化，如掃描電鏡圖、ZETA電位、紅外吸收光譜等幾種變化，表明成功的完成了SIO2包覆并連接上氨基。對(duì)材料進(jìn)行初步的生物學(xué)評(píng)價(jià)，包括細(xì)胞毒性試驗(yàn)、溶血、凝血試驗(yàn)等。結(jié)果表明，氨基化前、后的材料細(xì)胞毒性都很小，幾乎都沒有溶血性，抗凝血性也較好。

簡介：分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水稻空間誘變生物學(xué)效應(yīng)及分子多態(tài)性的初探STUDIESONTHEBIOLOGICALEFFEETANDMOLECULARPOLYMORPHISMOF形CEMUTANTSFROMSPAEE幾GHT研究生羅華程指導(dǎo)教師羅利軍教授指導(dǎo)小組羅利軍教授余舜武副研究員梅捍衛(wèi)研究員劉灶長研究員陳亮副研究員專業(yè)作物生物技術(shù)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士研究方向水稻分子生物學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院二00八年六月223多態(tài)性片段的回收與分析20224突變株系的RTPCR分析20225突變體種子的直鏈淀粉和蛋白質(zhì)含量測(cè)定21226突變株系的抗旱性213結(jié)果與分析2231突變體主要農(nóng)藝性狀表現(xiàn)22311空間誘變處理對(duì)突變體生育期的影響22312空間誘變處理對(duì)突變體株高的影響22313空間誘變處理對(duì)突變體葉型的影響22314空間誘變處理對(duì)突變體穗型的影響2332突變體的分子檢測(cè)，24321SSR和INDEL標(biāo)記的多態(tài)率24322突變株系的突變方式25323突變體的突變序列分析26324突變位點(diǎn)的功能預(yù)測(cè)28325突變體的AFLP標(biāo)記篩選2833突變體突變基因在各個(gè)時(shí)期的表達(dá)分析29331苗期突變株系的表達(dá)分析29332分集期突變株系的表達(dá)分析30333抽穗期突變株系的表達(dá)分析3034突變體代謝產(chǎn)物分析‘31341突變體種子直鏈淀粉含量分析31342突變體種子蛋白質(zhì)含量分析，3135突變株系抗旱性初步分析犯4討論，3341空間誘變的農(nóng)藝性狀分析3342空間誘變的多態(tài)性分析3443空間誘變的突變位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)分析3544部分突變基因功能的預(yù)測(cè)分析3645突變株系376的分析和探討3646空間誘變效應(yīng)的探討‘37參考文獻(xiàn)，39致謝47附錄48附錄一AFLP的引物組合48附錄二CTAB法提取大量DNA流程48附錄三RNA的小量提取49附錄四DNA消化處理DNASEL處理49附錄五第一鏈CDNA的合成50附錄六RT一PCR擴(kuò)增保守片段50附錄七DNA片段的回收一51附錄八PCR產(chǎn)物的克隆51

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文PHFL通過穩(wěn)定P53而抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)凋亡的機(jī)制研究目錄型刪282釃舢咖螋一目錄???????????????????????????????L縮略詞表??????????????????????????????3摘要???????????????????????????????5ALBSCL．ACT????????????????????????????????????????．．7前言??????????????????????????????????????．．9日U舌?????????????????????????????????????????．9材料和方法????????????????????????????．．12L材料????????????????????????????????????．．121宿主菌????????????????????????????122載體??????????????????????????????．．123細(xì)胞株????????????????????????．124質(zhì)粒??????????????????????????????．．125引物序列????????????????????????13I?。甈CR引物、構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒的引物和定點(diǎn)突變引物??????136試劑盒和試劑?????????????????????。147抗體??????????????????????????????．．158主要溶液和培養(yǎng)基???????????????????169主要儀器設(shè)備???????????????????????192方法??????????????????????????????????????．201制備DH5Q大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞???????????????202構(gòu)建質(zhì)粒???????????????????????203小量質(zhì)粒抽提TIANGEN?????????????????224定點(diǎn)突變KOD．PLUSMUT唱ENESIS飚T，TOYOBO??????235細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染?????????????????????????．．246雙熒光素酶報(bào)告反應(yīng)系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶活性?????????247IU’．PCR?????????????????????????????．248WESTEMBLOTTING?????????????????????259GST融合蛋白原核表達(dá)及純化???????????????2610GSTPULLDOWN實(shí)驗(yàn)???????????????????2711熒光定位????????????????????????2812克隆形成??????????????????????????2813CDK法檢測(cè)細(xì)胞增殖???????????????????．．2814體外泛素化?????????????????????．．2815BRDU插入法檢測(cè)細(xì)胞增殖BRDUCEUPROLIFBRATIONELISAKIT，ROCHE，JAPAN???????????????????????????????2916PIPROPIDIUMIODIDE染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡???????????293使用計(jì)算機(jī)分析軟件??????????????????????29結(jié)果????????????????????????????????????????．．301．PHFL特異性激活P53信號(hào)通路??????????????302．PHFL對(duì)P53通路的激活作用依賴于P53的存在????????323．PHFL增強(qiáng)P53轉(zhuǎn)錄激活活性???????????????334．PHFL與P53在體內(nèi)互作????????????????????．34復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文PHFL通過穩(wěn)定P53而抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)凋亡的機(jī)錆研究PCGAPLCI迮DR5GREHSENFATNFLBRBSRECHXGFPPBSIPGSTIGGQI；汀一PCRPAGETBSBSADAPIWBHASHRNAWTUBAABPKDAMWB2．MG縮略詞表POLYCOMB伊OUPACTIVATORPROTEINC√4小伊RESPONSEELEMENTDEATHRECEPTOR5GLUCOCORTICOIDRESPONSEELEMENTHEATSHOCKRESPONSEELEMENTNUCLEARFACTOROFACTIVATEDTCELLSNUCLEARFACTOR_KAPPABRETINOBLASTOMASEMMRESPONSIVEELEMENTCYCLOHEXIMIDE鏟EENFLUORESCENTPROTEINPHOSPHATEBUF五∞．EDSALINEIMMUNOPRECIPTATIONGLUTATHIONESTR{MSFERASEIMMUNOGLOBULINGQUAMITATIVEREVERSETRANSCRIPTIONPCRPOLYPROPYLENEACYLGELELECTROPHORESIS1’RIS．BUFRERSALINEBOVINESERUMALBUMIN4，6一DIAMIDINO一2一PHENYLINDOLEWESTEMBLOTHEMAGGLUTININSMALLHAI印IN砌叮AWILDTYPEUBIQUITINAMINOACIDBASEPAIRK訂ODALTONSMOLECULARWEIGHTB2MICR0910BULIN3

簡介：目的探討脈搏指示劑連續(xù)心排出量監(jiān)測(cè)PULSEINDEXCONTINUOUSCARDIACOUTPUTPICCO對(duì)膿毒性休克患者的影響及早期血清生物學(xué)指標(biāo)對(duì)膿毒性休克診斷及預(yù)后判斷的影響。方法選取2014年1月至2016年12月期間的延邊大學(xué)附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科收治的膿毒性休克患者58例，選擇其中重癥監(jiān)護(hù)病房INTENSIVECAREUNIT，ICU住院時(shí)間大于24小時(shí)的患者，根據(jù)是否行PICCO監(jiān)測(cè)指導(dǎo)治療，分為對(duì)照組（24例）、PICCO組24例。所有膿毒性休克患者（58例），根據(jù)其預(yù)后情況分為存活組（28例）、死亡組（30例）。收集對(duì)照組，PICCO組患者一般資料、急性生理與慢性健康評(píng)分ACUTEPHYSIOLOGYCHRONICHEALTHEVALUATIONⅡ，APCHEⅡ評(píng)分、血清學(xué)指標(biāo)水平，兩組患者的ICU住院時(shí)間、死亡率，中心靜脈壓CENTRALVENOUSPRESSURE，CVP，停用血管活性藥百分率，治療前3天總輸液量。PICCO組第1、2、3天的連續(xù)指標(biāo)。收集存活組，死亡組患者年齡、入院時(shí)APCHEⅡ評(píng)分、17項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)。結(jié)果1對(duì)照組、PICCO組患者年齡、性別，入院時(shí)SBPDBP、APACHEⅡ評(píng)分等無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0052治療過程中，PICCO監(jiān)測(cè)指導(dǎo)治療使血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)CI、GEDI、ELWI、SVRI維持在接近于正常值的范圍內(nèi)。治療3天后，與對(duì)照組比較，PICCO組患者72小時(shí)總輸液量雖然無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是在數(shù)值上明顯減少，且PICCO組能更早的達(dá)到血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)態(tài)，72小時(shí)內(nèi)有更高的血管活性藥物停用率，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001）與對(duì)照組比較，經(jīng)治療后，PICCO組患者具有更低APACHEⅡ評(píng)分及更短的ICU住院時(shí)間，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）兩組患者死亡率比較無統(tǒng)計(jì)意義治療第3天，經(jīng)比較兩組患者的LAC、IL6、NGAL、NTPROBNP、SCYSC、PCT、SCRP等指標(biāo)的水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005或P＜001，PICCO組患者具有更低的上述炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子水平。3利用受試者工作特征曲線（RECEIVEOPERATINGACTERISTICCURVE，ROC曲線）回顧性分析CKMB、NTPROBNP等17項(xiàng)細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)與膿毒性休克（58例）的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL6、NGAL具有早期診斷膿毒性休克的預(yù)測(cè)價(jià)值，剩余指標(biāo)中關(guān)系較大的依次是SCYSC、CKMB、UA。4通過比較生存組與死亡組患者入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分、LAC、SCYSC等17項(xiàng)指標(biāo)與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示APACHEⅡ評(píng)分、LAC、SCYSC、UA、NGAL、IL6等6項(xiàng)指標(biāo)與患者的預(yù)后密切相關(guān)，與對(duì)照組相比，存活組患者具有更低的APACHEⅡ評(píng)分及LAC、SCYSC、UA、NGAL、IL6水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005或P＜00T）。而兩組患者的年齡、CKMB、NTPROBNP、MYO、CTNⅠ、PCT、WBC、SCRP、DD、NEUT％、PLT、DBIL、SCR、TBIL、BUN等指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。分析58例膿毒性休克患者的基本資料及生物學(xué)指標(biāo)，LOGISTIC二元回歸分析顯示，APACHEⅡ評(píng)分，IL6、NGAL、LAC、SCYSC、UA、NGAL是膿毒性休克死亡相關(guān)的因素（P值均＜005。結(jié)論1PICCO監(jiān)測(cè)指導(dǎo)治療有助于膿毒性休克患者早期達(dá)到血流動(dòng)力學(xué)的穩(wěn)態(tài)，減輕體內(nèi)的炎癥反應(yīng)程度，具有更低的APACHEⅡ評(píng)分，最終縮短了膿毒性休克患者的ICU住院時(shí)間。2IL6、NGAL、SCYSC、CKMB、UA具有早期診斷膿毒性休克的預(yù)測(cè)價(jià)值，其中IL6早期診斷預(yù)測(cè)價(jià)值更高，NGAL具有更高的敏感性和特異性。3APACHEⅡ評(píng)分、血LAC、SCYSC、UA、NGAL、IL6水平與膿毒性休克患者預(yù)后相關(guān)，NGAL可能成為判斷膿毒性休克預(yù)后的一個(gè)新的生物學(xué)標(biāo)記物。

簡介：目錄MABSTRACT第一章緒論11研究背景及意義12研究進(jìn)展121UVB輻射增強(qiáng)對(duì)有機(jī)殘?bào)w分解的影響122UVB輻射增強(qiáng)對(duì)營養(yǎng)元素吸收、累積及溫室氣體排放的影響123UVB輻射增強(qiáng)對(duì)土壤微生物的影響13研究內(nèi)容及目標(biāo)14技術(shù)路線第二章研究材料與方法21供試材料與試驗(yàn)地點(diǎn)22試驗(yàn)設(shè)計(jì)23樣品采集231土樣采集232氣樣采集24測(cè)定與計(jì)算方法241土壤微生物量碳242土壤酶活性243土壤呼吸244Q10值計(jì)算245土壤代謝熵25數(shù)據(jù)分析第三章UVB輻射增強(qiáng)對(duì)不同大麥品種土壤微生物量碳的影響31盆栽條件下UVB輻射增強(qiáng)對(duì)大麥土壤微生物量碳的影響32大田條件下UVB輻射增強(qiáng)對(duì)不同大麥品種土壤微生物量碳的影響321根際土壤微生物量碳322非根際土壤微生物量碳33討論第四章UVB輻射增強(qiáng)對(duì)不同大麥品種土壤酶活性的影響41盆栽條件下UVB輻射增強(qiáng)對(duì)大麥土壤酶活性的影響411UVB輻射增強(qiáng)對(duì)土壤脫氫酶活性的影響412UVB輻射增強(qiáng)對(duì)土壤淀粉酶活性的影響413UVB輻射增強(qiáng)對(duì)土壤轉(zhuǎn)化酶活性的影響42大田條件下UVB輻射增強(qiáng)對(duì)不同大麥品種土壤酶活性的影響摘要摘要大氣平流層臭氧耗損所引起的地表UVB輻射增強(qiáng)是全球變化研究的重要問題之一。UVB輻射增強(qiáng)對(duì)農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)的影響是人們普遍關(guān)注的問題。通過盆栽和大田模擬試驗(yàn)，研究了UVB輻射增強(qiáng)對(duì)不同大麥品種土壤生物學(xué)特性的影響。UVB輻射設(shè)對(duì)照AMBIENT和增強(qiáng)（ELEVATED1441112水平，增強(qiáng)處理相當(dāng)于南京地區(qū)45月份自然光UVB輻射量的120。供試大麥品種有三個(gè)，分別是單2號(hào)、蘇啤3號(hào)和蘇啤4號(hào)。供試大麥?zhǔn)墙K種植面積較大的代表性品種。在大麥主要生育期，包括分蘗期、拔節(jié)期、孕穗期、抽穗期和成熟期，分別采集土壤和氣體樣品，測(cè)定根際土壤和非根際土壤微生物量碳、土壤酶活性和土壤呼吸速率等指標(biāo)，以探討UVB輻射增強(qiáng)對(duì)大麥土壤有機(jī)碳轉(zhuǎn)化的影響。主要研究結(jié)果如下1UVB輻射增強(qiáng)可明顯降低根際與非根際土壤微生物量碳含量（P005，但不同大麥品種因生育期而異，且未改變土壤微生物量碳在生育期中的變化趨勢(shì)。在大麥生長后期（抽穗期和成熟期），盆栽土壤微生物量碳含量低于大田。2與對(duì)照相比，UVB輻射增強(qiáng)可明顯降低土壤呼吸速率及其溫度敏感系數(shù)。值，尤其蘇啤3號(hào)和單2號(hào)，UVB輻射處理間。值差異達(dá)顯著水平（P005，但蘇啤4號(hào)Q10值則表現(xiàn)為增加。UVB輻射增強(qiáng)可明顯提高根際和非根際土壤代謝熵，但未改變土壤代謝熵在生育期的變化趨勢(shì)。3與對(duì)照相比，UVB輻射增強(qiáng)對(duì)土壤酶活性的影響因不同大麥品種而異，即UVB輻射增強(qiáng)可明顯提高單2號(hào)大麥根際土壤脫氫酶和轉(zhuǎn)化酶活性，降低土壤淀粉酶活性；明顯提高蘇啤3號(hào)大麥根際土壤脫氫酶、淀粉酶和轉(zhuǎn)化酶活性；可明顯降低蘇啤4號(hào)根際土壤脫氫酶活性，提高土壤淀粉酶和轉(zhuǎn)化酶活性。4無論盆栽或大田試驗(yàn)，根際或非根際土壤脫氫酶、淀粉酶和轉(zhuǎn)化酶活性，UVB輻射處理間的差異均未達(dá)顯著水平。5不同大麥品種對(duì)UVB輻射增強(qiáng)響應(yīng)的差異，與土壤微生物量碳及土壤呼吸的變化有密切關(guān)系。關(guān)鍵詞UVB輻射；大麥；根際土壤；土壤微生物量碳；土壤呼吸；土壤酶活性I

簡介：點(diǎn)擊查看更多骨髓增生異常綜合征(MDS)遺傳學(xué)分型的生物學(xué)特征初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：廣西大學(xué)博士學(xué)位論文菜粉蝶顆粒體病毒的分子生物學(xué)研究姓名溫榮輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師陳保善20070101廣西大掌博士掌位論文菜粉蝴Q頁糊吖拳病毒的分子生物掣U開究組的物理圖譜。該物理圖譜與已報(bào)道的其他的PIRAGV分離株的基因組物理圖譜比較，觀察到少量酶切位點(diǎn)的差異。PIRAGVE3基因組中17個(gè)ECORI位點(diǎn)中的14個(gè)與PIRAGV英國分離株ARGVL基因組中19個(gè)ECORI位點(diǎn)中的14個(gè)位點(diǎn)位置相一致，但PIRAGVE3基因組中缺失了ARGVL另外的5個(gè)ECORI位點(diǎn)，同時(shí)在基因組其他位置增加了3個(gè)ECORI位點(diǎn)。3PIRAGVDNAPOLYMERASEDNAPOO基因的研究PIRAGVDNAPOL編碼框包含3135個(gè)核苷酸，編碼一個(gè)1045個(gè)氨基酸組成的預(yù)計(jì)分子量為12216KDA的蛋白質(zhì)。PIRAGVDNAPOL基因與其他的桿狀病毒的DNAPOL基因有2870％的氨基酸同源性。與其他的桿狀病毒DNAPOL基因一樣，PIRAGVDNAPOL基因包含有保守的3’5’外切核酸酶的基序MOTIF以及DNA結(jié)合功能域DOMAIN。NORTHERN雜交顯示，在PIRAGV感染的菜粉蝶幼蟲體內(nèi)，咖APOL基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物主要為37KB的MRNA。5’和3’CDNA末端快速擴(kuò)增RACE顯示PIRAGVDNAPOL基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物起使于翻譯起使密碼子ATG上游378的T，終止于一個(gè)POLYA信號(hào)序列AATAAA?；贒NAPOL基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示PIRAGV與蘋果小卷葉蛾顆粒體病毒CYDIAPOMONELLAGV，CPGV，云杉卷葉蛾顆粒體病毒CHORISTONEURAOCCIDENTALISGV，CHOCGV和蘋果異形小卷蛾顆粒體病毒CRYPTOPHLEBIALEUCOTRETAGV，CRLEGV在進(jìn)化關(guān)系上最為密切。4PIRAGV的全基因組測(cè)序PIRAGV基因組全長108476BP，堿基組成中AT含量為668％，預(yù)測(cè)PIRAGV基因組含有125個(gè)ORF；，150NT，其中29個(gè)OFF是在目前所有已經(jīng)測(cè)序的桿狀病毒基因組中都具有的，30個(gè)OFF是顆粒體病毒所特有的，6個(gè)OFF是PIRAGV所特有的。在基因組中的非編碼區(qū)，N

簡介：IILLLLLLLLILLLLIHILIHLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLY3246988摻蒸勺論史編號(hào)密漿勞▲乍露犬博士學(xué)位論文長鏈非編碼RNALINC01116在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其腫瘤生物學(xué)功能與機(jī)制的研究STUDYONLMEEXPRESSIONOFLONGINTERGENICNONCODINGRNALINC011I6INHUMANGLIOMAANDLTSBIOLOGICALFUNETHMANDMOLECULARMECHANISM研宄生姓名，I時(shí)晶亮學(xué)號(hào)2F1142128指導(dǎo)教師T駱純教授第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院學(xué)科、專業(yè)學(xué)位類型，答辯日期，外科學(xué)神經(jīng)外科臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位21117年5月二。一七年五月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名1匕氓日期劫，7年R月，7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)第二軍醫(yī)大學(xué)可以將學(xué)位論文全文或部分內(nèi)容編入中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者豁寸茂氐日期丘，7年F月’夕日導(dǎo)師簽名少易趔日期2力夕年R月7夕目

簡介：分類號(hào)密級(jí)單位代碼學(xué)號(hào)洳≯J～嚎博士學(xué)位論文中文論文題目1033510617032≥筆3C論文題目￡壘塾QG皇壁墜IQQGYQ￡堡壘璺璺磐Q叢I塑塾XOFBLOODCLAM№脅，℃口艘刀儺口ANDLMMUN0109LCALCNARACTENSNCSOIHOSTBLOODCELLSPATHOGENBIOL02YOFMASSMORTIALI鯉OF1●1●，N●F■1●●●●D100DCIAM』纓ZFF口，℃口聊以DS口ANNLMMUN0109LCALCHARACTERISTICSOFHOSTBLOODCEUSAUTHOR’SSIGNATU聯(lián)洳批SUPEN7LS0R7SSLGNATUR一●●●ETEMALF沁VIEWERS姓名3驅(qū)簽望焦工回EXAMININGCO刪ILITTEECHAI印ERSONEXAMINMGCO刪NIDATEOFORALDEFENCE董謝

簡介：福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文DEPDC7基因在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)作用姓名王曉江申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師林德馨廖之君2011035細(xì)胞膜上，胞質(zhì)內(nèi)也可見。4生長曲線圖顯示，肝癌細(xì)胞生長較快，在72H內(nèi)達(dá)到對(duì)數(shù)生長期，轉(zhuǎn)染PIRES2EGFPDEPDC7質(zhì)粒后的肝癌細(xì)胞增殖較慢。5上調(diào)DEPDC7基因的表達(dá)，細(xì)胞增殖率受抑制，但未見有細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。6上調(diào)DEPDC7基因的表達(dá)，對(duì)腫瘤的侵襲起抑制作用，并且能夠使腫瘤侵襲相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶類基因的表達(dá)量發(fā)生變化。結(jié)論結(jié)論1DEPDC7基因在正常肝細(xì)胞中高表達(dá)，肝癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，其表達(dá)的蛋白主要定位于細(xì)胞膜上，胞質(zhì)內(nèi)也可見。2上調(diào)DEPDC7基因表達(dá)后不引起細(xì)胞的凋亡，能抑制細(xì)胞增殖率和肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，MMP9基因表達(dá)量降低，TIMP1、TIMP3基因表達(dá)量增高。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞基因芯片，生物信息學(xué)，肝細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞，DEP結(jié)構(gòu)域

簡介：生物相容性是生物材料研究中的關(guān)鍵問題，而細(xì)胞在材料表面的粘附和生長情況是生物相容性評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容。通常認(rèn)為生物材料植入體內(nèi)或進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先在材料表面發(fā)生蛋白質(zhì)的吸附，然后發(fā)生細(xì)胞在材料表面的粘附和生長。而基因表達(dá)譜芯片和PCR芯片技術(shù)能幫助人們了解細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)情況，深入研究與細(xì)胞粘附和生長相關(guān)的生物學(xué)通路，從分子水平解釋材料與細(xì)胞之間的相互作用。本論文的目的是1利用基因表達(dá)譜芯片研究殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面PC12細(xì)胞的基因表達(dá)情況，并與本課題組前期的吸附蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果進(jìn)行聯(lián)合分析，研究材料表面吸附蛋白質(zhì)對(duì)細(xì)胞基因組學(xué)的影響2利用信號(hào)通路PCR芯片研究無涂層氮化鈦涂層鎳鈦合金對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)通路中基因表達(dá)情況，對(duì)本課題組前期發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞粘附和生長過程中重要生物學(xué)信號(hào)通路進(jìn)行驗(yàn)證，研究材料表面吸附蛋白質(zhì)對(duì)細(xì)胞粘附的影響，綜合上述兩部分結(jié)果，對(duì)細(xì)胞粘附和生長的重要生物學(xué)信號(hào)通路進(jìn)行研究，闡述材料表面吸附蛋白質(zhì)介導(dǎo)細(xì)胞粘附和生長的分子機(jī)理。本論文的具體工作如下1利用勻膠法制備殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜，利用吖啶橙染色法和CCK8實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定PC12細(xì)胞在這兩種材料和正常對(duì)照組表面的細(xì)胞形態(tài)和存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在4H和24H兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，膠原蛋白殼聚糖膜更有利于PC12細(xì)胞的粘附和形態(tài)鋪展兩種材料表面培養(yǎng)4H時(shí)細(xì)胞存活率差異較小，在24H時(shí)膠原蛋白殼聚糖膜表面細(xì)胞存活率明顯大于殼聚糖膜組，說明與殼聚糖膜相比，膠原蛋白殼聚糖膜促進(jìn)PC12細(xì)胞的粘附和生長。2利用基因表達(dá)譜芯片研究殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面PC12細(xì)胞生長4H和24H后基因表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)殼聚糖膜組差異表達(dá)基因數(shù)量較多，通過RTPCR實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)PAK1、ACTN1、BCAR1、AKT1四個(gè)基因的表達(dá)情況與基因表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。此外，利用信號(hào)通路PCR芯片分別檢測(cè)無涂層氮化鈦涂層鎳鈦合金表面人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)4H和24H后，“TGFΒBMP信號(hào)通路”和“細(xì)胞骨架調(diào)控信號(hào)通路”中相關(guān)基因的表達(dá)，結(jié)果表明，在這兩條信號(hào)通路中氮化鈦涂層鎳鈦合金表面內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生差異表達(dá)的基因更多。3利用DAVID功能注釋工具對(duì)殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面PC12細(xì)胞生長4H和24H后的差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能分類分析，結(jié)果表明兩種材料主要參與生物學(xué)過程為細(xì)胞過程、代謝相關(guān)過程、細(xì)胞分化和發(fā)育等分子功能主要包括核苷酸、DNA、蛋白質(zhì)等相關(guān)的分子功能等細(xì)胞組分主要包括細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的細(xì)胞組分功能、細(xì)胞膜和細(xì)胞外相關(guān)的功能等。差異表達(dá)基因的生物學(xué)信號(hào)通路分析表明，材料與細(xì)胞作用后，主要影響細(xì)胞的粘著斑信號(hào)通路、肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)控信號(hào)通路、胰島素信號(hào)通路、EGFR1信號(hào)通路。與本課題組前期吸附蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果進(jìn)行聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)殼聚糖膜和膠原蛋白殼聚糖膜表面吸附的血清蛋白質(zhì)作為配體與細(xì)胞表面受體結(jié)合后，通過細(xì)胞骨架跨膜連接將細(xì)胞外信號(hào)傳遞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，激活粘著斑、MAPK、PI3K等信號(hào)通路，參與粘著斑和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組裝等過程，通過以上生物學(xué)信號(hào)通路相互作用，膠原蛋白殼聚糖膜更有利于PC12細(xì)胞的粘附和生長。4對(duì)無涂層氮化鈦涂層鎳鈦合金表面人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長4H和24H后的差異表達(dá)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)“TGFΒBMP信號(hào)通路”和“細(xì)胞骨架調(diào)控信號(hào)通路”兩條信號(hào)通路發(fā)生激活。與本課題組前期蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)結(jié)果聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞粘附階段，通過激活TGFΒ信號(hào)通路增加整聯(lián)蛋白ΑΒ亞基基因的表達(dá)，或通過含RGD序列的蛋白質(zhì)與活化的整聯(lián)蛋白結(jié)合，激活粘著斑通路和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)控信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的粘附在細(xì)胞生長和增殖階段，氮化鈦涂層鎳鈦合金可有效減少無涂層鎳鈦合金的鎳離子溶出，激活肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架調(diào)控信號(hào)通路、粘著斑信號(hào)通路、能量代謝相關(guān)信號(hào)通路、炎癥反應(yīng)信號(hào)通路，抑制細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，改善細(xì)胞的功能。綜合上述材料與細(xì)胞的相互作用研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)粘著斑信號(hào)通路、細(xì)胞骨架調(diào)控信號(hào)通路等是影響細(xì)胞在材料表面的粘附和生長的重要信號(hào)通路。

簡介：碩士學(xué)位論文論文題目急性紅白血病生物學(xué)特征及臨床預(yù)后研究研究生姓名程文秀指導(dǎo)教師姓名孫愛寧陳蘇寧專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（血液病學(xué)）研究方向白血病的基礎(chǔ)與臨床研究論文提交日期2015年5月