簡(jiǎn)介：CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES／NONOCODE10224NO．100665DISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREEGELTIONANDHAS“BIOLR“1ENERATLONANASICDIOLORICALCHARACTERISTICSOFTWORECOMBINANTDUCKENTERITISVIRUSDELETINGSORF3／TKCANDIDATEMUXIAOYUSUPERVISORPROFESSORWANGJUNWEIDEGREECATEGORYMASTEROFAGRICULTURECOLLEGEVETERINARYMEDICINEFIRSTLEVELDISCIPLINEVETERINARYSCIENCESSECONDLEVELDISCIPLINEPREVENTINEVETERINARYSCIENCESHARBINCHINAJUNE2013東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩上學(xué)位論文2．3．2DEV全基因組與重組轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染????????????????182．3．3重組病毒的篩選及純化???????????????????????．．182．4重組病毒的鑒定?????????????????????????????????182．4．1引物設(shè)計(jì)與合成???????????????????????????182．4．2重組病毒的PCR鑒定?????????????????????????．192．4．3DEVAS3／DEVATK基因表達(dá)產(chǎn)物的間接免疫熒光檢測(cè)??????????．202．5重組病毒DEV△S3／DEV△TK生物學(xué)特性的基本研究?????????????202．5．1重組病毒DEVAS3／DEVATK的理化特性分析??????????????202．5．2重組病毒DEVAS3／DEVATK的體外穩(wěn)定性分析?????????????212．5．3重組病毒DEV△S3／DEV△TK與親本病毒生長(zhǎng)曲線的繪制?????????212．5．4重組病毒DEV．△S3／DEV△TK與親本病毒蝕斑直徑大小的比較???????2L2．6動(dòng)物試驗(yàn)????????????????????????????????．．2L2．6．1免疫分組??????????????????????????????2L2．6．2DEV病毒的超離純化?????????????????????????．．222．6．3咽及泄殖腔棉拭子中基因的檢測(cè)????????????????????222．6．4間接ELISA方法檢測(cè)鴨血清中抗體消長(zhǎng)規(guī)律??????????????。222．6．5中和抗體效價(jià)的測(cè)定??????????????????????????．．232．6．6病理組織學(xué)變化???????????????????????????．．233結(jié)果與分析????????????????????????????????????????243．1重組病毒轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建????????????????????????．243．1．1重組病毒同源臂基因的擴(kuò)增??????????????????????243．1．2表達(dá)盒基因的獲得???????????????????????????243．1．3重組質(zhì)粒的鑒定????????????????????????????．253．1．4左、右同源臂連接結(jié)果????????????????????????253．1．5PMDL8TGPTEGFP的連接結(jié)果?????????????????????273．1．6缺失病毒轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建???????????????????????263．2重組病毒的構(gòu)建與篩選?????????????????????????283．3重組病毒的鑒定?????????????????????????????????．．293．3．1重組病毒DEVAS3的PCR鑒定???????????????????????。293．3．2重組病毒DEVATK的PCR鑒定???????????????????????。293．3．3重組病毒的IIF檢測(cè)???????????????????????????293．4重組病毒DEVAS3／DEVATK生物學(xué)特性的基本研究?????????????3L3．4．1重組病毒DEV△S3／DEV．△TK的理化特性分析??????????????3L3．4．2重組病毒DEVAS3／DEVATK的體外穩(wěn)定性分析??????????????323．4．3重組病毒DEV△S3／DEV．△TK生長(zhǎng)曲線的繪制??????????????．423．4．4重組病毒DEV以S3／DEV△TK與親本病毒蝕斑直徑大小的比較???????42II

簡(jiǎn)介：目的先天性心臟病CONGENITALHEARTDEFECT，CHD是最常見(jiàn)的嬰幼兒先天畸形，發(fā)病率約為1％～2％，也是嬰幼兒非感染性疾病死亡的最主要原因。由于缺乏特異性早期診斷方法和治療策略相對(duì)單一且風(fēng)險(xiǎn)大，鑒定CHD相關(guān)易感基因并闡明其作用機(jī)理和調(diào)控機(jī)制，將具有重要的理論和實(shí)踐意義。心臟發(fā)育依賴于不同類型細(xì)胞（如心肌細(xì)胞、心內(nèi)膜細(xì)胞、心臟神經(jīng)嵴細(xì)胞）的遷移、分化、增殖和凋亡，涉及各種轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞黏附分子、信號(hào)分子所構(gòu)成的精確而復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。上述相關(guān)因素的改變將導(dǎo)致心臟異常發(fā)育而表現(xiàn)為CHD。DICER1基因定位于14Q3213，編碼一種具有1922個(gè)氨基酸殘基的核糖核酸酶。DICER1酶能夠識(shí)別具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的單鏈前體MIRNAPRECURSMIRNA，PREMIRNA或雙鏈RNA（DOUBLESTRRNA，DSRNA），并將其切割成21～23NT的成熟MIRNA或SIRNA。DICER1基因表達(dá)異常與腫瘤、多發(fā)性硬化癥、突發(fā)性聽(tīng)力喪失等疾病密切相關(guān)。DICER1基因條件性敲除小鼠表現(xiàn)出心臟畸形，但關(guān)于DICER1基因在心臟發(fā)育過(guò)程中的具體作用機(jī)理及其調(diào)控機(jī)制尚不清楚。NFATC3NUCLEARFACTOFACTIVATEDTCELLSC3，NFATC3基因定位于16Q222，編碼產(chǎn)物NFATC3蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子，可以與靶基因調(diào)控序列中NFATC3結(jié)合位點(diǎn)（一致序列為GGAAA）結(jié)合，調(diào)控靶基因的表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示NFATC3基因參與正常心臟發(fā)育過(guò)程。應(yīng)用生物信息學(xué)軟件，我們?cè)贒ICER1基因啟動(dòng)子區(qū)預(yù)測(cè)到轉(zhuǎn)錄因子NFATC3結(jié)合位點(diǎn)。我們推測(cè)，NFATC3基因可能調(diào)控DICER1基因參與正常心臟發(fā)育。因此，本研究首先通過(guò)檢測(cè)DICER1SHRNA對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9C2生物學(xué)特性的影響，明確DICER1基因表達(dá)降低導(dǎo)致心臟畸形的可能作用機(jī)理其次通過(guò)染色質(zhì)免疫沉淀（CHROMATINIMMUNOPRECIPITATION，CHIP）、螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)、RNA干擾（RNAINTERFERENCE，RNAI）等功能研究，闡明NFATC3基因?qū)ICER1基因的調(diào)控作用及其對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9C2生物學(xué)特性的影響，為揭示DICER1基因及其調(diào)控基因NFATC3在心臟發(fā)育過(guò)程中的作用提供理論依據(jù)。方法一、實(shí)驗(yàn)材料1、細(xì)胞株大鼠心肌細(xì)胞H9C22、組織標(biāo)本10例心肌組織標(biāo)本由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院提供，標(biāo)本采集均已簽署知情同意書(shū)，并經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)通過(guò)。二、實(shí)驗(yàn)方法1、DICER1基因RNA干擾實(shí)驗(yàn)DICER1SHRNA轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞H9C2，REALTIMEPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)DICER1基因表達(dá)。2、DICER1SHRNA對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9C2生物學(xué)特性的影響CCK8活細(xì)胞染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖率，WESTERNBLOT分析PCNA表達(dá)水平PI單染法測(cè)定細(xì)胞周期，WESTERNBLOT分析CYCLINE1和CYCLINA表達(dá)水平ANNEXINⅤAPCPI方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，WESTERNBLOT分析CASPASE3表達(dá)水平。3、DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)NFATC3結(jié)合位點(diǎn)的鑒定生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)NFATC3結(jié)合位點(diǎn)，CHIP實(shí)驗(yàn)鑒定NFATC3與DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)NFATC3結(jié)合位點(diǎn)的特異性結(jié)合共轉(zhuǎn)染NFATC3SIRNA和DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)螢光素酶重組載體PDICER1，應(yīng)用螢光素酶活性檢測(cè)系統(tǒng)分析螢光素酶活性，驗(yàn)證NFATC3與DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)特異性結(jié)合。4、心肌組織NFATC3基因、DICER1基因表達(dá)分析在10例心肌組織中，WESTERNBLOT檢測(cè)NFATC3蛋白表達(dá)，REALTIMEPCR檢測(cè)DICER1MRNA表達(dá)，并進(jìn)行相關(guān)性分析。5、NFATC3基因RNA干擾實(shí)驗(yàn)NFATC3SIRNA轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞H9C2，WESTERNBLOT檢測(cè)NFATC3蛋白表達(dá)，REALTIMEPCR和WESTERNBLOT分析DICER1基因表達(dá)水平。6、NFATC3SIRNA對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9C2生物學(xué)特性的影響CCK8活細(xì)胞染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖率，WESTERNBLOT分析PCNA表達(dá)水平PI單染法測(cè)定細(xì)胞周期，WESTERNBLOT分析CYCLINE1和CYCLINA表達(dá)水平ANNEXINⅤFITCPI方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果1、DICER1SHRNA能夠有效抑制DICER1基因表達(dá)與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染DICER1SHRNA3D后，DICER1基因MRNA和蛋白表達(dá)水平分別下降79％和54％P＜005。2、DICER1基因表達(dá)降低能夠抑制心肌細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染DICER1SHRNA3D后，活細(xì)胞數(shù)顯著減少，細(xì)胞增殖抑制率為3186±002％，PCNA表達(dá)降低31％P＜005。3、DICER1基因表達(dá)降低使細(xì)胞周期重新分布，阻滯于S期與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染DICER1SHRNA4D后，G1期細(xì)胞數(shù)顯著減少，所占百分比為6321±282％P＜005，而S期細(xì)胞數(shù)顯著增多，所占百分比為2122±60％，CYCLINE1表達(dá)升高35％，CYCLINA表達(dá)降低32％P＜005。4、DICER1基因表達(dá)降低能夠促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染DICER1SHRNA4D后，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)為1304±30％，CASPASE3表達(dá)升高16％P＜005。5、NFATC3能夠與DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)NFATC3結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合生物信息學(xué)軟件在DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)預(yù)測(cè)到3個(gè)潛在的NFATC3結(jié)合位點(diǎn)，CHIP實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)鑒定NFATC3能夠與DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)476～472BP處NFATC3結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)證明轉(zhuǎn)錄因子NFATC3可與DICER1基因啟動(dòng)子區(qū)特異性結(jié)合并影響DICER1基因轉(zhuǎn)錄活性。6、心肌組織中NFATC3基因與DICER1基因表達(dá)呈正相關(guān)NFATC3蛋白和DICER1MRNA的表達(dá)呈顯著正相關(guān)R067，P＜005。7、NFATC3基因正調(diào)控內(nèi)源性DICER1基因表達(dá)與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染NFATC3SIRNA2D后，NFATC3蛋白表達(dá)水平下降73％P＜005，DICER1基因MRNA和蛋白表達(dá)水平分別下降64％和49％（P＜005）。8、NFATC3基因表達(dá)降低能夠抑制心肌細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染NFATC3SIRNA3D后，細(xì)胞增殖抑制率為1586±002％，PCNA表達(dá)降低29％P＜005。9、NFATC3基因表達(dá)降低使細(xì)胞周期重新分布，阻滯于S期與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染NFATC3SIRNA3D后，G1期細(xì)胞數(shù)顯著減少，所占百分比為5380±46％P＜005，而S期細(xì)胞數(shù)顯著增多，所占百分比為3010±410％，CYCLINE1表達(dá)升高15％，CYCLINA表達(dá)降低21％P＜005。10、NFATC3基因表達(dá)降低不影響心肌細(xì)胞凋亡與轉(zhuǎn)染NEGATIVECONTROL相比，轉(zhuǎn)染NFATC3SIRNA3D后，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)為037±012％P＞005。結(jié)論1、DICER1基因表達(dá)降低能夠促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，抑制心肌細(xì)胞增殖，使細(xì)胞周期重新分布、阻滯于S期。2、NFATC3基因表達(dá)降低能夠抑制心肌細(xì)胞增殖，使細(xì)胞周期重新分布、阻滯于S期。3、NFATC3基因靶向正調(diào)控DICER1基因表達(dá)。

簡(jiǎn)介：廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文山羊痘病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性的研究姓名黃夏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師陸芹章20060601廣西大學(xué)碩士論文山羊痘病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性的研究ISOLATIONIDENTIFICATIONANDBIOLOGICALCHARACTERISTICS0FGOATPOXVIRUSABSTRACTINTHISSTUDY，AFIELDSTRAINOFGOATPOXVIRUSGPVWASISOLATEDANDTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFTHEISOLATEDVIRUSWERESTUDIED，BYCELLCULTURE，F(xiàn)LUORESCENTIDENTIFICATION，ANIMALTESTS，MORPHOLOGICALOBSERVATIONANDSEQUENCEANALYSISTHEOBVIOUSLESIONSOFNEWBORNLAMBSPERMARYCELLWEREOBSERVEDINTHESECONDDAYAFTERTHEINOCULATIONOFVIRUSSUSPENDINGTHEINDIRECTFLUORESCENTASSAYIFARESULTSSHOWEDTHATTHEVIRUSCANREACTTOSTANDARDPOSITIVESERUTNOFGOATPOXNOCLINICALSIGNSWEREOBSERVEDAFTERTHEMICE，RABBITS，CAVIESINOCULATEDWITLLVIRUSSUSPENDINGBUTTHETYPICALCLINICALSYMPTOMANDPATHOLOGICALCHANGESOFGOATPOXVIRUSINFECTIONAPPEAREDINTHETENTHDAYAFTERTHETHREEMONTHGOATINOCULATEDWITHVIRUSSUSPENDINGTHEPATHOLOGICALCHANGESOFCHICKENEMBRYOSWERENOTOBSERVEDAFTERINOCULATIONTHEVIRUSSHOWEDTYPICALMORPHOLOGICALSHAPEOFGOATPOXVIRUSUNDERELECTRONMICROSCOPEP32GENEOFGPVWASCLONEDINTOPMDL8一TVECTORANDTHENSEQUENCED，COMPAREDWIⅡLOTHERP32SEQUENCESOFGOATPOXVIRUSESAVAILABLEINTHEGENEBANKTHEHOMOLOGYOFNUCLEOTIDEANDDEDUCEDAMINOACIDSEQUENCEBETWEENISOLATEDVIRUSANDGPVVACCINESTRAINWERE996％AND994％ANDWITHOTHERGPVSHARE996％AND988994％HOMOLOGYATNUCLEOTIDEANDAMINOACIDLEVEL，RESPECTIVELYTHERESULTSABOVEDEMONSTRATEDTHATTHEISOLATEDVIRUSISGPVWHOSEBIOLOGICALCHARACTERISTICSWEREALITTLEDIFFERENTFIOMTHOSEOFOTHERREPORTEDGPVTHEHOMOLOGYOFNUCLEOTIDEANDDEDUCEDAMINOACIDSEQUENCEOFP32ISVERYHIGHAMONGALIGPVSTHEISOLATEDVIRESWASNAMEDGOATPOXVIRUSLIUJIANG／2003STRAINKEYWORDSGOATPOXVIRUS；ISOLATIONANDIDENTIFICATION；BIOLOGICALCHARACTERISTICS2

簡(jiǎn)介：流體黏性的檢測(cè)在生物醫(yī)學(xué)，化學(xué)，材料等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。例如，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，基礎(chǔ)及臨床研究顯示體液黏性與許多疾病密切相關(guān)心腦血管病患者與正常人相比，血液表觀黏度有顯著的變化；退行性關(guān)節(jié)病，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病引起關(guān)節(jié)滑膜液的黏性改變等。目前許多研究涉及到各種類型的生物體液，例如小型動(dòng)物體液獲取困難，代價(jià)很高，降低黏性檢測(cè)中的樣品消耗尤為重要。另一方面，黏度也可能影響到腫瘤細(xì)胞的黏附行為。黏度是微粒分散體系中粒子的沉降速率的決定因素之一，對(duì)于多相流體，當(dāng)微粒的密度大于分散介質(zhì)的密度，就會(huì)發(fā)生沉降，根據(jù)STOKES定律，黏度越大，沉降速度越小，懸浮液中的粒子越穩(wěn)定，越不易發(fā)生沉降。而腫瘤細(xì)胞在血管壁的黏附可以簡(jiǎn)化成一個(gè)粒子在血液中沉降與管壁接觸黏附的過(guò)程，在這一過(guò)程中，黏度可能影響到血流中接觸到管壁的腫瘤細(xì)胞數(shù)，因此，黏度對(duì)腫瘤細(xì)胞黏附行為的影響是值得考察的。此外，由于微流控裝置具備微型化、集成化的優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)被廣泛應(yīng)用在生物技術(shù)，化學(xué)化工等領(lǐng)域。如何在微小的芯片內(nèi)精確地掌控流體的運(yùn)動(dòng)形態(tài)是微流控技術(shù)的最為基礎(chǔ)而重要的一環(huán)。而黏度，作為一項(xiàng)基本的流變學(xué)參數(shù)，對(duì)分析流體的運(yùn)動(dòng)行為是極為關(guān)鍵的。因此，為了滿足微流控實(shí)驗(yàn)微量化的樣品需求，高效的測(cè)量實(shí)驗(yàn)所涉及的流體黏度便成為現(xiàn)代黏性測(cè)量技術(shù)的主要課題之一。然而，現(xiàn)有微試樣黏度計(jì)的研究面臨著一些瓶頸（1）由于尺度的縮小，末端效應(yīng)、表面張力等在宏觀尺度下可忽略的效應(yīng)陡然增大，并導(dǎo)致了顯著的誤差。這使得現(xiàn)有微試樣黏度計(jì)的測(cè)量準(zhǔn)確度普通較低，尤其是在低剪切率的條件下測(cè)量低黏度的樣品時(shí)這一問(wèn)題尤為突出（誤差5％24）。（2）盡管現(xiàn)有的微試樣黏度計(jì)芯片本身樣品容積量很小，但為了驅(qū)動(dòng)流體進(jìn)行檢測(cè)，需要連接容積量很大的泵和導(dǎo)管，因此總的樣品消耗量仍然居高不下。（3）同樣由于尺度的縮小，通道的表面粗糙度過(guò)大會(huì)給流動(dòng)造成明顯的擾動(dòng)導(dǎo)致宏觀流體力學(xué)的失效。因此，微試樣黏度計(jì)的制作需要嚴(yán)格控制通道的表面粗糙度，要求更為嚴(yán)格的制作工藝，這使得系統(tǒng)搭建及制作成本很高。（4）由于芯片體積小樣品少，熱容量小，對(duì)環(huán)境溫度變化特別敏感，這對(duì)測(cè)量環(huán)境的溫度控制提出了更嚴(yán)格的要求。而現(xiàn)有的微試樣黏度計(jì)未能很好地解決這一問(wèn)題。基于上述原因，現(xiàn)有的微試樣黏度計(jì)一直未能得到商業(yè)化的運(yùn)用。因此，提供更加精確、穩(wěn)定、微試樣的黏性測(cè)量方法，為科研工作者提供可靠的流體黏度數(shù)據(jù)，是論文所需完成的主要目標(biāo)。本文提出了一種高效、精確、微試樣低成本的微流控黏性檢測(cè)芯片（后簡(jiǎn)稱為芯片黏度計(jì)），可以用于生物類流體的黏度測(cè)量。在對(duì)末端效應(yīng)、表面張力、動(dòng)能修正項(xiàng)等引入的誤差進(jìn)行評(píng)估后，研究者對(duì)芯片的構(gòu)型及尺寸進(jìn)行了優(yōu)化通道的兩端加入了一對(duì)匹配的光滑圓管，幾乎完全避免了表面張力的影響。芯片的尺寸通過(guò)誤差分析決定，優(yōu)化后的芯片誤差被嚴(yán)格控制在05以下，且每次測(cè)量消耗量?jī)H為200ΜL。本文采用自制的配套模具，結(jié)合抽絲法，能夠輕易地在芯片內(nèi)部形成表面光滑的圓管，適應(yīng)了通道表面粗糙度需要嚴(yán)格控制的加工需求。為了保證測(cè)量環(huán)境的溫度恒定，本文為芯片黏度計(jì)設(shè)計(jì)了一套專門的測(cè)量平臺(tái)。測(cè)試時(shí)，芯片置于特制的恒溫水浴槽中，樣本流體加載于芯片的上游儲(chǔ)液池中，被外部壓力控制裝置驅(qū)動(dòng)，樣品通過(guò)主通道后流入到下游儲(chǔ)液池中。測(cè)試流體在黏度測(cè)量芯片內(nèi)的流動(dòng)狀態(tài)通過(guò)CCD對(duì)儲(chǔ)液池的液面流動(dòng)情況進(jìn)行記錄，并利用一段圖像處理程序?qū)σ曨l進(jìn)行處理。通過(guò)程序自動(dòng)提取運(yùn)動(dòng)軌跡信息、自動(dòng)輸出黏度值，不但使操作更簡(jiǎn)單，又減少了人為因素引入的誤差，使測(cè)量結(jié)果具有良好的復(fù)現(xiàn)性。相較于其他微試樣黏度計(jì)，本文研制的芯片黏度計(jì)結(jié)果更加準(zhǔn)確通過(guò)將本文所研制的芯片黏度計(jì)與美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局（NIST）公布的參考值，傳統(tǒng)毛細(xì)管黏度計(jì)，傳統(tǒng)旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)進(jìn)行橫向比對(duì)，可以看出芯片黏度計(jì)的測(cè)量結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)值、傳統(tǒng)烏氏黏度計(jì)測(cè)量值三者吻合良好，相對(duì)誤差小于2。本文還根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織以及國(guó)際電工委員會(huì)（ISOIEC）發(fā)布的測(cè)量不確定度評(píng)估指南對(duì)芯片黏度計(jì)進(jìn)行完整的不確定度評(píng)估，計(jì)算其擴(kuò)展相對(duì)不確定度U9522，較主流的微試樣黏度芯片準(zhǔn)確度提高了2倍以上。在芯片黏度計(jì)制作完成后，本論文為了考察黏度與腫瘤細(xì)胞黏附行為的關(guān)系，本文還設(shè)計(jì)構(gòu)建了一個(gè)理想化的HEPG2細(xì)胞黏附模型，用于模擬腫瘤細(xì)胞在人體血管環(huán)境里的黏附行為。在此模型中，本文綜合考慮了黏度、流場(chǎng)等力學(xué)因子對(duì)腫瘤細(xì)胞黏附行為產(chǎn)生的影響。首先，本文通過(guò)有限元分析預(yù)測(cè)了芯片模型中的流場(chǎng)、紊流分布強(qiáng)度等信息，在此基礎(chǔ)上，我們通過(guò)三組對(duì)比實(shí)驗(yàn)考察了黏度、細(xì)胞密度以及它們與流場(chǎng)之間的相互作用對(duì)芯片底面HEPG2細(xì)胞黏附數(shù)量產(chǎn)生的影響。研究結(jié)果表明，當(dāng)血管分岔角增大時(shí)，紊流強(qiáng)度也增大。流場(chǎng)中紊流的增加能有效的提高芯片底面黏附的HEPG2細(xì)胞數(shù)量，但黏附細(xì)胞的總數(shù)受芯片底部管壁容納極限的影響，因此紊流強(qiáng)度達(dá)到一定程度后，黏附細(xì)胞數(shù)逐漸趨于穩(wěn)定不再繼續(xù)增大。增加細(xì)胞密度相當(dāng)于增加細(xì)胞與底面接觸的幾率，也能起到增加底面黏附細(xì)胞數(shù)的效果，其作用效果在低紊流環(huán)境下格外顯著。而流體黏度對(duì)底面黏附細(xì)胞數(shù)的影響較為復(fù)雜，對(duì)于不同紊流環(huán)境其效果相差較大，一方面黏度增大了流動(dòng)阻力，降低了HEPG2細(xì)胞的移動(dòng)速度，增加了HEPG2細(xì)胞在底面黏附的可能性；另一方面，黏度的增加降低了HEPG2的沉降速度，更多的HEPG2懸浮在溶液中，不與管壁接觸。因此，在黏附能力較弱的低紊流環(huán)境下，這兩個(gè)因素互相抵消，黏附細(xì)胞數(shù)保持穩(wěn)定。而在黏附能力較強(qiáng)的高紊流環(huán)境里，后者的影響占主要，因此黏度增加，芯片底部的黏附細(xì)胞數(shù)大幅度降低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與我們的預(yù)期吻合較好。本文所研制的芯片黏度計(jì)還具有樣品消耗量小，制造簡(jiǎn)單，成本低廉，操作方便且易于維護(hù)的優(yōu)勢(shì)。它基于抽絲法構(gòu)建，與傳統(tǒng)的軟蝕刻技術(shù)相比，不需要依賴各種昂貴設(shè)備和器材。僅利用微絲和自制的配套模具，將毛細(xì)管，儲(chǔ)液池，壓力接口全部整合于一塊芯片中，一方面大幅度的降低了制造成本，另一方面又避免了各部件的連接和密封不良可能導(dǎo)致的漏液，減少了連接部位產(chǎn)生的壓降損失從而降低了誤差。由于價(jià)格低廉，它可以作為一次性用品以避免芯片之間的樣品污染，也可以多次清洗重復(fù)使用進(jìn)一步降低成本。本黏性測(cè)量芯片為微試樣生物流體的精確測(cè)量提供了一種新的途徑，可以在生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)化工等領(lǐng)域代替烏氏黏度計(jì)執(zhí)行其無(wú)法完成的黏性測(cè)量，為芯片內(nèi)流動(dòng)分析、力學(xué)模擬及流動(dòng)控制等提供精確可靠的流動(dòng)參數(shù)，在生物醫(yī)學(xué)、化學(xué)化工、材料等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。

簡(jiǎn)介：西南林學(xué)院2009屆碩士研究生學(xué)位論文云南省不同地區(qū)松墨天牛生物學(xué)特性比較研究COMPARISONOFBIOLOGICALCHARACTERSOFMONOCHAMUSNLTERNCITUSINDIFFERENTAREASOFYUNNANPROVINCE段艷指導(dǎo)教師徐正會(huì)教授西南林學(xué)院學(xué)位授予單位西南林學(xué)院云南昆明石南。昆明。，、；，AL。，諺爭(zhēng)爭(zhēng)、、鼉IL哥戶I。，。、，，，，、L，、飛O、；T飛。，一個(gè)人囂，器導(dǎo)下州LLLLIIILLLLI㈣凱戶明型“掣型掣公4崔本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)TOU，YY。的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得西南林學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。簽名二稹筵一日期L址關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人同意西南林學(xué)院有權(quán)保留論文的復(fù)印件，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文；提交論文一年后，允許論文被查閱和借閱，學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容。保密的論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定簽名綹導(dǎo)師簽名二憋日期』生址

簡(jiǎn)介：『III11IIIIIIIIIIII11分類號(hào)Y3396371密級(jí)碩士學(xué)位論文MASTER，SDEGREEDISSERTATION來(lái)源于茶擬盤多毛孢的一個(gè)新金色病毒的鑒定及生物學(xué)特性的研究STUDYONTHEIDENTIFICATIONANDCHARACTERIZATIONOFANOVELCHRYSOVIRUSISOLATEDFROMPESTALOTLOPSISTHEAE研究生CANDIDATE周玲玲LINGLLNGZHOU學(xué)號(hào)STUDENTNO2015301110176專業(yè)MAJOR植物病理學(xué)PLANTPATHOLOGY導(dǎo)師徐文興教授SUPERVISORPROFESSORWENXINGXU中國(guó)武漢WUHAN，CHINA二O一八年六月HJNE，2018學(xué)洲失豢帆～痧屈黜厶TM辛呲⑧華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文是否保密否如需保密，解密時(shí)間年月日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特另LJ加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一露工作曲同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說(shuō)明，并表示了謝意。，、一研究生簽名7馘詮殮時(shí)間糾罾年／月多日學(xué)位論文使用授權(quán)書(shū)本人完全了解華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)予保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，幫學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印劇本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文酌印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采月影印、縮印或掃描_等復(fù)創(chuàng)手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，為存在館際合作關(guān)系的兄弟高校用戶提供文獻(xiàn)傳遞和交換服務(wù)，阿時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力。注保密學(xué)位論文即涉及技術(shù)秘密、商韭秘密或申請(qǐng)專_；|等潛在需要提交保密的論文在解密后適用于本授權(quán)書(shū)。學(xué)位論文作者簽名禹殮蝰導(dǎo)師簽名秒≯會(huì)氓簽名日期DT3年彳月多日簽名日期伽疆年F月弓弱注請(qǐng)將本表直接裝訂在學(xué)位論文的扉頁(yè)

簡(jiǎn)介：浙江師范大學(xué)碩士學(xué)位論文運(yùn)用藝術(shù)手段創(chuàng)設(shè)高中生物學(xué)教學(xué)情境姓名潘太仲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)學(xué)科教學(xué)（生物學(xué)）指導(dǎo)教師張慶勉20071220運(yùn)用藝術(shù)手段剖設(shè)高中生物學(xué)教學(xué)情境CREATEBIOLOGY．TEACHINGSMT盯10NINSENL0RMIDDLESCH00LⅥ，RIHARTMETHODSABSTRACTSCIENCEISMANKIND’SUNDERSTANDINGOFTHEINNERNATUREANDLAWOFMOVEMENTANDCHANGEOFTHINGS，ANDARTBUILDSITSHIGHESTCRITERIAONEMBODIMENTOFTRUTHOFPERCEPTIONANDISTHEHIGHESTSTATEOFMANKIND’SPURSUITOFBEAUTY．SCIENTIFIC．CREATIONANDINVENTIONCANNOTLIVEWITHOUTARTISTICFEELINGSANDARTISTICTHOUGHTSANDNORCANTHEARTISTICCREATIONLIVEWITHOUTSCIENTIFICINTERSECTIONALINTEGRATION．ARTCANAWAKEEMOTIONSANDHOPESSLEEPINGINSOULSANDENABLESPEOPLETOBEHAPPY．THEORGANICSPHEREISCOLORFUL，F(xiàn)ICKLEANDVIVIDWHEREASBIOLOGYISTHESCIENCETHATCOMBINESSCEINTIFICALNESS，THOUGHTS，INTERESTS，CREATIVITY,ANDPRACTICABILITY．INTEGRATINGARTSINTOBIOLOGYCANINVIGORATEANCIENTBIOLOGY．INTHEPRACTICERESEARCH，ILAYEMPHASISONTHERESEARCHOFNATUREANDKNOWSTUDENTS’CURRENTSTUDYSTATEINDIFFERENTASPECTSANDFROMDIFFERENTANGLESTHROUGHPAYINGVISITSTOARTISTICWORKERSANDEDUCATIONALRESEARCHERS，DISCUSSIONSWITHPERSONSINTHESAMEBUSINESSOR；OCCUPATIONANDSTUDENTS．DESIGNTEACHINGPLANSACCORDINGTOCORRICULMHSTANDARDSANDDOCLASSPRACTICE，TAKECLASSMEMOIRS，ACQUIRESTUDYDEVELOPMENT，LISTENTOFEEDBACKS，SUMMARIZETEACHINGREFLECTION，COMPLETERRESEARCHPLAN．IHAVEWRITTENTEACHINGCASESONCREATINGBIOLOGYTEACHINGSITUATIONINSENIORMIDDLESCHOOLWITHARTMETHODSLIKELANGUAGEART，PERFORMINGART，MODELINGART,COMPOSITEARTRESPECTIVELYANDPUTFORWARDCREATINGTHETEACHINGPRINCIPLEANDRELEVANTPATTERNOFCREATINGBIOLOGYTEACHINGSITUATIONINSENIORMIDDLESCHOOLWITH積METHOD．THEREARELEARNINGCONTENTSINTHEBIOLOGYINSENIORMIDDLESCHOOLTHATARESUITABLETOBEDEALTWITHARTMETHODS．THEARTISTICQUALITYACQUIREDBYCURRENTSENIORMIDDLESCHOOLSTUDENTSCANBEINTEGRATEDINTOSOMEKNOWLEDGEINTHEBIOLOGYINSENIORMIDDLESCH001．THECREATIONOFARTINSITUATIONINBIOLOGYLESSONSINSENIORMIDDLESCHOOLSHOULDFOLLOWTHEPRINCIPLESLIKEAPPLICABILITY,ARTISTIC，SITUATION，CREATIVITY,ANDSCIENCETOCHOOSESUITABLEARTMETHODSACCORDINGTOTEACHINGCONTENT．THEARTMETHODSCANAPPLYBACKGROUNDSETTINGUPOFKNOWLEDGE，RESOLVINGOF

簡(jiǎn)介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中圖分類號(hào)密級(jí)ELF4G1對(duì)非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)功能影響的研究FUNCTIONALROLEOFEUKARYOTICTRANSLATIONINITIATIONFACTOR4GAMMA1EIF4G1INNSCLC曹月譽(yù)目幾置計(jì)學(xué)位論文51頁(yè)表格4個(gè)插圖16幅指導(dǎo)教師秦智強(qiáng)教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)位學(xué)科專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學(xué)研究生院完成時(shí)間二。一六年三月答辯委員會(huì)主席毒瓣關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請(qǐng)?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“、／’’1保密口，在年解密后適用本授權(quán)書(shū)。2不保密口。作者簽名＼耪】；L瓠導(dǎo)師簽名磊澆‰|～日期弘F‘年5月26日日期五心年5月磊日

簡(jiǎn)介：該文分二部分第一部分原核表達(dá)重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白7體內(nèi)外測(cè)活方法的建立及結(jié)果分析目的該研究擬采用體外、體內(nèi)兩種方法同時(shí)測(cè)定原核表達(dá)重組人BMP7的生物學(xué)活性為臨床推廣應(yīng)用原核表達(dá)重組人BMP7提供理論依據(jù)結(jié)論原核表達(dá)重組人BMP7具有良好的生物學(xué)活性該研究采用的體外ALP活性及活細(xì)胞測(cè)定體內(nèi)組織學(xué)、免疫組化、ALP活性及鈣含量測(cè)定的方法是可行的其結(jié)果是可信的第二部分骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生過(guò)程中關(guān)節(jié)軟骨中BMP7的含量變化及其對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨損傷修復(fù)的影響研究目的該研究擬通過(guò)觀察兔OA模型關(guān)節(jié)軟骨中BMP7含量變化探討B(tài)MP7在OA發(fā)病進(jìn)程中的作用及最佳的干預(yù)時(shí)機(jī)根據(jù)研究結(jié)果用BMP7干預(yù)探討B(tài)MP7是否促進(jìn)OA時(shí)破損軟骨的修復(fù)為臨床治療OA提供新的方法及理論依據(jù)結(jié)論在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病過(guò)程中關(guān)節(jié)軟骨中的BMP7是逐漸下降的它的下降加速了關(guān)節(jié)軟骨的破損速度及早給予BMP7可修復(fù)OA病損的軟骨恢復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的彈性與功能

簡(jiǎn)介：分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文漬水對(duì)油菜生物學(xué)性狀及產(chǎn)量品質(zhì)的影響EFFECTOFWATERLOGGINGONBIOLOGICALCHARACTERS，YIELDANDQUALITYOFRAPESEED研究生宋豐萍指導(dǎo)教師胡立勇教授周廣生副教授授授授教教教指導(dǎo)小組胡立勇彭定祥注甘勝勝月巨目T夕含貝楊國(guó)正副教授專業(yè)作物栽培學(xué)與耕作學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士研究方向油菜栽培生理獲得學(xué)位時(shí)間2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院二00八年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2008屆碩士研究生畢業(yè)論文31不同地下水位對(duì)油菜生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響，13311不同地下水位對(duì)油菜各形態(tài)指標(biāo)的影響，二，13312不同地下水位對(duì)油菜根性狀指標(biāo)的影響，，，，二，14313不同地下水位對(duì)油菜各生理指標(biāo)的影響，，，16314不同地下水位對(duì)油菜單株產(chǎn)量的影響，1732不同持續(xù)漬水時(shí)間對(duì)油菜生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響、183、21苗期漬水對(duì)油菜各形態(tài)指標(biāo)的影響、18322苗期漬水對(duì)油菜各生理指標(biāo)的影響，，，20323苗期漬水對(duì)油菜產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)性狀的影響。21324苗期不同時(shí)間漬水對(duì)油菜各品質(zhì)指標(biāo)的影響二，，22325蕾期漬水對(duì)油菜各形態(tài)指標(biāo)的影響23326蕾期漬水對(duì)油菜各生理指標(biāo)的影響，243，27，蕾期漬水對(duì)油菜產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)性狀的影響，26328花期漬水對(duì)油菜各形態(tài)指標(biāo)的影響27329花期漬水對(duì)油菜各生理指標(biāo)的影響，2732怕花期漬水對(duì)油菜產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)性狀的影響293211角果期漬水對(duì)油菜根性狀指標(biāo)的影響，303212角果期漬水對(duì)油菜籽粒含糖量的影響，，，，，303213角果期漬水對(duì)油菜產(chǎn)量及經(jīng)濟(jì)的影響313214不同生育期漬水受害值比較，，3233不同施肥量條件下漬水對(duì)油菜苗期耐濕性的影響，，323，31因子間交互效應(yīng)分析，、33332不同施肥量條件下漬水對(duì)油菜耐濕系數(shù)的模擬尋優(yōu)35333不同氮水平條件下油菜各生理指標(biāo)的變化354小結(jié)與討論、3641小結(jié)，36411不同地下水位對(duì)油菜生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響，36412不同持續(xù)漬水時(shí)間對(duì)油菜生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響，37413不同施肥量條件下漬水對(duì)油菜苗期耐濕性的影響3942討論39參考文獻(xiàn)、45致謝52

簡(jiǎn)介：背景自從間充質(zhì)干細(xì)胞于1966年被FRIEDENSTEIN從骨髓中發(fā)現(xiàn)開(kāi)始越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞在一定的條件下具有向內(nèi)、中、外三個(gè)胚層分化的能力其中包括分化為骨細(xì)胞軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞等多種細(xì)胞的潛能可以廣泛參與組織器官損傷的修復(fù)過(guò)程成為組織工程和干細(xì)胞治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。其中骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞BMSCS憑借易于培養(yǎng)擴(kuò)增、遺傳背景相對(duì)穩(wěn)定且多向分化特性不受影響等特性被廣泛用于細(xì)胞及組織多種疾病的替代治療。但隨著對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞研究的不斷深入發(fā)現(xiàn)成年動(dòng)物骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)量及增殖、分化潛能隨年齡的增大而不斷下降且供者間充質(zhì)干細(xì)胞的采集須行骨髓穿刺術(shù)由于疾病的原因病人常有感染、體質(zhì)較弱等因素也限制了自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的廣泛應(yīng)用。因此尋找新的間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)之一。1991年MCELREAVEY等首次報(bào)道從人臍帶的WJ組織中分離并培養(yǎng)到了一種成纖維樣細(xì)胞具有較高的分化潛能。隨后數(shù)位研究者也分別報(bào)道從WJ中分離到豐富的MSCS。通過(guò)大量體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證實(shí)特定條件下其同樣具有成骨、成軟骨、成脂肪、成肌肉、成血管內(nèi)皮、成神經(jīng)細(xì)胞等多向分化能力通過(guò)和其他來(lái)源MSCS特別是和作為MSCS金標(biāo)準(zhǔn)的BMSCS相比臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有巨大優(yōu)勢(shì)首先來(lái)源廣泛取材方便供者無(wú)痛苦；其次相對(duì)純凈污染機(jī)會(huì)少；第三含量豐富較為原始增殖分化能力強(qiáng)免疫原性低生物性能穩(wěn)定可以為實(shí)驗(yàn)和臨床提供充足的細(xì)胞來(lái)源。因此臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞有望成為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的理想替代來(lái)源成為近來(lái)基礎(chǔ)研究與臨床廣泛研究的熱點(diǎn)。科研人員和公眾均寄希望通過(guò)間充質(zhì)干細(xì)胞領(lǐng)域的研究治愈諸如難愈性創(chuàng)面多臟器損傷心肌梗死等傳統(tǒng)方式治療效果欠佳的疾病。盡管目前間充質(zhì)干細(xì)胞治療在臨床上的效果尚未得到完全確證還是有越來(lái)越多的國(guó)家正加入此項(xiàng)研究。然而間充質(zhì)干細(xì)胞治療要想真正從實(shí)驗(yàn)室走向臨床應(yīng)用還面臨著諸多挑戰(zhàn)尚有很多關(guān)鍵性問(wèn)題亟待解決。特別是間充質(zhì)干細(xì)胞體外的生物學(xué)特性研究至關(guān)重要是其臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)及前提。蛻皮甾酮EDS是一種調(diào)控昆蟲(chóng)蛻皮過(guò)程的激素廣泛存在于眾多植物類群及動(dòng)物類群中結(jié)構(gòu)類似于雌二醇實(shí)驗(yàn)證實(shí)其能夠有效促進(jìn)哺乳動(dòng)物的多種組織和器官的核酸與蛋白質(zhì)的合成及糖和脂類代謝。由于該類物質(zhì)來(lái)源廣泛生物學(xué)特性復(fù)雜因此吸引了許多學(xué)者投身其研究工作。OTAKA等報(bào)道羥基蛻皮甾酮無(wú)論體內(nèi)還是體外實(shí)驗(yàn)均可迅速刺激大鼠肝臟蛋白的合成。體外實(shí)驗(yàn)中羥基蛻皮甾酮能夠通過(guò)促進(jìn)合成進(jìn)而增強(qiáng)微粒體和核糖體的蛋白合成能力。YOSHIDAT等報(bào)道了蛻皮甾酮對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)效應(yīng)預(yù)先腹腔注射羥基蛻皮甾酮能夠?qū)垢骨蛔⑸湟雀哐撬丶办o脈注射抗胰島素引起的高血糖癥。SYROVVN等報(bào)道蛻皮甾醇具有保護(hù)肝臟的作用。隨著研究的不斷深入蛻皮甾酮更多的生物學(xué)特性將被揭示出來(lái)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)EDS具有促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖促進(jìn)創(chuàng)傷皮膚愈合促進(jìn)表皮及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖等作用。最新研究表明特定條件下甾體類激素地塞米松具有誘導(dǎo)HUCMSCS分化為骨細(xì)胞并表達(dá)骨橋蛋白、涎蛋白、骨連接素等骨性標(biāo)志物的能力且可在黏多糖的基質(zhì)上形成類似于關(guān)節(jié)軟骨的球狀骨針可有效誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化同屬甾體類物質(zhì)的蛻皮甾酮表現(xiàn)出的生物多效性提示其對(duì)促臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)分化等方面有一定的影響最新研究顯示間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)劑作用后可有效治療骨質(zhì)疏松等疾病EDS能否誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化尚不明確進(jìn)行此項(xiàng)研究具有廣闊的應(yīng)用前景。目的分離培養(yǎng)并鑒定人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLSHUCMSCS為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供充足的種子細(xì)胞。方法采用酶消化法及組織塊培養(yǎng)法分離出HUCMSCS通過(guò)培養(yǎng)、傳代擴(kuò)增從而獲取相對(duì)均一、足夠數(shù)量的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。取第3代HUCMSCS通過(guò)細(xì)胞流式學(xué)檢測(cè)對(duì)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面特異性標(biāo)志CD29、CD34、CD44、CD45、CD90、CD105及多向分化能力加以鑒定。取第3、7代HUCMSCS繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線并觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果1HUCMSCS的形態(tài)學(xué)觀察倒置顯微鏡下觀察酶消化法所得細(xì)胞原代接種24H可見(jiàn)有少量細(xì)胞貼壁外觀呈紡錘形和短棒形并可見(jiàn)細(xì)胞核。培養(yǎng)至5D左右細(xì)胞大部為雙突起的長(zhǎng)梭形、扁平形生長(zhǎng)核仁較前明顯。培養(yǎng)至10D左右細(xì)胞形態(tài)變?yōu)闉榈湫偷某衫w維細(xì)胞形態(tài)當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80％融合時(shí)予以消化、傳代。傳代培養(yǎng)至P3后可出現(xiàn)明顯的單一細(xì)胞集落。從原代培養(yǎng)來(lái)看膠原酶消化法比組織塊培養(yǎng)法的效率更高大約10D就可以進(jìn)行傳代而組織塊培養(yǎng)法要14D才能傳代形態(tài)學(xué)變化及之后的傳代兩者之間沒(méi)有顯著性差別。2流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)CD34陽(yáng)性率為754％CD45陽(yáng)性率為535％CD29陽(yáng)性率為9845％CD44陽(yáng)性率為9783％CD90陽(yáng)性率為9736％CD105陽(yáng)性率為9920％3HUCMSCS體外多向誘導(dǎo)分化31HUCMSCS成骨誘導(dǎo)的形態(tài)變化及功能鑒定成骨誘導(dǎo)5D左右細(xì)胞形態(tài)逐漸由長(zhǎng)梭形變?yōu)槿切位蚨嘟切蔚?。高倍顯微鏡下觀察可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含顆粒樣物質(zhì)。誘導(dǎo)10D細(xì)胞胞質(zhì)中及胞質(zhì)外均可見(jiàn)較多細(xì)小黑色顆粒胞核顏色較淡胞質(zhì)色變深。3W時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)密集中央可見(jiàn)類似結(jié)節(jié)狀的結(jié)構(gòu)部分細(xì)胞呈現(xiàn)層疊樣生長(zhǎng)。堿性磷酸酶及茜素紅染色顯示強(qiáng)陽(yáng)性符合成骨細(xì)胞的特征。說(shuō)明HUCMSCS在體外具有向成骨細(xì)胞分化的潛能。32HUCMSCS成脂誘導(dǎo)的形態(tài)變化及功能鑒定成脂誘導(dǎo)7D左右細(xì)胞形態(tài)逐漸由長(zhǎng)梭形變?yōu)槎讨危辉谡T導(dǎo)約14D時(shí)細(xì)胞變?yōu)闄E圓形、圓形；20D時(shí)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)脂滴形成油紅“O”染色呈強(qiáng)陽(yáng)性。表明HUCMSCS在體外具有向脂肪細(xì)胞分化的潛能。4HUCMSCS生長(zhǎng)曲線HUCMSCS生長(zhǎng)曲線呈“S”形接種后第1～2天為潛伏適應(yīng)期從第3天起細(xì)胞開(kāi)始增殖并進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期第5天達(dá)到高峰7天以后進(jìn)入平臺(tái)期。根據(jù)生長(zhǎng)曲線可知HUCMSCS的群體倍增時(shí)間約為24H。增殖曲線顯示本實(shí)驗(yàn)中P3、P7代細(xì)胞增殖速率無(wú)顯著差異。結(jié)論1HUCMSCS可通過(guò)酶消化法及組織塊培養(yǎng)法體外分離、純化培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定可連續(xù)傳代。組織塊培養(yǎng)法的原代培養(yǎng)時(shí)間為14～16D培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)而采用膠原酶消化法可快速獲得大量貼壁生長(zhǎng)的MSCS且操作簡(jiǎn)便易行可更好地保持細(xì)胞活力大大縮短了原代培養(yǎng)時(shí)間。2經(jīng)流式紐胞儀檢測(cè)HUCMSCS均一地高表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志CD29、CD44、CD90、CD105陰性表達(dá)造血系標(biāo)志CD34、CD45本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HUCMSCS與其他組織來(lái)源的MSCS流式檢測(cè)表型一致。3經(jīng)成骨和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)后通過(guò)ALP染色以及茜素紅染色證實(shí)分化為成骨細(xì)胞通過(guò)油紅“O”染色證實(shí)分化為脂肪細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)分離所得HUCMSCS具有多向分化能力。4HUCMSCS隨著傳代次數(shù)增加增殖能力未見(jiàn)顯著降低。目的觀察凍存復(fù)蘇后人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLSHUCMSCS的復(fù)蘇率及增值活性探討液氮長(zhǎng)期保存間充質(zhì)細(xì)胞的可行性。方法參照前面方法體外分離培養(yǎng)獲得原代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞采用改良分階段凍存方法5個(gè)月后復(fù)蘇細(xì)胞培養(yǎng)觀察比較各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞成活率和MTT法檢測(cè)細(xì)胞增值能力的差異流式細(xì)胞儀檢測(cè)凍存細(xì)胞的表型變化。結(jié)果1復(fù)蘇HUCMSCS的形態(tài)學(xué)特征。復(fù)蘇后細(xì)胞2H即開(kāi)始貼壁逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮渭岸嘟切?。?fù)蘇細(xì)胞一周左右即可傳代傳至第3代時(shí)細(xì)胞形態(tài)與正常培養(yǎng)對(duì)照組無(wú)明顯差別。2流式細(xì)胞檢測(cè)復(fù)蘇HUCMSCS符合間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征。MTT法檢測(cè)顯示低溫凍存并沒(méi)有降低間充質(zhì)干細(xì)胞增殖活性。結(jié)論通過(guò)檢測(cè)凍存復(fù)蘇細(xì)胞的存活率臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志未發(fā)生改變表明液氮凍存法可長(zhǎng)期保存間充質(zhì)干細(xì)胞；另外恰當(dāng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞凍存且凍存細(xì)胞濃度應(yīng)達(dá)到1106ML對(duì)于保證凍存成功同樣起著關(guān)鍵作用。目的觀察蛻皮甾酮ECDYSTERONEEDS對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLSHUCMSCS體外增殖的影響并探討其促進(jìn)細(xì)胞增殖的可能機(jī)制。方法取第3代HUCMSCS分別在基礎(chǔ)培養(yǎng)基低糖DMEM培養(yǎng)基、10％的胎牛血清、100UM青鏈霉素、4MMOLLL谷氨酰胺中加入不同濃度0、25、50、100、150、200ΜGMLEDS予以干預(yù)分別于第1、3、5、7天行MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；另外設(shè)置相同分組EDS干預(yù)培養(yǎng)HUCMSCS7天繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線觀察比較細(xì)胞增殖差異。經(jīng)細(xì)胞流式儀測(cè)定不同分組細(xì)胞周期觀察增殖期細(xì)胞所占比例。對(duì)數(shù)據(jù)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果1、MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)EDS干預(yù)培養(yǎng)的HUCMSCS增殖能力較空白對(duì)照組有顯著差異P＜005其中EDS100ΜGML、150ΜGML及200ΜGML三組細(xì)胞活性比較無(wú)顯著差異P＞005較其他實(shí)驗(yàn)組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。2、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線同樣顯示EDS實(shí)驗(yàn)組可有效促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖。其中EDS100ΜGML實(shí)驗(yàn)組促增殖效果最明顯EDS100ΜGML、150ΜGML及200ΜGML三組未見(jiàn)顯著性差異。3、流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞周期顯示EDS100ΜGML、150ΜGML及200ΜGML三組細(xì)胞S期細(xì)胞所占比例最大與其他實(shí)驗(yàn)組比較有顯著差異同時(shí)三組細(xì)胞的增殖指數(shù)也顯著高于對(duì)照組。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)證實(shí)體外條件下EDS在一定濃度范圍內(nèi)具有促進(jìn)HUCMSCS增殖的作用該作用具有一定的濃度依賴性當(dāng)EDS濃度為100ΜGML促增殖作用達(dá)到最佳效果初步機(jī)制認(rèn)為EDS主要是通過(guò)改變細(xì)胞周期促進(jìn)細(xì)胞增殖。目的觀察蛻皮甾酮ECDYSTERONEEDS對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLSHUCMSCS成骨分化的影響。方法人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)鑒定取第5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分別在基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入不同濃度EDS和地塞米松予以干預(yù)分別于第1、3、5、7天MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖率；另外設(shè)置相同的分組誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后行茜素紅及堿性磷酸酶鈣鈷法染色鑒定細(xì)胞成骨分化能力計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。結(jié)果1MTT檢測(cè)顯示一定范圍內(nèi)EDS在基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)基中具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用濃度增高至200ΜGML對(duì)細(xì)胞表現(xiàn)抑制作用地塞米松對(duì)細(xì)胞增殖有抑制作用。2茜素紅及堿性磷酸酶鈣鈷法染色鑒定顯示基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)組細(xì)胞染色陰性EDS及地塞米松組實(shí)驗(yàn)組均可以誘導(dǎo)HUCMSCS鈣化結(jié)節(jié)形成比較發(fā)現(xiàn)EDS200ΜGML組細(xì)胞陽(yáng)性率與經(jīng)典誘導(dǎo)組無(wú)顯著差異P＞005EDS200ΜGML組與經(jīng)典誘導(dǎo)組成骨細(xì)胞陽(yáng)性率均顯著高于EDS100ΜGML組P＜001。結(jié)論EDS在濃度200ΜGML時(shí)具有誘導(dǎo)HUCMSCS成骨分化的作用但對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用顯著。初步認(rèn)為EDS通過(guò)雌激素受體發(fā)揮此作用。EDS200ΜGML組較EDS100ΜGML組成骨作用差異顯著表明誘導(dǎo)成骨作用具有一定的濃度依賴性。

簡(jiǎn)介：目前，盡管新課程改革如火如荼，但高中生物學(xué)課堂教學(xué)仍然存在眾多弊端，如學(xué)生的主體性被忽視、創(chuàng)造性思維培養(yǎng)的缺失，以致課堂教學(xué)效率低下。尋找一種能夠更加優(yōu)化的課堂教學(xué)策略就是本課題的出發(fā)點(diǎn)。鑒于此，筆者在理論分析的基礎(chǔ)上進(jìn)行了思維導(dǎo)圖的實(shí)驗(yàn)研究。思維導(dǎo)圖是英國(guó)人托尼博贊在20世紀(jì)70年代開(kāi)發(fā)的一種組織性思維工具。他通過(guò)繪制圖的方法，將人認(rèn)知知識(shí)、解決問(wèn)題和發(fā)散想象的思路、途徑以及如何對(duì)它們進(jìn)行配置有序的表達(dá)出來(lái)。思維導(dǎo)圖是一種全新的思維模式，它結(jié)合了全腦的概念，包括左腦的邏輯、順序、條例、文字、數(shù)字以及右腦的圖像、想像、顏色、空間和整體等1。本文在提出選題的原因和研究的意義后，對(duì)思維導(dǎo)圖概念進(jìn)行了界定，對(duì)理論基礎(chǔ)進(jìn)行了闡述，并介紹了國(guó)內(nèi)外的研究情況。介紹了思維導(dǎo)圖在課堂教學(xué)中的四大應(yīng)用策略，并對(duì)本研究的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，。提出了本研究存在的一些問(wèn)題和對(duì)后續(xù)研究的一些建議。本研究結(jié)合我校實(shí)際情況，將思維導(dǎo)圖應(yīng)用于高中生物學(xué)課堂教學(xué)。在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行座談和問(wèn)卷調(diào)查，并對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行前測(cè)和后測(cè)，所得數(shù)據(jù)均采用SPSS115軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，從定性和定量?jī)煞矫鎸?duì)思維導(dǎo)圖的應(yīng)用效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。通過(guò)調(diào)查及對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，筆者認(rèn)為將思維導(dǎo)圖應(yīng)用高中生物學(xué)課堂教學(xué)將有利于發(fā)散性思維能力的培養(yǎng)，有利于學(xué)生學(xué)習(xí)興趣的提高，有利于提高課堂教學(xué)的有效性。

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簡(jiǎn)介：大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文基于CO激光器的光聲光譜儀及其生物學(xué)應(yīng)用研究姓名王成斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)光學(xué)工程指導(dǎo)教師于清旭林鈞岫20000301人連理1。凡學(xué)LII。論立ABSTRACTBECAUSEOFITSHIGHSENSITIVEANDSELECTIVECHARACTERISTICS，THEPHOTOACOUSTICSPECTROMETERISREGAREDASONEOFTHEBESTTOOLSFORTRACEGASDETECTIONTHEPAPERINTRODUCESTHEHISTORICALDEVELOPMENTSOFPHOTOACOUSTICSPECTROMETER，THENEWACHIEVEMENTSINLECENTYEM‘S，ANDTHEMAIILPOINTSOFTHETECHNOLOGYTHETHEORYOFACOUSTICRESONANCESTANDINGWAVEISPRESENTEDINDETAIL，ANDWCCAICULATETHEPARAMETERSOFPHOTOACOUSTICCELLACCORDINGTOTHEMODELONTHEBASISOFTHEABOVEMODEL，WEDESIGNEDAC02LASERBASEDPHOTOACOUSTICSPECTROMETER。INORDERTOSTUDYTHEIMPORTANTMODULATINGEFFECTSOFETHYLENEONPLANTSBIOLOGICALACTIVITIES，WEUSEDTHISDEVICETOMEASURETHECONCENTRATIONOFETHYLENEPRODUCEDBYPLANTSUNDERDIFFERENTCONDITIONSTHEDEVICE‘SMINIMUMDETECTIONLIMITOFETHYLENEREACHES20PPT，MUCHPRECISERTHANTHECONVENTIONA】MEANSANEWMETHODCOULDBEAVAILABLETOTHESTUDYOFBIOLOGYANDATMOSPHEREPOLLUTANTSDETECTIONWHENTHISSPECTROMETERISFURTHERDEVELOPED

簡(jiǎn)介：_I關(guān)于學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)的聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行科學(xué)研究所取得的成果。對(duì)在論文研究期間給予指導(dǎo)、幫助和做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均在文中明確說(shuō)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留和按要求向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文紙質(zhì)本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)山東農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。論文作者簽名盛圍疊導(dǎo)師簽名善墨奎日期冬≥墨夕目錄中文摘要I●ABSTRACT”ⅡI1引言111氮肥營(yíng)養(yǎng)及其對(duì)土壤生物學(xué)特性影響的研究進(jìn)展1111氮素對(duì)果樹(shù)的作用L112氮肥對(duì)土壤生物學(xué)特性的影響212土壤中增加有機(jī)碳對(duì)土壤微生物特性的影響7121土壤中增加有機(jī)碳對(duì)土壤微生物數(shù)量的影響7122土壤中增加有機(jī)碳對(duì)土壤微生物量的影響”7123土壤中增加有機(jī)碳對(duì)土壤氮素轉(zhuǎn)化相關(guān)菌和氮素形態(tài)的影響713土壤碳氮比814本研究的目的意義”102材料和方法“1L21試驗(yàn)材料與試驗(yàn)設(shè)計(jì)11211碳氮比對(duì)蘋(píng)果園田間小區(qū)土壤和盆栽平邑甜茶根際氮素轉(zhuǎn)化菌、氮素形態(tài)和土壤酶活性的影響LL212秸稈和氮肥不同配比對(duì)平邑甜茶幼苗生長(zhǎng)和氮素吸收利用以及土壤酶活性的影響”1222各指標(biāo)測(cè)定方法13221植株指標(biāo)的測(cè)定13222土壤理化性狀的測(cè)定13223土壤酶活性的測(cè)定13、224土壤微生物性質(zhì)的測(cè)定13●23計(jì)算公式14‘24數(shù)掂處理143結(jié)果與分析”L531葡萄糖和氮肥不同配比對(duì)蘋(píng)果園土壤和盆栽平邑甜茶根際氮素轉(zhuǎn)化菌、土壤氮素形態(tài)及土壤酶活性的影響研究15