簡介：目的觀察、比較兔不同部位脂肪干細胞ADIPOSEDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS，ADSCS在體外培養(yǎng)時的生長特性，評價不同來源部位是否與其生物學性能存在聯(lián)系，以便選取優(yōu)良的種子細胞用于下一步尿路組織工程研究，同時為深入研究ADSCS生長特性具體的影響因素提供實驗基礎。方法應用酶解法I型膠原酶分離出附睪附近、腹膜后、頸背部三個部位脂肪中的間充質干細胞，進行體外傳代后差速貼壁培養(yǎng)純化，比較不同培養(yǎng)方案的細胞狀態(tài)，觀察四代以后三個不同部位ADSCS的形態(tài)特征和生長狀態(tài)，用鼠源性兔CD44分子的單克隆抗體做免疫細胞化學染色給予干細胞鑒定，對純化后的三部位第五代間充質干細胞進行成脂、成骨、成肌多向誘導分化，采用“油紅O”染色法對成脂誘導后細胞性質進行鑒定，VONKOSSA鈣染色法對成骨誘導細胞進行鑒定，RTPCR法對成平滑肌誘導細胞進行肌肉早期標志物ΑACTIN基因的檢測，MTT法檢測差速貼壁培養(yǎng)后不同部位細胞的生長曲線和倍增時間并進行統(tǒng)計分析和比較。結果⑴兔三個部位脂肪組織顏色均為淡黃色；附睪附近脂肪較多且存有明顯脂肪外包膜，其它細胞成分污染機率較小。⑵等量脂肪情況下，附睪附近和頸背部脂肪的原代ADSCS產量較多。⑶三個部位ADSCS原代及傳代細胞形態(tài)原代細胞形態(tài)較小，呈長梭形或多邊性貼壁生長；傳代后差速貼壁培養(yǎng)的細胞形態(tài)增大，呈鋪路石樣分布，生長、遷移活躍。⑷兔ADSCS標志CD44分子免疫細胞化學染色陽性，分布處呈棕黃色顆粒沉淀。⑸兔三個不同部位來源ADSCS多向誘導分化誘脂分化后油紅染色可見紅色脂滴；誘骨分化后VONKOSSA鈣染色可見細胞外基質物狀黑色鈣沉積；誘平滑肌六周后對照組ΑACTIN標志物經RTPCR檢測顯示弱條帶，實驗組則呈強條帶。⑹兔三個部位ADSCS生長曲線及倍增時間頸背部和附睪附近來源ADSCS間的倍增時間差異無統(tǒng)計學意義P005，而生長速度較快的頸背部和附睪附近來源ADSCS分別與腹膜后來源的ADSCS的倍增時間有明顯差異P結論不同部位來源的ADSCS在體外培養(yǎng)時其生物學特性存在差異，部位來源成為影響其增殖、分化能力的另一重要因素，這提示在后續(xù)的尿路組織工程基礎研究中，對ADSCS的來源部位要有所擇取，頸背部和附睪附近來源ADSCS成為較佳種子細胞。

簡介：目的探討犬脂肪干細胞ADIPOSEDERIVEDSTEMCELLSADSCS的成肌誘導，并將脂肪干細胞與聚羥基乙酸（POLYGLYCOLICACIDPGA）材料復合，研究應用生物反應器體外構建組織工程化尿路肌性管腔的可行性。方法脂肪干細胞通過酶消化法獲取，在體外培養(yǎng)和擴增后，應用流式細胞技術檢測細胞表面抗原，將脂肪干細胞應用成肌誘導培養(yǎng)液誘導4周，行細胞免疫熒光檢測，同時將脂肪干細胞接種于PGA上，構建細胞材料復合物，體外培養(yǎng)1周后，將其置于生物反應器內培養(yǎng)，實驗組予以動態(tài)力學刺激培養(yǎng)；對照組為靜態(tài)培養(yǎng)，先采用基礎培養(yǎng)基培養(yǎng)3周，而后用成肌誘導培養(yǎng)液誘導4周，行大體觀察及組織學檢測。結果流式細胞儀檢測結果CD90、CD44、CD105表達均為陽性，分別為9942％、9812、9327；CD34、CD45表達均為陰性分別為492和038，脂肪干細胞誘導4周后，表達結蛋白（DESMIN）和Α平滑肌肌動蛋白（ΑSMA）陽性；生物反應器內培養(yǎng)的肌性管腔色澤明亮，管腔圓潤，免疫組化染色顯示細胞材料復合物在誘導4周后，細胞表達DESMIN和ΑSMA陽性，細胞材料復合物膠原成分多。對照組構建的肌性管腔色澤暗淡，管腔輕度塌陷，細胞材料復合物膠原成分較少。結論將脂肪干細胞復合PGA材料在生物反應器內培養(yǎng)可構建具有良好結構的尿路肌性管腔。

簡介：學科間交叉融合，相互影響、相互促進，共同為人類健康服務，是21世紀科學技術發(fā)展的必然趨勢。論文集成計算機醫(yī)學影像技術、逆向工程技術、薄板多點快速成形技術、薄板成形數(shù)值模擬技術以及快速原型技術，進行鈦合金顱骨修復體的數(shù)字化制造研究，提出一套系統(tǒng)的個性化鈦合金顱骨修復體設計與制造方案，并在北京天壇醫(yī)院進行了具體的臨床實現(xiàn)。鈦合金顱骨修復體的數(shù)字化制造是技術生物TECHNICALBIOLOGY工程中的典型應用范例。在顱骨缺損修復手術中，鈦合金材料以其組織相容性好，質輕而強度高在臨床中廣為應用。但其固有的材料特性致使其可成形性差，塑形困難，常規(guī)手段難以制備出與患者顱骨貼合良好又外觀形態(tài)完美的高質量修復體，論文從修復體的個性化設計、單件定制制造、成形性分析到最后的裁剪與定位工藝幾個方面進行了大量的研究工作，并在研究過程中結合生物制造的諸多研究成果對技術生物工程進行了更加深入系統(tǒng)的闡述?！凹夹g生物TECHNICALBIOLOGY工程”最早由德國學者提出，但對其概念、內容、內涵及特點并未做進一步的論述。論文在總結大量的現(xiàn)代科學技術成功解決生命科學難題成果的基礎上，結合個性化鈦合金顱骨修復體定制研究，從系統(tǒng)的角度對技術生物工程進行全面闡述。認為技術生物工程是應用各種技術手段，支持和保障生命科學研究，實現(xiàn)延長生命和提高生命質量的最終目標。是一個特色鮮明、自成體系、方向明確的嶄新的應用型研究領域。在修復體曲面的計算機輔助設計上，借鑒逆向設計的工程模式，基于患者CT圖像重建顱骨原型，采用鏡像法和趨勢過渡法設計修復體三維曲面。參考患者健康數(shù)據(jù)設計的修復體曲面，在保證貼合精度的同時，實現(xiàn)了患者修復后整體外觀形態(tài)的對稱性。虛擬裝配技術使醫(yī)患雙方對病理情況有了更直觀的理解，對手術成功充滿信心。塑形難、成本高、周期長是目前個性化鈦合金修復體制造工藝中的瓶頸。論文創(chuàng)造性地將薄板多點快速成形技術引入到修復體塑形工藝中。其過程是以修復體三維曲面為依據(jù)，自動調整基本體沖頭高度形成成形包絡面，進而完成修復體沖壓塑形。論文還針對所采用的醫(yī)用鈦板材料特點和多點成形方式的不足，提出夾持成形、局部粘結和彈性墊工藝來彌補成形缺陷，提高了修復體成形質量。多點成形工藝的運用，使個性化修復體塑形方式上較之其他工藝體現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢①沒有模具的材料消耗、加工、中試以及修整，使工藝過程簡單、高效、低成本；②壓機成形，沖壓力大，不存在無法塑形或成形困難現(xiàn)象；③成形模面可通過基本體沖頭隨時調整，柔性強適應性廣，尤其是回彈補償方面具有傳統(tǒng)模具無可比擬的優(yōu)勢。論文基于有限元方法模擬修復體成形過程，使成形結果由定性的預測上升為定量的主動控制。從分析修復體鈦板的綜合成形性出發(fā)，確立其成形性能判斷指標，建立了修復體沖壓成形系統(tǒng)的數(shù)學模型及有限元模型，最后對求解的結果進行了系統(tǒng)分析。將典型修復體作為算例，通過分析模擬結果，總結了主要工藝參數(shù)對成形過程的影響規(guī)律。根據(jù)模擬結果，預測了成形過程可能出現(xiàn)的各種缺陷拉裂、起皺與回彈，并提出了針對性的解決方案，如預剪口工藝和中心變形法。有限元技術的運用，減少了成形結果的不確定性，提高了一次塑形成功的概率。在修復體落料工藝上，提出采用薄片模型貼合對比法實現(xiàn)了修復體從壓制毛坯的精確分離。修復體邊緣是一條或幾條空間不規(guī)則曲線，不具備用于分辨的明顯特征，給裁剪分離造成很大困難。采用基于分層制造思想的FDM快速原型工藝制備的修復體薄片模型，不僅解決了修復體分離問題，還利用定位孔技術巧妙地化解了修復體邊界形狀的相似性給臨床醫(yī)生造成的術中定位混亂的困擾。鈦合金顱骨修復體的數(shù)字化定制技術，在北京天壇醫(yī)院與天津環(huán)湖醫(yī)院進行了多例臨床手術實例驗證，結果表明，采用數(shù)字化技術制備的修復體與顱骨缺損部位吻合良好，手術時間明顯縮短，縫合后外觀形態(tài)完美，既達到了治病救人的目的，又起到了整形美容的作用。

簡介：點擊查看更多通過層層滾筒技術進行基于細菌纖維素和PLGA的組織工程血管的生物制造.pdf精彩內容。

簡介：點擊查看更多軟骨細胞復合β-TCP生物陶瓷構建組織工程軟骨應用研究.pdf精彩內容。

簡介：Y981770K洛支通大學匿爹眩博士掌位論文題目組織工程化SIS生物膜促進牽引成骨的實驗研究作者姓名指導教師學科專業(yè)培養(yǎng)阜JLI論文提交日期遂墮±整撞里墮監(jiān)廛星空里膣魚魚之壁2垃盤亟盤堂匡塋墮2006424上海交通大學學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權上海交通大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密口，在一年解密后適用本授權書。本學位論文屬于、不保密口。請在以上方框內打“√”學位論文作者簽名專峰日期D‘年4月“日指導教師簽名／一、J2日期D占年47膏J7，，，，／／7?；嚕蜭、，；形日

簡介：背景下腰痛LOWBACKPAINLBP是臨床常見疾病是導致勞動力喪失的主要原因之一現(xiàn)在一致認為椎間盤退變性疾病DEGENERATIVEDISCDISEASEDDD是引起LBP最常見的原因。有報道發(fā)現(xiàn)80％的人一生當中都曾發(fā)生過LBP如此高的發(fā)病率給國家和社會帶來了嚴重的經濟損失。目前治療DDD的方法包括保守治療和手術治療。保守治療屬對癥治療以減輕和緩解疼痛為目的不能解決椎間盤INTERVERTEBRALDISCIVD退變導致的生物學喪失問題因此并不能從根本上解決疼痛的根源。手術治療主要包括髓核摘除術和脊柱融合術。手術治療旨在解除突出的椎間盤組織的機械壓迫作用從而達到解除疼痛的目的但其也因未能恢復IVD的生物學性能遠期效果并不好且常因內固定的使用而加速相鄰節(jié)段椎間盤退變從而發(fā)生新的問題。隨著科學技術的日新月異特別是近年來逐漸出現(xiàn)了多種IVD移植和人工椎間盤置換技術這些技術一定程序上改善了臨床治療的效果但這些技術也沒有從根本上解決或者逆轉IVD的生物學功能仍然存在許多并發(fā)癥和缺陷?，F(xiàn)在認為理想的治療DDD的方法是既能緩解疼痛癥狀又能恢復IVD的結構和生理功能遠期效果好復發(fā)率低。隨著基礎醫(yī)學特別是干細胞研究的迅速發(fā)展基于干細胞的治療手段已成為治療DDD最有希望前途的手段之一。近年來應用組織工程技術對退變椎間盤進行再生和修復的研究取得了一些成績尋求以提高所構建的組織工程椎間盤的生物學活性為目的的新型種子細胞來源成為一項重要的任務。當前多項研究證實人退變纖維環(huán)、髓核組織中存在具有多向分化潛能的干細胞。此外在我們的前期工作中課題組從人退變軟骨終板中亦分離出類似于MSC的干細胞這些細胞經誘導可以向骨、軟骨、脂、肌方向分化且體外實驗結果顯示出比BMMSCS更強的成軟骨能力。本研究旨在前期研究的基礎上從人退變椎間盤中分離、擴增纖維環(huán)細胞、髓核細胞、軟骨終板細胞經瓊脂糖懸浮培養(yǎng)法篩選后并探討纖維連接蛋白篩選的效能所獲取的干細胞克隆與來自同一個體的BMMSCS進行初步的細胞生物學特性比較作為種子細胞分別構建組織工程髓核進一步比較上述四種干細胞在動物體內的髓核再生和椎間盤的修復能力。目的通過體內、外實驗對NPSCS、AFSCS、CESCS與BMMSCS的生物學特性進行檢測與比較初步探討四種干細胞在細胞形態(tài)、增殖活性、表面標記物和體外向三系分化的能力以及作為組織工程種子細胞在組織工程應用上的生物學特性差異以期尋找一種新的、可應用于組織工程學的種子細胞為組織工程椎間盤的構建甚至臨床的應用治療提供良好的種子細胞來源。方法從因患腰椎間盤退變性疾病行椎間盤摘除植骨融合術中收集符合納入標準的標本。將手術中最先切除出來的AF組織經副教授以上職稱經驗豐富的術者確認后收入AF標本盒隨后兩次切除組織予以舍棄其后切除的標本經術者確認為NP時裝NP標本盒刮除的CEP裝入CEP盒植骨前取髂骨時接5ML骨髓以上標本再在解剖顯微鏡下清理異物雜質如韌帶、肌肉及脂肪等再次分離AF、NP及CEP運用機械酶消化法獲取AF細胞、NP細胞和CEP細胞。BMMSCS運用PERCOLL液梯度分離法獲取。獲得的IVD來源的三種細胞經體外擴增至第2代時第2代細胞經瓊脂糖懸浮培養(yǎng)法篩選并初步探討FIBONECTIN差別粘附法的篩選效果挑選取單細胞形成的克隆進行體外擴增擴增后的細胞進行流式細胞術檢測干細胞標志物、多向分化能力進行干細胞的鑒定。同樣經誘導向骨、軟骨及脂三系分化的不同干細胞經RTPCR及組織學檢測分析尋找不同干細胞向不同細胞系分化能力的差異性。將不同干細胞復合藻酸鹽體外構建組織工程髓核培養(yǎng)1、7、14及28天后進行支架細胞增殖檢測、DNA和SGAG含量檢測最后行SEM檢測尋找差異性。另外所獲細胞經CFDASE熒光染料標記后植入纖維環(huán)穿刺抽髓核抽吸法制造的椎間盤退變動物模型體內于術后第1、3及6月后進行MRI和X線檢測評估IVD的退變情況并在第6月處死動物進行目標椎間盤的組織學檢測評估。鑒于在前兩部分實驗中發(fā)現(xiàn)四種不同干細胞中CESCS具有最強的體外成骨及成軟骨能力復合藻酸鹽構建的組織工程髓核也具有良好的生物學性能。此外已有大量研究發(fā)現(xiàn)BMMSCS具有良好的體內成骨效應常常作為種子細胞來探討用于橫突間植骨融合的應用研究并顯示出了良好的應用前景。因此我們特將CESCS與BMMSCS一起復合多孔羥基磷灰石植入新西蘭大白兔兩側橫突間術后2月時間內進行X線、三維CT及MICROCT檢測及組織學評估探討兩種不同干細胞間的成骨效應差異分析和評估橫突間融合的融合效率差異。數(shù)據(jù)應用SPSS130軟件作統(tǒng)計學處理定量結果采用配對T檢驗、單因素方差分析和重復測量的單因素方差分析進行統(tǒng)計分析P結果1來自同一個體的AFSCS、NPSCS、CESCS與BMMSCS形態(tài)上類似呈成纖維細胞樣外觀但仍存在細小差別AFSCS最細長BMMSCS最寬大而CESCS尺寸最短NP居中四種干祖的體外增殖能力沒有顯著差異在體外實驗觀察中經PCR及半定量分析CESCS成骨和成軟骨能力最強AFSCS和BMMSCS居中兩者沒有顯著差異而NPSCS最弱BMMSCS成脂能力最強NPSCS次之CESCS和AFSCS最弱流式細胞術結果表明AFSCS和CESCS的CD105表面標志物均值呈中強表達低于95而NPSCS略低于95四組干細胞的其它標志物的表達滿足ISCT對間充質干細胞的定義標準四種干細胞體外構建的組織工程髓核培養(yǎng)結果表明CESCS與BMMSCS組中合成和分泌的SGAG與DNA含量最高NPSCS次之AFSCS最弱組織工程髓核中的細胞增殖無顯著差異組織工程髓核的SEM結果表明各干細胞皆與支架粘附較好在28天后能分泌大量的ECM其中CESCS最多BMMSCS次之NPSCS居中AFSCS最弱。2AFSCS、NPSCS、CESCS與BMMSCS復合藻酸鹽植入椎間盤退變的動物模型體內通過術后的檢測分析CESCS藻酸鹽復合物相對其余三組細胞具有最強的髓核再生和椎間盤修復能力BMMSCS藻酸鹽和NPSCS藻酸鹽居中而AFSCS藻酸鹽最弱。3CESCS與BMMSCS與HA復合進行兔腰椎橫突間植骨對比中兩組干細胞復合HA皆能達到橫突融合增強脊柱的穩(wěn)定性CESCS相對BMMSCS具有更強的體內成骨能力多孔羥基磷灰石在應用于腰椎橫突間植骨融合實驗時抗折性較差需要加以改進以適應一定的抗折性要求。結論1體外比較實驗中CESCS具有最強的成骨和成軟骨能力AF和BMMSCS居中NPSC最弱。2CESCS顯示了用于構建組織工程髓核的優(yōu)秀的生物學特性在體內或體外都可以作為一種具有優(yōu)越性能的種子細胞應用于髓核組織工程領域發(fā)揮干細胞的潛能。3初步實驗結果表明相比較BMMSCSCESCS具有更強的體內成骨能力。此外CESCS能夠作為一種優(yōu)秀的種子細胞用于腰椎橫突間融合通過提高融合率和增強成骨效應達到增加脊柱穩(wěn)定性的作用。

簡介：目的研究聚乳酸PLA絲素蛋白復合組織工程支架的制備方法，與單純聚乳酸支架進行比較，評價其生物學性能。方法將絲素蛋白粉末加入到40％的氯化鈣溶液中加熱攪拌60MIN，制成絲素蛋白的氯化鈣溶液，將該溶液倒入透析袋，在水槽中透析72H，得到絲素蛋白的水溶液。將聚乳酸支架材料放在絲素蛋白的水溶液中浸泡，經干燥后制備成聚乳酸絲素蛋白復合支架。將兩種支架分為PLA支架組與復合支架組，按ISO10993標準分別作溶血實驗、動態(tài)凝血時間實驗、細胞毒性實驗，刺激實驗和熱原實驗，并逐項進行比較。結果在刺激實驗中兩種材料均未引起動物皮膚明顯刺激，符合標準；在熱原實驗中，兩種支架材料引起動物體溫升高均在02℃以下并且體溫升高總度數(shù)在10℃以下，無明顯差別；而溶血實驗中，兩種支架材料樣品的溶血率均小于5％P0000，表明復合支架抗溶血性優(yōu)于PLA支架；動態(tài)凝血時間實驗中復合支架的動態(tài)凝血時間為37MIN，PEA支架的動態(tài)凝血時間為26MIN，復合支架的抗凝血性能要明顯優(yōu)于PLA支架；細胞毒性實驗中，復合支架組的細胞生長情況要明顯優(yōu)于PLA支架組，復合支架的細胞毒性要明顯小于PLA支架。結論聚乳酸絲素蛋白復合支架材料具有比單純聚乳酸支架材料更優(yōu)良的生物相容性，可以作為支架材料植入體內。

簡介：中山大學碩士學位論文Y767520組織工程化生物角膜構建方法的比較研究THECOMPARATIVESTUDYOFRECONSTRUCTIVEMETHODSFORTISSUEENGINEERINGCORNEAINVITRO專業(yè)名稱眼科學單位中山眼科中心學位申請人劉炳乾指導教師王智崇教授學位類型醫(yī)學科學學位一一孫鼽I鰳軋鉚卿覆本課題受以F基金資助廣州市科技計劃項目200221一E0033、／’。東省科技計劃項目2003A3020401、廣東省科技計劃項目組織T程重大專項A302020101、教育部博士點基金20030558074國家重點基礎研究發(fā)展規(guī)劃項目G19990543096、國家高技術研究發(fā)展計劃2003AA205050、國家“十五”科技攻關計劃2004BA720A15。2005年5月廣州重妒◇中山太學碩士學位論文組織工程化生物角膜構建方法的比較研究羊膜組保存的羊膜呈乳白色半透明狀，去掉上皮后透明度明顯增加；掃描電鏡下見去掉上皮后表面較平滑，透射電鏡F可見羊膜上皮細胞胞漿中含有較多的溶酶體色素顆粒，角膜緣組織塊在羊膜上接種3天左右即有細胞從組織塊周圍爬出，呈膜片狀向周圍擴展，2周左右細胞融合，暴露于氣液界面時羊膜周邊容易卷曲，并且形成放射狀皺褶，HE染色可見細胞形成規(guī)則的單層E皮結構，透射電鏡下可見羊膜上的單層細胞核呈長圓形，細胞與羊膜基質之間連接緊密。角膜基質組掃描電鏡下見板層角膜刀切削的基質表面平滑，手工剖切的角膜基質表面起伏明顯，呈浮雕狀。透射電鏡下可見角膜基質板層纖維排列規(guī)則，相鄰板層間纖維走向相互垂直，在培養(yǎng)液中浸泡過3小時后角膜基質纖維板層間可見較多空泡。角膜基質在培養(yǎng)液中水腫明顯，氣液界面下水腫有所減輕，2周時HE染色顯示基質中出現(xiàn)大量空泡，上皮細胞形成2～3層，細胞大部分扁平狀，類似角膜表層細胞。接種的組織塊及擴增的上皮細胞與基質之間連接疏松，形成較多的空隙，電鏡下細胞大部分脫落，殘留的少數(shù)細胞多為扁平上皮。PET載體組細胞1周左右融合，暴露于氣一液界面后，相差顯微鏡下可見細胞排列整齊緊密，2周HE染色可見細胞形成2～3層的復層結構，3周HE染色可見細胞形成3～5層的復層結構，厚度接近正常兔的角膜上皮層。細胞之間連接緊密，細胞與培養(yǎng)膜之間少見空隙。底層細胞呈現(xiàn)立方狀，表層細胞呈現(xiàn)扁平外觀，中間細胞呈翼狀，細胞的形態(tài)排列類似周邊區(qū)角膜上皮。透射電鏡下可見底層細胞呈現(xiàn)立方狀，胞核長圓形；中間細胞呈翼狀胞核，胞核接近圓形；表層細胞呈現(xiàn)扁平狀外觀，胞核長而扁平。細胞之間存在橋粒結構，各層細胞之間連接存在細小空隙，細胞與基底膜間連接斷續(xù)不整，偶見半橋粒樣結構。掃描電鏡下，表層細胞微絨毛清晰，類似正常角膜上皮微絨毛。細胞排列方式接近于正常角膜細胞的鱗狀排列，細胞之間存在一定的空隙，平均細胞面積比正常角膜上皮細胞小。2細胞培養(yǎng)池、灌注培養(yǎng)、旋轉培養(yǎng)三種方法的比較構建的組織形態(tài)及蛋白質表達細胞1天融合，暴露于氣一液界面后，可見細胞排列整齊緊密，2天HE染色可見大部分區(qū)域由單層圓形細胞構成，細胞之間排列致密，2周HE染色可見細胞形成3～5層的復層結構，細胞之間鑲嵌排列底層細胞呈現(xiàn)立方狀，表層細胞呈現(xiàn)扁平外觀，中間細胞呈翼狀，接近正常兔的角膜上皮層的排列方式。HOECHST33342、PROPIDIUMIODIDE熒光染色共聚焦顯微II

簡介：本研究分為三部分第一部分組織工程人工肌肉的構建與評價及神經支配特性的改進目的體外構建組織工程人工肌肉，并分析組織工程人工肌肉中肌球蛋白重鏈亞型（MHC）表達情況。為進一步提高人工肌肉對神經遞質的敏感性，我們嘗試上調乙酰膽堿受體在人工肌肉表面的數(shù)目并誘導人工肌肉形成形態(tài)成熟的乙酰膽堿受體。方法將表達綠色熒光蛋白的C3H小鼠原代成肌細胞與120ΜLFIBRIN水凝膠混合，體外構建人工肌肉。利用實時定量PCR對平面培養(yǎng)細胞和組織工程人工肌肉中的MHC亞型進行分析。利用AGRIN蛋白上調乙酰膽堿受體在人工肌肉表面的數(shù)目。用LAMININ蛋白在人工肌肉表面誘導形成形態(tài)成熟的乙酰膽堿受體。并用激光共聚焦顯微鏡計數(shù)乙酰膽堿受體數(shù)目，觀察乙酰膽堿受體形態(tài)。結果未經過任何處理的組織工程人工肌肉的MHC亞型處于胚胎期和成熟期之間，相當于圍周期（PERINATAL）的發(fā)育水平。平面培養(yǎng)的細胞中MHC亞型為胚胎期水平。AGRIN蛋白誘導，增加了乙酰膽堿受體在人工肌肉表面的數(shù)目。LAMININ蛋白處理，改善了乙酰膽堿受體的結構，形成形態(tài)成熟乙酰膽堿受體。結論從發(fā)育學意義上看，人工組織肌肉表達更加成熟的MHC亞型，更類似成熟肌肉組織。AGRIN蛋白誘導成功增加乙酰膽堿受體數(shù)目。LAMININ蛋白誘導改善了乙酰膽堿受體的結構，使之變得更加成熟有利于更多神經突觸的形成，進一步提高了人工組織肌肉在神經生物學上的結構優(yōu)勢，為在人工肌肉中引入神經分布奠定了基礎。第二部分VEGF改善組織工程人工肌肉周圍血管網絡分布的研究目的改善人工組織工程肌肉的生物特性，增加其周圍血管生成，達到增強其與宿主循環(huán)系統(tǒng)營養(yǎng)與代謝交流的目的，使之在移植后更好與宿主整合，長期生存，在宿主體內發(fā)揮作用。方法逆轉錄病毒感染成肌細胞，使其分別表達VEGF和GFP。用分化培養(yǎng)液，體外融合表達VEGF和GFP的成肌細胞，以形成雜交人工肌肉。用共聚焦顯微鏡觀察雜交人工肌肉組織形態(tài)和結構，以及移植前后細胞存活率。用免疫酶連反應檢測VEGF含量。用伊文思藍染色評價人工肌肉周圍血管網絡形成情況。結果表達VEGF的細胞可在分化條件下分化為成熟肌細胞，并形成肌纖維，肌細胞分化過程不受VEGF生長因子表達的抑制。用這種細胞在體外成功構建組織工程人工肌肉，結構形態(tài)與生理狀態(tài)下的肌肉相似。VEGF的表達不影響雜交人工肌肉中肌細胞的存活率。調節(jié)雜交比例可調節(jié)VEGF的生成量。移植到小鼠皮下之后，表達VEGF的人工肌肉明顯增加人工肌肉周圍血管網絡的生成，提高肌細胞的存活率。結論肌細胞分泌的VEGF可在移植區(qū)域強烈促進局部微血管生成，這種影響可持續(xù)幾個月，為其移植后與宿主整合提供了生理基礎，也有利于肌細胞所表達的治療性蛋白盡可能多進入血液循環(huán)，在宿主體內發(fā)揮有效作用。第三部分PLG生物支架作為骨骼肌細胞載體的研究及NK細胞移除對支架上肌細胞體內存活率的影響目的評價人工合成的可降解生物支架PLG作為成骨骼肌細胞載體的效果，以及去除裸鼠NK細胞對PLG支架上成熟肌細胞成活率的影響。方法利用高壓氣泡法成功制備可降解的多孔PLG生物支架。將人類原代骨骼成肌細胞接種至PLG生物支架上，檢測成肌細胞在PLG支架是否可體外分化為成熟肌細胞。將接種肌細胞的PLG生物支架移植至免疫缺陷型小鼠體內，觀察肌細胞在體內存活率。利用抗NK細胞抗體去除裸鼠體內NK細胞，檢測去除NK細胞后，PLG生物支架上肌細胞的存活率。結果成功制備PLG生物支架。成肌細胞可在PLG生物支架上分化為成熟肌細胞。與無張力組相比，PLG支架顯著提供肌細胞在體存活率。PLG在移植四周后，PLG生物支架上的肌細胞密度降低了78。去除裸鼠體內NK細胞的影響，在第4周，肌纖維中肌細胞的存活率達3472，遠高于未去除NK細胞組的存活率2272。經過NK細胞抗體處理過的動物肌纖維綠色熒光強度比未經過處理組高2倍以上。結論PLG生物支架可作為成肌細胞的載體，為肌細胞提供張力，成肌細胞在其上可分化為成熟肌細胞，形成肌纖維，并長期存活。去除NK細胞可使肌細胞在移植之后存活率提高。該實驗為肌細胞以及PLG生物支架用作基因療法的載體提供了實驗依據(jù)。

簡介：目的研究骨髓間充質干細胞BMSCS與生物衍生骨體外復合構建的組織工程化骨與生物衍生骨修復兔橈骨缺損血管化進程和生物力學性能。方法將25只健康成年新西蘭大白兔雙側橈骨制備成中段15CM的骨缺損將BMSCS與生物衍生骨于體外構建成功后通過手術將其植入右側橈骨缺損處作為實驗組以單純生物衍生骨植入左側橈骨缺損處作為對照組另5只為空白組不植入任何材料正常組為正常骨質。在2、4、8、12周各時間點分別行大體標本、組織學觀察和生物力學極限強度測試評價組織工程化骨的血管化和力學性能。結果大體觀察術后2周靠近斷端處有纖維組織連接但斷端縫隙仍明顯術后4周對照組與實驗組都有骨痂形成但前者的量明顯少于后者且斷端仍較明顯術后8周實驗組兩斷端已融合為一體大量骨痂都與尺骨之間形成骨橋塑性尚不完全。而對照組骨痂主要集中在斷端附近術后12周實驗組塑性好于對照組。術后12周的空白組斷端骨萎縮缺損明顯。組織學觀察術后2周實驗組和對照組血管形成較少修復材料周圍有少量炎性細胞浸潤術后4周實驗組和對照組修復骨缺損材料中均有大量血管生成血管主要是從周圍軟組織和骨髓腔長入術后8周實驗組血管排列規(guī)律化部分已形成規(guī)則的縱行排列血管管徑大小差別較小排列較稀疏。對照組的血管網仍較紊亂術后12周實驗組血管已達成熟階段血管排列方向均勻、有序形態(tài)結構接近正常皮質骨的血管形態(tài)。對照組血管口徑趨于一致分布比較規(guī)律化。生物力學極限強度測試對于4、8、12周實驗組和對照組的兩組材料壓縮組、彎曲組、扭轉組極限強度數(shù)據(jù)統(tǒng)計存在差異P術后2、4、8、12周實驗組和對照組組織學血管面積分析評價組織工程化骨和生物衍生骨的血管化進程。與正常皮質骨血管面積相比4、8周的兩組血管面積明顯大于正常組與正常組血管面積統(tǒng)計學分析有顯著性差異P結論骨髓間充質干細胞與生物衍生骨構建的組織工程化骨有較好的血管化進程和較好的生物力學性能。

簡介：本文針對單一組分或單一結構的材料不能滿足機體對骨修復材料性能多樣化要求的現(xiàn)狀設計并制備了一系列生物可降解復合支架并對支架的內部形貌、親水性、力學性能、降解性做了相對全面的考察該系列支架包括聚乳酸Β磷酸三鈣、聚乳酸聚乳酸聚乙二醇、聚乳酸Β磷酸三鈣聚乳酸聚乙二醇支架以及其他的聚乳酸無機粒子共混支架其中聚乳酸Β磷酸三鈣支架具有很好的力學性能Β磷酸三鈣的引入對于改善體系降解酸性具有很好的作用聚乳酸聚乙二醇的引入不僅可以改善材料的親水性、還能提高支架的孔隙率使支架具有規(guī)則的貫通性好的孔結構本文首次設計將熱致相分離與鹽瀝濾的方法相結合制備了具有兩級孔徑結構的支架這種特殊結構不僅適于骨細胞的生長還為引入緩釋藥物顆粒和活性細胞提供了方便本文還對多種支架的體外細胞培養(yǎng)和細胞骨特異性蛋白的表達做了一定的研究這些研究有助于我們篩選出具有更好生物活性和骨誘導性的復合支架材料

簡介：782050中固于嘉和暗科火孝中國箭學甜芬豫顧十研究牛學位論文巾FQ協(xié)和醫(yī)科人。學研究乍院中國協(xié)和醫(yī)科大學碩士論文文獻綜述于結晶，可以得到蛋白的三維結構以進行結構功能關系的研究。盡管單獨使用單鏈抗體進行腫瘤治療就能獲得令人滿意的臨床療效，提高單鏈抗體效應子功能可以強化其療效，這可以通過構建不同形式的單鏈抗體偶聯(lián)物來實現(xiàn)。偶聯(lián)的效應組份包括放射性核素、化療藥物、毒素、前藥激活酶、細胞因子、雙功能抗體、超抗原、光敏劑、脂質體和納米顆粒等8。偶聯(lián)主要是通過化學和基因工程的方法使單鏈抗體與效應分子偶聯(lián)?；瘜W方法偶聯(lián)是指用化學的方法將效應分子與單鏈抗體的C端或氨基酸殘基連接，本文主要介紹采用基因工程的方法將單鏈抗體和效應分子通過融合表達進行偶聯(lián)，即用基因工程的方法將效應分子與單鏈抗體的C端連接，單鏈抗體仍然具有和完整抗體或單價的FAB片段同樣的親和力。在構建融合蛋白時，為了使兩部分結構的空間構象不至于相互影響，還需要在中間用一段柔性的肽鏈連接【9】。這些單鏈抗體偶聯(lián)物利用單鏈抗體對腫瘤的高度特異性實現(xiàn)對腫瘤的靶向性、選擇性治療，同時減輕對正常組織的毒副作用T101，實驗研究表明，單抗偶聯(lián)物對移植于裸鼠的人體腫瘤生長有抑制作用，偶聯(lián)物與相應的游離藥物相比具有更高的療效或顯示較低的毒性ILLL21圖1基因工程單鏈抗體偶聯(lián)物示意圖FIG1STRUCTUREOFBIOENGEEREDSCFVIMMUNOCONJUGATES2基因工程單鏈抗體導向藥物的分類和構成4

簡介：本文利用模式識別技術中的小波分析方法、BP神經網絡技術，應用于CT圖像識別及三維人臉識別等生物醫(yī)學工程中。討論了模式識別，ＣＴ圖像識別，三維人臉識別研究現(xiàn)狀與存在問題。介紹了關鍵基礎理論及技術，分析了腦部CT圖形異常檢測方法。對三維人臉識別所涉及的若干關鍵技術姿態(tài)矯正、人臉鑒別等方面進行了研究。為了便于研究，設計并實現(xiàn)了相關原型系統(tǒng)。具體研究內容如下1針對腦梗CT圖像自動判讀問題，本文提出一種基于隨機HOUGH變換和BP網絡的腦部異常檢測算法，首先通過隨機HOUGH變換，利用不同腦組織CT圖像的灰度信息，檢測圓形或類圓形區(qū)域，初步判斷可能異常的區(qū)域，利用RHT變換求出該區(qū)域中心位置及半徑；然后采集可能異常部位的灰度特征信息，利用訓練過的BP網絡進行比對分析，排除正常區(qū)域，確定腦部異常部位。2提出基于曲率變換的鼻子位置檢測算法BCCNPD。利用小波奇異點檢測原理來確定三維空間內鼻子位置，實現(xiàn)準確定位鼻子；通過BCCNPD算法，利用鼻梁空間特性，進行人臉姿態(tài)的調整，試驗表明鼻子位置檢測算法BCCNPD能夠將各種姿態(tài)3D人臉數(shù)據(jù)調整到端正姿態(tài)。利用鼻子位置檢測算法BCCNPD調整后的人臉，通過平行于XOY平面做切面，可以直接剔除耳朵、脖子等冗余數(shù)據(jù)，能夠精確提取三維人臉輪廓，試驗效果較好。3本文提出了基于小波分析的三維人臉特征提取算法WAFFE，利用DAUBECHIES小波提取人臉切面的切線曲率變化點，實現(xiàn)人臉特征點的自動定位與提取；利用WAFFE算法，能夠實現(xiàn)大規(guī)模的三維人臉數(shù)據(jù)存儲與檢索；基于WAFFE算法，給出了快速特征比對算法FFMA，可以簡化人臉特征比對過程，試驗效果較好。

簡介：生物鈦合金材料的研究是隨著人們對健康的需求以及生活質量的提高而發(fā)展起來的。它經歷了純鈦、傳統(tǒng)TC4TI6AL4V合金、無鋁鈦合金、無釩無鋁鈦合金，低彈性模量鈦合金等幾個階段。該論文以研究低彈性模量鈦合金材料為目的，分別對鈦鈮合金，鈦鈮鉭鋯合金進行了研究。首先探索了鈮含量對鈦鈮二元合金彈性模量的影響，然后運用正交法及D電子理論對鈦鈮鉭鋯合金的成分進行了設計。利用光學顯微鏡，掃描電鏡SEM，X射線衍射XRD研究了材料在不同熱處理狀態(tài)下的組織結構，并進行了力學性能及彈性模量測試，并對性能較好的TI20NB13TA13ZR合金作了膨脹性能測定和差熱分析。在X衍射的基礎上，對合金中存在的組織作了晶格常數(shù)分析。最后與中國醫(yī)科大學合作，研究了材料的生物腐蝕性能。鈦鈮系列二元合金在固溶狀態(tài)下均具有較低的彈性模量，是TC4合金約110GPA的50％～70％；TI20NB合金最低，約58GPA。拉伸強度較低，RM為635±30MPA，RP02為330～370MPA。伸長率及斷面收縮率都較高，分別為19％～32％和31％～69％，塑性優(yōu)異。TI20NB13TA13ZR合金是在鈦鈮二元合金基礎上發(fā)展起來的綜合力學性能較好的合金。它在固溶狀態(tài)下彈性模量可達62GPA，抗拉強度可達650MPA，屈服強度達480MPA。在時效狀態(tài)下，可達68GPA，力學性能RM≥720MPA，RP02≥620，A≥10％，Z≥20％，均達到指標要求。鈦鈮及鈦鈮鉭鋯合金在固溶狀態(tài)下淬火時，發(fā)生馬氏體轉變，顯微組織主要是針狀馬氏體ΑΒ亞穩(wěn)相，部分合金中存在針狀Α相。時效狀態(tài)下的合金，當時效溫度在300～400℃左右時，合金組織為ΑΒΩ相，由于硬脆相Ω的析出，合金的彈性模量、拉伸強度均較高，但塑性較差；當時效溫度在500℃左右時，合金組織為ΑΒ相，在Β原始晶界及晶內，ΑΒ呈彌散析出，具有較好的綜合力學性能。時效狀態(tài)下合金彈性模量相對固溶態(tài)有所升高。TI20NB13TA13ZR在模擬人體體液SBF中浸泡90天，用掃描電鏡觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯的腐蝕痕跡，說明該合金具有良好的生物耐蝕性。