擬南芥新基因At234的克隆及其在非生物與生物脅迫中的功能分析.pdf

1、本研究對擬南芥RNAi突變體文庫進(jìn)行高溫脅迫篩選，獲得擬南芥突變體陽性單株，PCR鑒定測序獲得目的基因片段，長度為206bp，并命名該基因?yàn)锳t234。通過擬南芥TAIR網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn)，At234位于擬南芥第2號染色體上，無內(nèi)含子結(jié)構(gòu)，基因全長380bp，5’-UTR長度為44bp，3’-UTR長度為102bp，其ORF為234bp，編碼77個(gè)氨基酸殘基，所翻譯蛋白質(zhì)的分子量為8.944kDa，等電點(diǎn)為9.98。為了進(jìn)一步驗(yàn)

2、證該基因的功能，我們分別設(shè)定了RNAi植株與植物病原菌互作、重金屬脅迫、干旱脅迫和高鹽脅迫等生物與非生物脅迫驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。具體研究結(jié)果如下：
　　確定野生型擬南芥的極限耐受高溫溫度閾值，最終采用65℃高溫分別處理擬南芥野生型與RNAi文庫（250庫與350庫）突變體各30min，在兩個(gè)RNAi文庫中都篩選出了若干株擬南芥耐極限高溫的RNAi突變體，通過PCR克隆獲得目的基因，均為At234基因的突變株。繼而通過潮霉素篩選培養(yǎng)，單株收種

3、，獲得擬南芥RNAi突變體的純合子。
　　采用本實(shí)驗(yàn)室自建的植物病原菌互作瓶內(nèi)檢測體系分析at234植株與病原菌的互作反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，在組培條件下at234植株較野生型擬南芥對棉花大麗輪枝菌和大豆核盤菌均表現(xiàn)為明顯感病；對玉米灰葡萄孢菌和茄病鐮刀菌均表現(xiàn)為明顯抗?。欢诤托←湷嗝规呔幕プ髦衋t234植株和野生型擬南芥均為正常感病。
　　在組培條件下，at234植株較野生型擬南芥表現(xiàn)出高抗CdCl2（100mg/L）和Pb(