線粒體ATP敏感性鉀通道在降鈣素基因相關(guān)肽改善大鼠心肌缺血-再灌注損傷中的作用研究.pdf

1、目的：
　　1、評價降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是否參與缺血心肌的保護(hù)作用，通過觀察其對再灌注后心臟功能和心臟梗死面積的影響；
　　2、通過對培養(yǎng)的心肌細(xì)胞進(jìn)行藥物干預(yù)，進(jìn)一步探討mito-KATP在CGRP改善心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用。
　　方法：
　　第一章：CGRP對健康大鼠離體心臟缺血再灌注后心臟功能及心肌梗死面積的影響
　　采用體

2、重為250-300g的健康雄性SD大鼠。建立Langendorff離體心臟缺血再灌注實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，?shí)驗(yàn)研究分二部分：
　　第一部分在大鼠離體心臟缺血再灌注前分別給予CGRP、CGRP+CGRP8-37處理，通過觀察心功能各項(xiàng)指標(biāo)（左室收縮壓（left ventricular systolic pressure， LVSP），左室舒張末期壓（left ventricular end-diastrolic pressure，LVEDP），

3、左室主動收縮壓（left ventricular developed pressure，LVDP＝LVSP－LVEDP），心率（heart rate，HR），舒張時心肌最大變化速率（-dp/dtmax），收縮時心肌最大變化速率（+dp/dtmax））評估CGRP對心臟的保護(hù)作用。
　　第二部分收集第一部分各組離體心臟，進(jìn)行TTC染色，根據(jù)對染色結(jié)果的觀察，分析外源性CGRP對缺血/再灌后心肌梗死面積的影響；
　　第二章：CG

4、RP對缺氧復(fù)氧乳鼠心肌細(xì)胞胞漿cytC變化的影響
　　第一部分體外培養(yǎng)和鑒定新生乳鼠心肌細(xì)胞。選用出生1-3d SD乳鼠建立心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)模型；采用免疫細(xì)胞化學(xué)SABC染色方法進(jìn)行鑒定心肌細(xì)胞。
　　第二部分觀察不同藥物處理下，乳鼠心肌細(xì)胞胞漿cytC濃度的變化。取24孔心肌細(xì)胞，將其隨機(jī)分為8組（n=3孔）：空白對照組；A/R組；CGRP+A/R組（10-8mol/L）；CGRP+CGRP8-37+A/R組（1umol/

5、L）；5-HD+CGRP+A/R組（500umol/L）；H-89+CGRP+A/R組（1umol/L）；chelerythine+CGRP+A/R組（2umol/L）；DZ+A/R組（100umol/L）。每組復(fù)氧2h后選用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測胞漿中cytC的濃度。
　　結(jié)果：
　　1、CGRP對健康大鼠離體心臟缺血再灌注后心臟功能及心肌梗死面積的影響。
　　1.1心臟功能
　　心臟灌流呈穩(wěn)定狀

6、態(tài)時，各組間心功能改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與穩(wěn)定狀態(tài)的基礎(chǔ)值相比，各組再灌注期間HR、±dP/dtmax、LVSP、LVDP逐漸下降（P<0.05），而LVEDP顯著升高（P<0.05）。與I/R組相比，CGRP組再灌注期間LVSP、HR、±dP/dtmax、LVDP增加(P<0.05），而LVEDP顯著下降(P<0.05）。CGRP+CGRP8-37+I/R組與I/R組比較，各心功能指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　1.2 CGRP對再灌后心

7、肌梗死面積的影響：
　　與I/R組相比，CGRP組的心肌梗死面積顯著下降（P<0.01），與CGRP組相比，CGRP+CGRP8-37+I/R組的心肌梗死面積顯著增加。
　　2、CGRP對體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行缺氧/復(fù)氧后cytC的影響
　　2.1成功建立乳鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)模型。
　　2.2成功建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型，心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后檢測其胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C的含量顯著增高。
　　2.3與N組比較，

8、除外CGRP組，其余各組胞漿cytC的釋放明顯增加（P<0.01）；與A/R組比較，CGRP組與DZ組cytC的釋放明顯減少（P<0.01）；與 CGRP+A/R組比較， CGRP+CGRP8-37+A/R組、5-HD+CGRP+A/R組、chelerythine+CGRP+A/R組胞漿 cytC的釋放量明顯增加(P<0.01）；與H-89+CGRP+A/R組比較，chelerythine+CGRP+A/R組胞漿cytC的釋放量明顯增加