hnRNPD在食管癌中表達(dá)及生物學(xué)功能研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:探索不均一核核糖核蛋白D(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D,hnRNPD)在人食管癌組織中的表達(dá)。通過沉默和過表達(dá)方式研究其在細(xì)胞水平對(duì)食管癌細(xì)胞株生長(zhǎng)的影響及作用機(jī)制。改變細(xì)胞表達(dá)水平聯(lián)合X射線對(duì)人食管癌細(xì)胞輻射敏感性的影響及可能機(jī)制。
  方法:用免疫組織化學(xué)染色法探索食管癌腫瘤組織及癌旁組織中 hnRNPD的蛋白表達(dá)差異;轉(zhuǎn)染siRNA-hnRNPD下調(diào)和pcDNA3.

2、1-hnRNPD過表達(dá)hnRNPD基因表達(dá)水平,采用MTT法及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)改變hnRNPD基因表達(dá)后食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)情況的變化;采用Annexin V-PE雙染色法檢測(cè)基因表達(dá)改變后細(xì)胞凋亡變化;熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)hnRNPD對(duì)SOD2-3’UTR的調(diào)控作用;JC-1熒光染色檢測(cè)細(xì)胞在X射線照射后線粒體膜電位變化;Western blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)水平變化。
  結(jié)果:hnRNPD在食管癌組織中高表達(dá);hnRNPD在食

3、管癌腫瘤組織中表達(dá)水平與腫瘤分期存在相關(guān)性。hnRNPD可以作用于SOD2-3’UTR參與SOD2表達(dá)調(diào)控并影響其蛋白表達(dá);hnRNPD基因表達(dá)的改變能明顯影響食管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和克隆形成能力;下調(diào) hnRNPD基因表達(dá)后,與對(duì)照組相比食管癌細(xì)胞 Eca-109凋亡明顯增加。hnRNPD與SOD2蛋白表達(dá)量隨X線照射劑量增加而增加;改變基因表達(dá)水平聯(lián)合輻射效應(yīng)影響食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)存活能力;射線照射引起線粒體膜電位降低,而轉(zhuǎn)染組與非轉(zhuǎn)染組未見

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