弓形蟲exosomes的生物學(xué)特性及其調(diào)節(jié)宿主免疫功能的研究.pdf

1、研究背景:弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲，呈世界性分布，可感染包括人和牲畜在內(nèi)的所有溫血?jiǎng)游?，引起人獸共患病的弓形蟲病，嚴(yán)重威脅人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展。目前，尚無理想的藥物用來防治弓形蟲病。因此，深入研究弓形蟲的致病機(jī)制，尋找新的防治弓形蟲病的藥物或疫苗顯得尤為重要。Exosomes是有核細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境的膜性小囊泡，直徑在30-100 nm之間。其中病原體分泌的exosomes具有一些特殊的生物學(xué)功能，如介導(dǎo)病原體與宿主的信息交流

2、、調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答等。然而，弓形蟲是否產(chǎn)生并分泌exosomes尚不清晰。
　　研究目的:從弓形蟲RH株和ME49株的速殖子培養(yǎng)上清液中分別提取并鑒定exosomes，評(píng)價(jià)弓形蟲exosomes對(duì)巨噬細(xì)胞和BALB/c小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，為尋找防治弓形蟲病的藥物或疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　研究方法:利用透射電鏡和Western blotting分析鑒定從弓形蟲速殖子培養(yǎng)液中獲取的exosomes形態(tài)結(jié)構(gòu)和表面標(biāo)志。用PKH67

3、綠色熒光染料對(duì)弓形蟲分泌的exosomes進(jìn)行染色后與RAW264.7巨噬細(xì)胞共孵育，在熒光顯微鏡下觀察exosomes與巨噬細(xì)胞融合情況，采用ELISA法檢測(cè)弓形蟲exosomes影響小鼠巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平。將弓形蟲exosomes經(jīng)肌肉注射免疫接種BALB/c小鼠，檢測(cè)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答來評(píng)價(jià)其作為抗弓形蟲候選疫苗的免疫保護(hù)效果。
　　結(jié)果:透射電鏡和WB檢測(cè)結(jié)果顯示，弓形蟲exosomes形態(tài)結(jié)構(gòu)呈圓

4、形或橢圓形、直徑大小在10-150 nm之間、含有蛋白分子P30和Hsp70。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，弓形蟲exosomes能與巨噬細(xì)胞融合，且能調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平。弓形蟲exosomes免疫接種BALB/c小鼠后能產(chǎn)生更高水平的IFN-γ、IL-12、IgG和IgG2a，小鼠的生存時(shí)間也明顯延長(zhǎng)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，弓形蟲exosomes誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生一定的體液免疫與細(xì)胞免疫，可為抵抗弓形蟲速殖子攻擊提供部分免疫保護(hù)力。